Hépatites A, Hépatites A,

l’intérêt de la PCRl’intérêt de la PCR

Les 8éme Journées de RHEVIRLes 8éme Journées de RHEVIR23/09/05 23/09/05

BENOIT PONSEILLÉBENOIT PONSEILLÉ

Hépatites A, Hépatites A,

l’intérêt de la PCRl’intérêt de la PCR

Les 8éme Journées de RHEVIRLes 8éme Journées de RHEVIR23/09/05 23/09/05

BENOIT PONSEILLÉBENOIT PONSEILLÉ

IntroductionIntroduction

11èreère cause d’hépatite aiguë chez l’enfant cause d’hépatite aiguë chez l’enfant– Pays sous développé Pays sous développé – Pays industrialiséPays industrialisé

Transmission:Transmission:– oro-fécale +++ oro-fécale +++ – parentérale (facteur VIII)parentérale (facteur VIII)

Virus ARN simple brinVirus ARN simple brin Virus nu résistant ++Virus nu résistant ++

Moyens diagnostics Moyens diagnostics

Diagnostic indirect ++Diagnostic indirect ++– Sérologie : ELISA Sérologie : ELISA

Diagnostic directDiagnostic direct– Culture Culture – Antigénémie Antigénémie – Recherche du génome par PCRRecherche du génome par PCR

IgM= Hépatite aigue

Technique d’amplification Technique d’amplification génomique: PCRgénomique: PCR

Faible variabilité génomique entre les Faible variabilité génomique entre les souchessouches

Virus à ARN Virus à ARN

Nécessité de quantification de la virémieNécessité de quantification de la virémie

Reverse transcription PCR ( RT-Reverse transcription PCR ( RT-PCR)PCR)

PCR quantitative en temps réel

RT- PCR qualitative ciblé sur 3 régions RT- PCR qualitative ciblé sur 3 régions différentes (VP3/VP1;VP1/VP2;VTR)différentes (VP3/VP1;VP1/VP2;VTR)

Technique « maison »Technique « maison » Très sensible et spécifiqueTrès sensible et spécifique Pas de quantificationPas de quantification

Technique d’amplification Technique d’amplification génomique: PCRgénomique: PCR

Technique d’amplification Technique d’amplification génomique: PCRgénomique: PCR

RT PCR kit light cyclerRT PCR kit light cycler– Kit commercialKit commercial– facile d’utilisation facile d’utilisation – Permet quantification gamme d étalonnagePermet quantification gamme d étalonnage

DiagnosticDiagnostic– Précocité du diagnosticPrécocité du diagnostic

Virémie présente:Virémie présente:– 30 jours avant survenue des symptômes30 jours avant survenue des symptômes– en moyenne 10 jours avant l’apparition des en moyenne 10 jours avant l’apparition des

IgM.IgM.

80% PCR HAV + 14 jours avant80% PCR HAV + 14 jours avant

le pic ALTle pic ALT

Virémie persiste 70 jours Virémie persiste 70 jours

Intérêt de la PCR Intérêt de la PCR

- Contagiosité- Contagiosité Charge virale moyenne retrouvée:Charge virale moyenne retrouvée:

– Sanguine: 10.5 cp/mlSanguine: 10.5 cp/ml– Selles : 10.9 cp/mlSelles : 10.9 cp/ml– Salive : 10.3 cp/mlSalive : 10.3 cp/ml– Urines : pas excrétion urinaireUrines : pas excrétion urinaire

Voie sanguine 10.4 + infectieux que voie fécaleVoie sanguine 10.4 + infectieux que voie fécale

PCR HAV + dans les sellesPCR HAV + dans les selles– 49 jours en moyenne49 jours en moyenne– 21 jours après début symptômes 21 jours après début symptômes

Intérêt de la PCRIntérêt de la PCR

Intérêt de la PCRIntérêt de la PCR

– Quantification charge virale sérique Quantification charge virale sérique (CHU Lapeyronie, service virologie)(CHU Lapeyronie, service virologie)

Age Age SexeSexe IgMIgM PCR(IU/PCR(IU/ml)ml)

11 6363 MM ++ 2,6. 102,6. 10³³22 2828 MM ++ 37. 1037. 10³³33 4545 MM ++ 3,3. 103,3. 10³³44 2727 MM ++ 9,2. 109,2. 10³³55 3636 MM ++ 0,25. 100,25. 10³³66 2626 MM ++ 1. 101. 10³³77 4747 MM ++ 4 . 104 . 10³³88 1414 MM ++ 11 . 1011 . 10³³99 77 MM ++ 32 . 1032 . 10³³1010 4040 FF ++ 55 . 1055 . 10³³1111 3434 MM ++ 4,2 . 104,2 . 10³³

Pronostic Pronostic – Pas corrélation entre charge virale/ durée virémie et Pas corrélation entre charge virale/ durée virémie et

gravitégravité– Cas à part: Hépatite fulminante Cas à part: Hépatite fulminante

Virémie indétectable ou effondréeVirémie indétectable ou effondrée Faible virémie = marqueur fortement associé à une Faible virémie = marqueur fortement associé à une

défaillance hépatique ( réponse immunitaire) défaillance hépatique ( réponse immunitaire)

Intérêt de la PCR Intérêt de la PCR

-Aide au choix de la transplantation;

Encéphalopathie +V effondré+ virémie indétectable

EpidemiologiqueEpidemiologique

– Séquencage du virus amplifié génotype des virusSéquencage du virus amplifié génotype des virus

Intérêt de la PCR Intérêt de la PCR

Génotype Ia et Ib les plus Génotype Ia et Ib les plus fréquentsfréquents

- Impact du génotype - Impact du génotype

• aucun sur la charge virale et virulenceaucun sur la charge virale et virulence• Virémie plus longue en cas de Génotype IaVirémie plus longue en cas de Génotype Ia

− Différenciation cas isolé – début d’épidémieDifférenciation cas isolé – début d’épidémie