riser grâce au test salin (encadré). La présence derouleaux peut être secondaire à une augmenta-tion des concentrations en protéines, en particu-lier les globulines, rencontrée lors d’un processusinflammatoire (péritonite infectieuse féline, ehrli-chiose, etc.) ou néoplasique (myélome multipleou lymphome) [13]. La formation de rouleaux estfréquente chez des chats sains, alors qu’elle est leplus souvent pathologique chez le chien.L’agglutination s’explique par la présence d’im-munoglobulines (IgM surtout) liées à la surfacedes érythrocytes et se retrouve souvent lors d’ané-mie hémolytique à médiation immune (AHMI)[10].

Taille1. Augmentation de taille

Les macrocytes (érythrocytes de taille augmen-tée) s’observent typiquement lors d’anémie régé-nérative en raison de la présence de polychroma-tophiles dont le volume cellulaire est supérieur àcelui des érythrocytes matures (la variation duvolume des érythrocytes s’appelle anisocytose).

L ’évaluation ordonnée des érythrocytes au frottissanguin est une étape importante de la démarche

diagnostique de nombreuses affections. Elle estcomplémentaire de l’analyse de la numération et dela formule sanguines. Dans certains cas, elle permetaussi d’établir directement le diagnostic.

DistributionLa distribution des érythrocytes est évaluée dansla couche mince du frottis sanguin (tableau).Dans cette zone, ces cellules sont le plus souventdisposées isolément et il est alors plus aisé d’esti-mer leur densité. Chez un animal qui présenteune anémie modérée ou sévère, comparé à unanimal sain, la densité des érythrocytes de lacouche mince apparaît en général nettementdiminuée (plus d’espace entre les cellules)(photos 1a et 1b). Dans cette zone, les érythrocytespeuvent aussi être agglutinés ou former des rou-leaux (photos 2 et 3). Il est important de distin-guer les rouleaux de l’agglutination car leur signi-fication est différente. Lorsque les érythrocytessont arrangés en rouleaux, à l’image de pièces demonnaie empilées, il est possible de les désolida-

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Frottis sanguin :évaluation des érythrocytes

L’évaluation des érythrocytes est une étape importante de l’examendu frottis sanguin. Elle permet d’apporter un grand nombred’informations si elle est systématique et ordonnée.

Hématologie du chien et du chat

par Nicolas Pouletty

VETODIAG6 Route du Robillard14170 Berville02 31 41 00 00contact@vetodiag.frwww.vetodiag.fr

L’examen complet desérythrocytes se réalise à lalecture de la couche mincedu frottis sanguin. Il comprendl’évaluation de leurdistribution, de leur taille, deleur forme et de leur couleur.La présence de structuresanormales (corps de Heinz,nucléation, parasites, etc.) estaussi à rechercher. La sommedes informations récoltées estcomplémentaire de lanumération et de la formulesanguines, et suffit parfois àétablir le diagnostic, commelors d’infestation parasitaireà Babesia canis ou àMycoplasma hæmofelis.

RÉSUMÉ

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Tableau : Examen des érythrocytes : évaluation de leur distribution,de leur taille, de leur forme et de leur couleur

Densité Taille Forme Couleur Inclusions parasitesDiminution :anémie

• Macrocytose :anémierégénérative, leucoseféline, etc.• Microcytose :déficience en fer,shunt porto-systémique

• Acanthocytes,schizocytes, kératocytes :hémangiosarcome, CIVD,etc.• Sphérocytes : hémolyseà médiation immunitaire• Échinocytes : artefactle plus souvent

Hypochromie :déficienceen fer

• Corps de Heinz,eccentrocytes :dommages oxydatifs• Corps d’Howell-Jolly :anémie régénérative,etc.• Parasites : Babesiacanis, Mycoplasmahæmofelis, etc.

CIVD : coagulation intravasculaire disséminée.

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Les polychromatophiles sont reconnaissables àleur couleur légèrement basophile qui s’expliquepar la présence de ribosomes qui se colorent enbleu (photo 5) [4]. De façon pratique, chez unchien ou un chat anémié, et quel que soit le degréd’anémie, l’observation de deux à quatre poly-chromatophiles par champ (× 1 000) peut êtreconsidérée comme un signe de régénération. Lecomptage des réticulocytes (globules rouges [GR]caractérisés, lors de la coloration au nouveau bleude méthylène [NBM], par la présence d’inclu-sions bleu foncé agrégées ou isolées dans leurcytoplasme) est la méthode standard pour confir-mer qu’une anémie est bien régénérative(photo 6). Toutefois, une très faible proportion deces cellules peut être retrouvée en circulation chezdes chiens et des chats sains, soit environ un poly-chromatophile pour 100 à 200 érythrocytes [11].La macrocytose peut aussi être présente dansd’autres circonstances que l’anémie régénérative.Dans ce cas, seulement une anisocytose est ren-contrée sans polychromatophilie. Les chatsatteints par le virus de la leucose féline (FeLV)présentent souvent une macrocytose secondaire àune dysérythropoïèse provoquée par le virus. Uneanémie peut accompagner cette maladie virale, etêtre régénérative ou non (en fonction du staded’évolution de la maladie) [6]. De façon plusanecdotique, les macrocytes peuvent être présentsde façon normale chez les lévriers et certainscaniches miniatures [6].

2. Diminution de tailleLes microcytes (érythrocytes de taille diminuée)se retrouvent lors d’anémie par déficience en fer(déficit d’apport, fuite chronique de sang), deséquestration en fer (syndrome inflammatoire,bien que cette condition conduise souvent à uneanémie normocytaire normochrome), de shuntporto-systémique et, de façon plus anecdotique,chez certaines races de chiens comme l’akita inu,mais sans conséquence pathologique [3].

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Encadré : Test salin

Ce test simple consiste à mettre deux à quatregouttes de soluté physiologique en contact avecune goutte de sang, puis à observer au microscopeune petite quantité de ce mélange placée entre lameet lamelle, sans séchage ni coloration.Si les érythrocytes se dispersent à la suite de ce test,il s’agit de rouleaux. S’ils restent attachés entre eux,en grappe, cela confirme qu’il s’agit d’une aggluti-nation (photo 4).

Vue au microscope (× 200). Test salin positiffondé sur la persistance de l’agglutinationdes érythrocytes chez un chien.

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope (× 500) chez un chien atteint d’anémie hémolytiqueà médiation immunitaire. Noter l’agglutination des érythrocytes.

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope (× 1 000) chez un chat sain. Des érythrocytes sontdisposés en rouleaux.

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope (× 500). Couche mince d’un chien saincomparé à un chien anémique .Chez le second, le nombre d’érythrocytes est moins important.

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longueur et de largeur inégales à la surface de lamembrane (photo 8). Leur formation peut êtresecondaire à une augmentation du rapport cho-lestérol/phospholipides membranaires lors d’hy-percholestérolémie, à une lipidose hépatique ou àune cholangiohépatite chez le chat, ou à un shuntporto-systémique chez le chien [8, 10]. Unemicroangiopathie, provoquant des dommagesaux érythrocytes, peut également engendrer laformation d’acanthocytes (coagulation intravas-culaire disséminée, hémangiosarcome, gloméru-lonéphrite, etc.) [4].

3. Kératocytes et schizocytesLes kératocytes sont des érythrocytes qui possè-dent deux projections pointues convergentes quipeuvent se réunir à leur extrémité (photo 9). Lesschizocytes ont une morphologie fortement alté-rée et apparaissent comme des fragments d’éry-throcytes aux extrémités pointues. Comme pourles acanthocytes, ces cellules sont observées leplus souvent à la suite de microangiopathies [4].

4. ÉchinocytesLes échinocytes sont des érythrocytes hérissés defines et courtes projections pointues de longueur

Forme1. Sphérocytes

Les sphérocytes sont des érythrocytes de petit dia-mètre qui apparaissent plus foncés et sans pâleurcentrale, comparés à ceux de la couche mince(photo 7). Les érythrocytes en tête de frottis san-guin sont naturellement plus denses et sanspâleur centrale, et peuvent être confondus avecdes sphérocytes.Chez le chien, les sphérocytes se retrouvent typi-quement lors d’AHMI et sont en général associésà une agglutination (plus de 80 % des chiensatteints présentent une sphérocytose significativeet plus de 30 % une agglutination). La sphérocy-tose est significative lorsque plus de 20 % de sphé-rocytes par champ sont observés [10].Chez le chat, bien que l’AHMI soit très rare, lessphérocytes sont difficiles à différencier des éry-throcytes car ces derniers ne présentent pas depâleur centrale.

2. AcanthocytesLes acanthocytes sont des érythrocytes qui possè-dent des projections cytoplasmiques espacées, de

Hématologie du chien et du chat | Frottis sanguin : évaluation des érythrocytes

Le Point Vétérinaire / Mai 2010 / N° 305 31

Lecture d’un frottis sanguin au microscope (× 1 000) chez un chien sain. Unepolychromatophilie est diagnostiquée.

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Lecture du frottis sanguin au microscope (× 1 000) chez un chien anémique. Des réticulocytessont visibles (présence d’inclusions bleu foncé dansle cytoplasme) après coloration au nouveau bleude méthylène.

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Lecture d’un frottissanguin au microscope (× 500) chez un chien atteintd’anémie hémolytique àmédiation immune. Noterla présence de nombreuxsphérocytes (flèches).

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope (× 1 000) chez un chien atteint d’unhémangiosarcome de la rate. Des acanthocytes sont notés (flèches).

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope(× 1 000) chez un chien atteint d’unhémangiosarcome de la rate. Présence de kératocytes (flèche).

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Structuresanormaleset érythroblastes1. Structures anormales

Corps de Heinz et eccentrocytesLes corps de Heinz (CH) comme les eccentro-cytes surviennent à la suite d’un dommage oxy-datif des érythrocytes.Les CH correspondent à une protubérance roséeou à une inclusion pâle près de la membrane(photo 12). Les eccentrocytes sont des érythro-cytes coiffés d’une structure claire en forme decroissant, qui jouxte la membrane (photo 13).Chez le chien et le chat, les causes d’anémie à CHet à eccentrocytes sont d’origine alimentaire(oignons par exemple), médicamenteuse (paracé-tamol, etc.) ou toxique (zinc, etc.) [1, 2]. Chez unchat normal, de rares érythrocytes peuvent

égale, réparties uniformément à la surface de lamembrane (photo 10). Habituellement, leur pré-sence est un artefact morphologique secondaire àun excès d’EDTA, ou à un délai prolongé entre leprélèvement de sang et l’étalement du frottis.Leur présence est donc, le plus souvent, nonsignificative.Toutefois, leur nombre peut augmenter dans cer-taines conditions pathologiques, par exemple encas d’azotémie [4].

CouleurLes polychromatophiles et leurs circonstancesd’apparition sont liés à la présence d’une anémierégénérative.Les érythrocytes matures hypochromes présen-tent une pâleur centrale plus importante car ilspossèdent une concentration en hémoglobineplus basse que la normale (photo 11). Leur présen-ce est, en général, associée à une anémie par défi-cience en fer (hémorragie externe chronique parexemple) [4].

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope(× 1 000) chez un chien sain. Des échinocytesprobablement secondaires à un artefactde préparation sont observés (flèches).

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope(× 500) chez un chien présentant des pertes de sangchroniques intestinales. Une hypochromie (flèches)secondaire à une déficience en fer est diagnostiquée.

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope(× 1 000) chez un chat intoxiqué au paracétamol.Noter la présence de corps de Heinz (flèches).

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope(× 1 000) chez un chien intoxiqué aux oignons.Présence d’eccentrocytes (flèches).

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Le frottis sanguin est un outil diagnostique trèsutile et facile à mettre en œuvre. L’examen des GRpeut fournir d’importantes informations quicontribuent grandement au cheminement dia-gnostique. Par exemple, une anémie hypochromeindique en général une déficience en fer, ce quioriente vers des pertes de sang externes chro-niques. La présence d’acanthocytes en circulationindique des dommages mécaniques aux érythro-cytes, compatibles avec un hémangiosarcome,une hypertension rénale, etc. Parfois même, undiagnostic définitif peut être posé. Ainsi, une ané-mie régénérative associée à la présence de sphéro-cytes et d’une agglutination permet de poser lediagnostic d’AHMI. ■

présenter des CH (jusqu’à 5 %). Leur nombre peutaugmenter chez un chat malade non anémiquelors d’un diabète sucré, d’hyperthyroïdie ou delymphome.

Corps d’Howell-JollyLes corps d’Howell-Jolly sont des fragments denoyau qui n’ont pas été éliminés des érythrocytes.Ils sont rencontrés lors d’anémie régénérative oude splénectomie. Ils sont aussi observés à l’état nor-mal, en faible pourcentage, surtout chez le chat [4].

ParasitesDes parasites peuvent être retrouvés au sein desérythrocytes. Deux le sont fréquemment : Babesiacanis chez le chien et Mycoplasma hæmofelis(anciennement Hemobartonella felis) chez le chat(photos 14 et 15). Le premier a une forme de poire,se trouve souvent en paire et est incolore à bleuclair avec un noyau rouge à pourpre (colorationWright-Giemsa®). Le second, Mycoplasma hæmo-felis, est attaché à la surface des érythrocytes, secolore en bleu foncé (coloration Wright-Giemsa®), et peut prendre la forme d’une coque,d’un anneau ou d’un bâtonnet.

2. ÉrythroblastesLes érythroblastes sont des GR nucléés qui repré-sentent des stades immatures d’érythrocytes. Engénéral, ils sont libérés par la moelle osseuse lorsd’un important effort de régénération chez unanimal anémique. Toutefois, Ils peuvent égale-ment indiquer un trouble de la moelle osseuse ouun désordre splénique (photo 16) [4, 5].

Hématologie du chien et du chat | Frottis sanguin : évaluation des érythrocytes

Le Point Vétérinaire / Mai 2010 / N° 305 33

Références1 - Desnoyers M. Anemias associatedwith Heinz bodies. In: Schalm’sveterinary hematology. 5th ed.Ed. Lippincott William & Wilkins,Baltimore. 2000:178-184.2 - Harvey JW. Methemoglobinemia andHeinz-body haemolytic anemia. In:Kirk’s current veterinary therapy XII.Small Anim. Pract. Ed.WB Saunders,Philadelphia. 1995:443-446.3 - Harvey JW. Microcytic anemias.In: Schalm’s veterinary hematology.

5th ed. Ed. Lippincott William & Wilkins,Baltimore. 2000:200-204.

4 - Harvey JW. Atlas of veterinaryhematology: blood and bone marrow of domestic animals. Ed.WB Saunders.2001:228p.

5 - Jain NC. Essentials of veterinaryhematology. Ed. Lea & Febiger, Malvern.1993:417p.

6 - Kociba GJ. Macrocytosis. In: Schalm’sveterinary haematology. 5th ed.

Ed. Lippincott William & Wilkins,Baltimore. 2000:196-199.7 - Stockham SL, Scott MA.Fundamentals of veterinary clinicalpathology. 2nd ed. Ed. BlackwellPublishing. 2008:908p.8 - Tvedten H,Weiss DJ. ErythrocyteDisorders. In:Willard MD, Tvedten H.Small Animal Clinical Diagnosis byLaboratory Methods. 3rd ed.Ed.WB Saunders, Philadelphia.1999:31-51.

9 - Walker D. Peripherical blood smears.In: Cowell RL, Tyler RD, Meinkoth JH.Diagnostic cytology and hematology of the dog and cat, 3rd ed. Ed. Mosby,St Louis. 2008:390-421.10 - Weiss DJ. Clinical hemorrheology.In: Schalm’s veterinary haematology.5th ed. Ed. Lippincott William & Wilkins,Baltimore. 2000:57-60.

● POINTS FORTS

● Le test salin différencie unphénomène d’agglutinationde la formation de rouleauxd’érythrocytes.

● Une anémie régénérative secaractérise par la présencede nombreuxpolychromatophilesau frottis sanguin.

● La présence de sphérocyteset d’agglutination estcaractéristique d’uneanémie hémolytique àmédiation immune chezle chien.

● La présence d’échinocytesest souvent liée à unartefact dans la préparationdu frottis.

Lecture d’un frottis sanguin au microscope(× 1 000) chez un chien présentant une anémierégénérative. Présence de corps d’Howell-Jolly(flèche bleue) et d’érythroblastes (flèche noire).

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope(× 1 000) chez un chien anémié atteint depiroplasmose. Présence de Babesia canis (flèche).

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Lecture d’un frottis sanguin au microscope(× 1 000) chez un chat anémié atteint d’hémo-bartonellose due à Mycoplasma hæmofelis (flèches).

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