Post on 03-Apr-2015
Hépatites A, Hépatites A,
l’intérêt de la PCRl’intérêt de la PCR
Les 8éme Journées de RHEVIRLes 8éme Journées de RHEVIR23/09/05 23/09/05
BENOIT PONSEILLÉBENOIT PONSEILLÉ
Hépatites A, Hépatites A,
l’intérêt de la PCRl’intérêt de la PCR
Les 8éme Journées de RHEVIRLes 8éme Journées de RHEVIR23/09/05 23/09/05
BENOIT PONSEILLÉBENOIT PONSEILLÉ
IntroductionIntroduction
11èreère cause d’hépatite aiguë chez l’enfant cause d’hépatite aiguë chez l’enfant– Pays sous développé Pays sous développé – Pays industrialiséPays industrialisé
Transmission:Transmission:– oro-fécale +++ oro-fécale +++ – parentérale (facteur VIII)parentérale (facteur VIII)
Virus ARN simple brinVirus ARN simple brin Virus nu résistant ++Virus nu résistant ++
Moyens diagnostics Moyens diagnostics
Diagnostic indirect ++Diagnostic indirect ++– Sérologie : ELISA Sérologie : ELISA
Diagnostic directDiagnostic direct– Culture Culture – Antigénémie Antigénémie – Recherche du génome par PCRRecherche du génome par PCR
IgM= Hépatite aigue
Technique d’amplification Technique d’amplification génomique: PCRgénomique: PCR
Faible variabilité génomique entre les Faible variabilité génomique entre les souchessouches
Virus à ARN Virus à ARN
Nécessité de quantification de la virémieNécessité de quantification de la virémie
Reverse transcription PCR ( RT-Reverse transcription PCR ( RT-PCR)PCR)
PCR quantitative en temps réel
RT- PCR qualitative ciblé sur 3 régions RT- PCR qualitative ciblé sur 3 régions différentes (VP3/VP1;VP1/VP2;VTR)différentes (VP3/VP1;VP1/VP2;VTR)
Technique « maison »Technique « maison » Très sensible et spécifiqueTrès sensible et spécifique Pas de quantificationPas de quantification
Technique d’amplification Technique d’amplification génomique: PCRgénomique: PCR
Technique d’amplification Technique d’amplification génomique: PCRgénomique: PCR
RT PCR kit light cyclerRT PCR kit light cycler– Kit commercialKit commercial– facile d’utilisation facile d’utilisation – Permet quantification gamme d étalonnagePermet quantification gamme d étalonnage
DiagnosticDiagnostic– Précocité du diagnosticPrécocité du diagnostic
Virémie présente:Virémie présente:– 30 jours avant survenue des symptômes30 jours avant survenue des symptômes– en moyenne 10 jours avant l’apparition des en moyenne 10 jours avant l’apparition des
IgM.IgM.
80% PCR HAV + 14 jours avant80% PCR HAV + 14 jours avant
le pic ALTle pic ALT
Virémie persiste 70 jours Virémie persiste 70 jours
Intérêt de la PCR Intérêt de la PCR
- Contagiosité- Contagiosité Charge virale moyenne retrouvée:Charge virale moyenne retrouvée:
– Sanguine: 10.5 cp/mlSanguine: 10.5 cp/ml– Selles : 10.9 cp/mlSelles : 10.9 cp/ml– Salive : 10.3 cp/mlSalive : 10.3 cp/ml– Urines : pas excrétion urinaireUrines : pas excrétion urinaire
Voie sanguine 10.4 + infectieux que voie fécaleVoie sanguine 10.4 + infectieux que voie fécale
PCR HAV + dans les sellesPCR HAV + dans les selles– 49 jours en moyenne49 jours en moyenne– 21 jours après début symptômes 21 jours après début symptômes
Intérêt de la PCRIntérêt de la PCR
Intérêt de la PCRIntérêt de la PCR
– Quantification charge virale sérique Quantification charge virale sérique (CHU Lapeyronie, service virologie)(CHU Lapeyronie, service virologie)
Age Age SexeSexe IgMIgM PCR(IU/PCR(IU/ml)ml)
11 6363 MM ++ 2,6. 102,6. 10³³22 2828 MM ++ 37. 1037. 10³³33 4545 MM ++ 3,3. 103,3. 10³³44 2727 MM ++ 9,2. 109,2. 10³³55 3636 MM ++ 0,25. 100,25. 10³³66 2626 MM ++ 1. 101. 10³³77 4747 MM ++ 4 . 104 . 10³³88 1414 MM ++ 11 . 1011 . 10³³99 77 MM ++ 32 . 1032 . 10³³1010 4040 FF ++ 55 . 1055 . 10³³1111 3434 MM ++ 4,2 . 104,2 . 10³³
Pronostic Pronostic – Pas corrélation entre charge virale/ durée virémie et Pas corrélation entre charge virale/ durée virémie et
gravitégravité– Cas à part: Hépatite fulminante Cas à part: Hépatite fulminante
Virémie indétectable ou effondréeVirémie indétectable ou effondrée Faible virémie = marqueur fortement associé à une Faible virémie = marqueur fortement associé à une
défaillance hépatique ( réponse immunitaire) défaillance hépatique ( réponse immunitaire)
Intérêt de la PCR Intérêt de la PCR
-Aide au choix de la transplantation;
Encéphalopathie +V effondré+ virémie indétectable
EpidemiologiqueEpidemiologique
– Séquencage du virus amplifié génotype des virusSéquencage du virus amplifié génotype des virus
Intérêt de la PCR Intérêt de la PCR
Génotype Ia et Ib les plus Génotype Ia et Ib les plus fréquentsfréquents
- Impact du génotype - Impact du génotype
• aucun sur la charge virale et virulenceaucun sur la charge virale et virulence• Virémie plus longue en cas de Génotype IaVirémie plus longue en cas de Génotype Ia
− Différenciation cas isolé – début d’épidémieDifférenciation cas isolé – début d’épidémie