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PROTEINE -C- REACTIVE (CRP)

Réaction d’agglutination au LATEX

Par S / Abdessemed

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Définition• Synthétisée principalement par le

foie, sa demi-vie est de 6 heures. • Nommée ainsi parce qu'elle est

précipitable par un polysaccharide extrait de la capsule du pneumocoque.

• C'est un examen biochimique sensible, précoce, non spécifique.

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• Il n'existe pas de déficit congénital connu de cette molécule.

• Elle migre dans les béta ou gamma-globulines à l'électrophorèse.

• Le tracé n'est le plus souvent pas modifié lorsque la CRP est < à 100.

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• C'est une protéine de l'inflammation, dont le taux peut être multiplié par 500 à 1000 lors d'inflammations aiguës.

• Sa valeur normale est inférieure à 10-12 mg/l.

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• Dans le cadre des infections, la CRP reste normale en cas de virose. Elle ne s'élève qu'en cas d'infection bactérienne et diminue rapidement dans les 48 heures d'une antibiothérapie bien conduite

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• L'élévation du taux de CRP est également un facteur pronostic: plus l'élévation est rapide et importante, plus l'inflammation est sévère

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Principe • Le test PCR- Latex est un test

d’agglutination rapide pour la détection directe et semi quantitative sur carte de protéine C- réactive (PCR).

• Le réactif, est une suspension de particules de latex recouvertes d’anticorps anti- PCR humaine, qui s’agglutinent en présence de PCR dans le sérum des patients.

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Réactifs

• PCR- Latex. Suspension de particules de latex recouvertes d’anticorps anti- PCR humaine, azide de sodium 0.95 g/l. la préparation est calibrée de manière à détecter entre 6mg/L et 250 mg/L de PCR.

• Contrôle positif. Sérum humain, azide de sodium 0,95 g/l.

• Contrôle négatif. Sérum animal, azide de sodium 0,95 g/l.

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• Matériel: - Agitateur réglable à 100 r.p.m - Cartes tests - Agitateurs à usage unique• Echantillon: - Sérum : stable pendant 48h à 2-8°C. - Les sérums hémolysés et lipémiques ne sont pas adéquats pour le test ; ils risquent de donner des résultats erronés.

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PROTOCOLE

• Préalablement, sortir les réactifs et les laisser s’équilibrer à la température de la pièce

• Déposer 50µl d’échantillon et une goutte de chaque contrôle dans les cercles individualisés sur la carte test.

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• Agiter légèrement le flacon de latex avant de l’utiliser.

• Déposer une goutte de réactif PCR- Latex dans chaque cercle près de l’échantillon à tester.

• Mélanger avec un agitateur à usage unique de manière à recouvrir totalement l’ère définie par le cercle. Utiliser un nouvel agitateur pour chaque échantillon.

• Faire tourner la carte à 100 r.p.m. pendant 2 minutes

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Lecture et Interprétation• Aprés avoir retiré la carte de

l’agitateur rotatif, examiner à l’œil nu la présence ou l’absence d’agglutination dans la minute qui suit, • Une

agglutination visible indique la présence de protéine -C- réactive ≥ 6mg/L

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• Un sérum positif doit être titré. Pour titrer. Faire des dilutions sériées de deux en deux dans une solution saline à 9 g /l.

• le titre d’un sérum est défini comme étant la plus grande dilution donnant un résultat positif.

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• La concentration approximative d’un sérum en PCR (mg /L) peut être obtenu en multipliant le titre par la limite de sensibilité (6mg/L).

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C'est l'association à la VS de 3 protéines de la réaction inflammatoire qui permet de diagnostiquer, quantifier, dater et suivre la réaction inflammatoire en couplant une protéine de cinétique rapide ( CRP) et deux protéines à cinétique lente (ORO et HTP )

L'exemple du schéma associé ( septicémie à E.Coli chez une femme de 40 ans ) montre que alors que la VS n'est pas encore modifiée à J 10, le profil protéique confirme la guérison clinique

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Apprécier l'ancienneté de la réaction inflammatoireLes différences de cinétique des 3 protéines permettent de différencier les réactions aigués des réactions chroniques---- La CRP synthétisée dés la 8ème heure atteint sa concentration maximum en 24 heures.---- L'orosomucoïde et l'haptoglobine sont décalées d'environ 24 heures.

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Limites de la Méthode

• Des facteurs rhumatoïdes dans l’échantillon interfèrent dans le dosage de la protéine C- réactive.

• L’interférence est éliminée (< 125UI/ml) à l’aide d’un absorbant.

• Ajouter1 goutte d’absorbant sur chaque échantillon avant de déposer le latex.

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NOTES• la sensibilité du test diminue à basse

température. Les meilleurs résultats sont obtenus à des températures supérieures à 10°C.

• une lecture différée peut résulter en une surestimation du titre de PCR.

• L’importance de l’agglutination n’est pas indicatrice de la concentration en PCR dans les échantillons testés

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• les sérums contenant de fortes concentrations de protéine - C- réactive peuvent donner des réactions faussement négatives (effet de pro zone).

• il est conseillé de retester tous les échantillons négatifs en n’utilisant que 10µl de l’échantillon

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