Place du laboratoire dans la prise en charge des patients atteints de

fièvre hémorragiques virale

MC Hernandez ericHIA Bégin, service de biologie

Introduction

• Fièvre hémorragique virale– toujours le samedi soir– si possible après 20 h 00– chez un malade grave– et bien sur « urgent »

Mais que veux donc le clinicien ?mais que peut faire le laboratoire ?

Objectifs de ce cours

• Présenter les agents des FHV et leur résistance

• Les prélèvements à réaliser

• Modalités de transport

• CAT au laboratoire pour le diagnostic et la prise en charge du patient

• Méthodes de diagnostic utilisables

Généralités

• Virus à ARN

• Enveloppés, fragiles dans le milieu extérieur

• Syndrome commun– hémorragies externes

– hémorragies internes

– état de choc

Famille Genre Virus Fièvre hémorragique

Flaviviridae Flavivirus Amaril

Dengue

Omsk

Kyasanur

Fièvre Jaune

Dengues

Fièvre hémorragique d’Omsk

M. forêt de Kyasanur

Bunyaviridae Phlebovirus

Nairovirus

Hantavirus

Rift Valley

Crimée-Congo

Hantaan

Puumala

Fièvre de la Vallée du Rift (FVR)

Fiévre Hémorragique de Crimée-Congo (CHF-C)

(FHSR)

Arenaviridae Arénavirus Junin

Machupo

Guanarito

Sabia

Lassa

Fièvre Hémorragique d’Argentine

FH de Bolivie

FH du Venezuela

Fièvre de Lassa

Filoviridae Filovirus Marburg

Ebola

Maladie de Marburg

Maladie à virus Ebola

Transmission nosocomiale

• Aérosols

• Contacts étroits avec un malade

• Fluides biologiques– urines

– sang

• Matériel souillé

Désinfection

• Virus fragiles dans le milieu extérieur

• Sensibles aux désinfectants– eau de Javel 3,6° Cl

déchets, déjections, produits biologiques

– eau de javel 0,5° Clmains nues, peau, petit matériel

– virucidie obtenue si > 0,15°Cl

Nota : (1° = 10000 ppm = 1 mg/L)

Désinfection (2)

• Matériel à usage unique– containers étanches, double emballage

– eau de javel 3° Cl (1% de chlore actif) ou éventuellement autoclavage avant incinération.

• Matériel réutilisable – matériel réutilisable ---> peroxyde d’hydrogène,

glutaraldéhyde eau de javel ou stérilisation par autoclavage

Prélèvements

• Diagnostic virologique

• Examens de prise en charge du patients

Diagnostic virologique

• Prélèvements sanguins ++– 2 tubes héparinés (anticoagulant)

Cultures, recherche des antigènes, RT-PCR

– 2 tubes secsRT-PCR, sérologie

• Tissus (patients décédés)foie, rate, cœur, poumons, rein ---> tous virus FHVpeau --> Ebola

Examens de prise en charge

• Limiter les analyses au strict nécessaire précautions de transport / pas de centrifugation

• NFS - plaquettes sur automate (bouchon fermé)

• hémostase (tube décanté, bouchon fermé, sur automate

• frottis pour recherche de paludisme (sous hotte)

• sérologies (sérum inactivé)

• transaminases, créatinine (sérum inactivé)

• bactériologie : hémocultures, LCR

• Assurer • protection du personnel (vêtements, masque, hotte….)

• traçabilité / élimination des déchets

Prélèvement

• Protection physique– tenue Tyvek – masque FFP3 – surblouse, – lunettes, – gants

• Utilisation de matériel de sécurité

• Application des précautions

standard

Etiquetage et renseignements cliniques

• Etiquetage – nom, prénom, date naisance, lieu naissance,– type prélèvement, – date, heure, – nom du préleveur

• Renseignements cliniques: indispensables

Importance des prélèvements

Prélèvements de bonne qualité

Levée de l ’isolement

Prise en charge efficace

Diagnostic précoce

Tertiaire

SecondairePrimaire

Documents

Transport au laboratoire (1)

Transport au laboratoire (2)

Envoi au LSB4 (1)

2 tubes secs 2 tubes héparinés

triple emballage

Transport + 4° C

Envoi laboratoire P4

Envoi au LSB4 (2)

• Prise de contact avec le centre de référence• CR des FHV (Hambourg), Laboratoire P4 Biomérieux (Lyon)

• Triple emballage agréé (ministère transport)

• Etiquetage conforme

• Document de bord• document de transport ou déclaration permanente

• document identifiant les marchandises et la quantité

• consignes en cas d’accident conservées dans la cabine, lues et comprises.

• Réserve au laboratoire: 1 tube sec + tube hépariné• Conservation - 20°C

Obligations du transporteur

• Véhicules fermés ou couverts• Matériel de transport et équipement

- moyens d’extinction incendie

- cale, deux signaux d’avertissement, baudrier ou vêtement fluorescent, lampe de poche.

• Prescriptions générales pour les conducteurs• formation aux prescriptions régissant ce type de transport

• verrouillage du compartiment chargé

• transport de voyageurs interdit

• utilisation des moyens d’extinction incendie

Délai minimal de transport et rendu des résultats 24 -36 heures

Traitement des examens de prise en charge au laboratoire

• Objectifs

– garantir la sécurité du personnel

– Servir le malade

– assurer la traçabilité des actions pour

• prise en charge

• diagnostic

• traitement

Tube citraté décanté:

Groupe sanguin - distribution en microplaque fermée, - désinfectée sous hotte

Sérologie biochimie: Inactivation du sérum sous hotte

• Triton 2% + Tributyril phosphate 2%, (45°C pendant 1 heure)

---> sérologies Test unitaire VIH MNI test---> transaminases---> créatinine

Au laboratoire déconditionnement sous hotte

Tube EDTA (passer tube eau javel)- NFS Plaquettes- frottis sanguin sous hotte fixation alcool Recherche paludisme- test rapide

Examens automatisés

• Priorité +++ – automates fermés

– tube primaires

– désinfection

– neutralisation des déchets

Tests rapides

Examens sur sérum inactivé

• Toutes les sérologies sont possibles

• La coagulation n’est pas fiable sauf PDF,

Fibrinogène et D-Dimères

PCR avec extraction automatique en laboratoire LSB3

Conclusion

• Prise en charge complexe

• Nécessité d’un minimum d ’examens biologiques dans l’intérêt du patient

• Les virus ne « sautent pas »

Faut-il attendre 24 -36 h pour faire un diagnostic de paludisme ?