Le frottis de sang normal

I. La réalisation du frottis

1)1)Dépôt d’une goutte de sang sur une lame Dépôt d’une goutte de sang sur une lame de verrede verre 1. Nettoyer 2 lames à

l’alcool (faces et tranches), les sécher avec du papier absorbant, les déposer sur papier absorbant.

2. Prélever une goutte de sang dilué à l’aide du compte-goutte.

Déposer la goutte de sang à l’extrémité d’une lame

2) Mis en contact de la lamelle avec le sang2) Mis en contact de la lamelle avec le sang

3. Appliquer une autre lame inclinée à 45° en avant de la goutte de sang de façon que le sang s’étale sous la lame par capillarité

3) Réalisation du frottis3) Réalisation du frottis

4. Faire glisser la lame inclinée à 45° pour étaler uniformément la goutte5. Secher le frottis

Coloration au May-Grünwald Giemsa

1- Fixation

Placer la lame du frottis sur un support horizontal au dessus d’un bac de coloration.Verser sur la lame 15 gouttes de colorant May-Grünwald pur de façon à recouvrir complètement le frottis. Laisser agir 3 minutes.

2- Coloration au May-Grünwald

Ajouter autant de gouttes d’eau neutre que de gouttes de colorant, le mélange est rapide.Laisser agir 2 minutes. Rejeter le colorant par un jet d’eau neutre.

• 3- Coloration au Giemsa

Préparer la dilution du Giemsa pendant les 3 minutes précédentes : pour cela introduire 20 cm3 d’eau neutre dans une éprouvette graduée, ajouter 30 gouttes de colorant de telle manière que celui-ci reste à la surface de l’eau neutre.

Verser le contenu de l’éprouvette dans une boîte de Laveran. Dès que la lame est prête, mélanger en agitant doucement (le pouvoir colorant est maximum au moment du mélange).

Déposer la lame (frottis en dessous) dans la boîte, laisser agir 20 minutes (Giemsa lent).

• Rincer sous un jet d’eau neutre.

• 4- Séchage

Laisser sécher la lame à l’air, en position inclinée, après avoir essuyé la face inférieure de la lame avec du papier filtre.

Attendre au moins 5 minutes avant l’examen microscopique du frottis.

Les cellule du sang

• Les hématies (ou globules rouges)

• Les leucocytes (ou globules blancs) – Polynucléaires

• Neutrophiles• Éosinophiles• Basophiles

– Mononucléaires • Lymphocytes• Monocytes

• Les plaquettes (ou thrombocytes)

Formule leucocitaire normale

• Chaque type de leucocyte est présent dans le sang en proportions différentes

Neutrophiles, de 50 à 70 %

Eosinophiles, de 2 à 4 %

Basophiles, de 0,5 à 1 %

Lymphocytes, de 20 à 40 %

Monocytes, de 3 à 8 %

Les hématies

Forme biconcave, diamètre de 7 micromètre qui transportent l'oxygène dans le sang

Diamètre : 7,5 µmNoyau : anucléés

Cytoplasme : pas de granulations

Malformations des hématies• Acanthocytes (spicules et projections de la

surface – associée avec un métabolisme anormal des

lipides

Malformations des hématies

• Drépanocyte – en forme de faux – Drépanocytose ( ) anémie à cellules falciformes

Malformations des hématies

• Elliptocytes

Malformations des hématies

• Schizocytes, ou fragmentocytes (synonyme)

Malformations des hématies

• Stomatocytes

Malformations des hématies

• Réticulocyte (caractérise des hématies jeunes dont la proportion dans la circulation est appelée réticulocytose)

II. MICROSCOPIE

Caractères cytologiquesCaractères cytologiques

Caractères cytologiques des Caractères cytologiques des HEMATIESHEMATIES::

• Très nombreuses• De couleur rose

uniforme en périphérie et plus claires au centre

• Taille moyenne (environ 7 µm de diamètre)

• Absence de noyau: ce sont des cellules anuclées

Caractères cytologiques des Caractères cytologiques des granulocytes: Neutrophilesgranulocytes: Neutrophiles

Diamètre : 15 µm

Noyau : polylobé (3 ou 4 lobes en général - réunis par de fines bandes de chromatine.

Cytoplasme : deux types de granulations : azurophiles non spécifiques peu nombreuses et neutrophiles spécifiques nombreuses.

Les granulocytes: Éosinophile

Diamètre : 15 µm Noyau : souvent bilobé. Cytoplasme : grosses

granulations arrondies éosinophiles (rouge).

Les granulocyte: Basophile

Diamètre : 13 à 15 µm

Noyau : aspect en trèfle, souvent masqué par de grosses granulations.

Cytoplasme : grosses granulations irrégulières et nombreuses basophiles (bleu-violet).

Les agranulocyte: Lymphocytes

Diamètre : 10 à 15 µm

Noyau : arrondi, parfois légèrement incurvé.

Cytoplasme : quelques granulations azurophiles.

Les agranulocyte: Monocyte

Diamètre : 20 à 30 µm

Noyau : irrégulier, chromatine « peignée », encoché (en forme de rein).

Cytoplasme : granulations fines et nombreuses, azurophiles. Souvent présence de vacuoles.

PLAQUETTES ou PLAQUETTES ou THROMBOCYTESTHROMBOCYTES::

• Assez nombreuses

• Taille très faible (2 à 3 µm)

• Souvent agglutinées

• Dépourvues de noyau: ce sont des cellules anuclées