Rapport de Synthèse - Adria Développement · Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes...

accréditation Cofrac n°1-0144

portée disponible sur www.cofrac.fr

ADRIA DEVELOPPEMENT Creac’h Gwen - F. 29196 QUIMPER Cedex - Tél. (33) 02.98.10.18.18 - Fax (33) 02.98.10.18.08

E-mail : [email protected] - Site web : http://www.adria.tm.fr - Site réservé adhérents : http://www.clubiaa.net ASSOCIATION LOI DE 1901 - N° SIRET 306 964 271 00036 - N° EXISTENCE 532900006329 - N°TVA FR4530696427100036

LABORATOIRES 3M SANTE Boulevard de l’Oise 95029 CERGY PONTOISE CEDEX

Rapport de Synthèse Etude conduite selon la norme NF EN ISO 16140

Etude de reconduction de la validation du test Petrifilm Rapide Coliformes (RCC) pour :

- le dénombrement des coliformes avec lecture à 14 heures - le dénombrement des coliformes gazogènes et non gazogènes avec lecture à 24 heures - le dénombrement des coliformes gazogènes avec lecture à 24 heures

Méthodes quantitatives

Ce rapport comprend 51 pages dont 5 annexes. La reproduction de ce rapport n’est autorisée que sous sa forme intégrale.

ER Petrifilm RCC (Version 2) - 4 août 2008

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à ADRIA Développement ou détruite en interne.

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ADRIA Développement 2/51 4 août 2008 Synthèse ER Petrifilm RCC (Version 2)

Sommaire

1 INTRODUCTION ________________________________________________ 4

1.1 Référentiel de validation_____________________________________ 4

1.2 Protocole et principe de la méthode alternative _________________ 4

1.3 Domaine d’application demandé ______________________________ 5

1.4 Méthode de référence _______________________________________ 5

2 ETUDE COMPARATIVE__________________________________________ 6

2.1 Etude bibliographique ______________________________________ 6

2.2 Linéarité __________________________________________________ 7

2.3 Exactitude relative_________________________________________ 12

2.4 Limite de détection (LOD) et limite de quantification (LOQ)_______ 22

2.5 Sensibilité relative_________________________________________ 23

2.6 Spécificité/Sélectivité ______________________________________ 25

2.7 Praticabilité ______________________________________________ 25

3 ETUDE INTERLABORATOIRE ___________________________________ 26

3.1 Préparation ______________________________________________ 26

3.2 Analyses_________________________________________________ 26

3.3 Résultats ________________________________________________ 27

3.4 Discussion _______________________________________________ 34

4 CONCLUSION_________________________________________________ 36 Annexe 1 - Notice technique du Test Petrifilm RCC ___________________________ 39 Annexe 2 - Méthode de référence NF EN ISO 4831 -

Technique du nombre le plus probable _____________________________________ 43 Annexe 3 - Méthode NF ISO 4832 – Méthode par comptage des colonies sur VRBL_ 44 Annexe 4 - Linéarité : Droites de régression ________________________________ 45 Annexe 5 - Exactitude relative : Droites de régression ________________________ 48

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Les modifications apportées au rapport sont indiquées par un double trait dans la marge à gauche.

Avant Propos

L’accréditation du COFRAC atteste de la compétence des laboratoires pour les seuls essais couverts par l’accréditation qui sont identifiés par le symbole . L’ensemble des renseignements permettant de valider la garantie des analyses est tenu à la disposition de la Société 3M SANTE. Les résultats sont synthétisés au sein de tableaux et interprétés selon la norme NF EN ISO 16140. Fabricant : LABORATOIRES 3M SANTE

Boulevard de l’Oise 95029 CERGY PONTOISE CEDEX

Laboratoire expert : ADRIA Développement

ZA Creac’h Gwen 29196 QUIMPER Cedex Méthode à valider : Reconduction de la validation du test 3M

Petrifilm rapide pour la numération des coliformes (RCC)

Référentiel de validation : Norme NF EN ISO 16140 (octobre 2003) :

microbiologie des aliments - Protocole pour la validation des méthodes alternatives

Méthodes de référence♦ : - Norme NF EN ISO 4831 : Directives générales

pour le dénombrement des coliformes - Technique du nombre le plus probable

- Norme NF EN ISO 4832 : Directives générales pour le dénombrement des coliformes - Méthode par comptage des colonies

Etendue de la validation : Tous produits alimentaires, hors produits de charcuterie pour le dénombrement des coliformes gazogènes à 24 heures

♦ NF EN ISO 4831 et NF EN ISO 4832 : essais effectués sous le couvert de l’accréditation par le

laboratoire expert

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1 INTRODUCTION 1.1 Référentiel de validation

Le référentiel de validation utilisé est la norme NF EN ISO 16140 (octobre 2003) : microbiologie des aliments - Protocole pour la validation des méthodes alternatives.

1.2 Protocole et principe de la méthode alternative

1.2.1 Principe de la méthode Le Test 3M Petrifilm rapide pour la numération des Coliformes (RCC) est un système prêt à l'emploi pour la numération des coliformes. Il consiste en un milieu pour les coliformes contenant un indicateur de pH qui permet de détecter la production d'acide, ainsi qu’un indicateur rouge de tetrazolium qui facilite la lecture. Au cours du métabolisme, les coliformes produisent de l'acide et, dans certains cas, du gaz à partir du lactose. Tandis que les colonies croissent et produisent de l'acide, l'indicateur de pH vire du rouge orangé au jaune. La zone d'acidification peut apparaître avant les colonies. Le gaz est piégé autour des colonies de coliformes et permet ainsi la détection des coliformes gazogènes. La numération des coliformes peut être effectuée après 14 heures d'incubation : les colonies de coliformes apparaissent alors sous forme de zones jaunes. La numération des coliformes gazogènes peut également être effectuée après 24 heures d'incubation : les colonies de coliformes gazogènes apparaissent entourées de bulles de gaz, tandis que la numération des coliformes gazogènes et non gazogènes est effectuée en comptant toutes les colonies rouges avec ou sans gaz après 24 heures d'incubation. La notice technique est donnée en Annexe 1.

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1.2.2 Mode opératoire

Le protocole est présenté ci-après : Suspension-mère (produit solide) Echantillon pour essai (produit liquide) Dilutions décimales si nécessaire Inoculation du test Petrifilm par 1 ml de suspension Produits de charcuterie Autres produits et produits de la mer Incubation 14 h ± 30 min à 30°C Incubation 14 h ± 30 min à 35°C ± 1°C

Dénombrement des coliformes Dénombrement des coliformes ou Incubation 24 h ± 2 h à 30°C ± 1°C ou Incubation 24 h ± 2 h à 35°C ± 1°C Dénombrement des coliformes gazogènes

Dénombrement des coliformes totaux ou Dénombrement des coliformes totaux

1.3 Domaine d’application demandé

Tous produits alimentaires, hors produits de charcuterie pour le dénombrement des coliformes gazogènes à 24 heures

1.4 Méthode de référence Les deux méthodes de référence sont : - la méthode NF EN ISO 4831 : Directives générales pour le

dénombrement des coliformes - Technique du nombre le plus probable, - et la méthode NF EN ISO 4832 : Directives générales pour le

dénombrement des coliformes - Méthode par comptage des colonies. Les protocoles sont schématisés en Annexes 2 et 3.

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2 ETUDE COMPARATIVE

Une seule norme est disponible en tant que méthode de référence pour le dénombrement des coliformes gazogènes : la norme NF EN ISO 4831. Son principe est basée sur la détermination du Nombre le Plus Probable, principe générant des intervalles de confiance spécifiques et déterminés autour du résultat. Le test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes gazogènes est basé quant à lui sur le principe de dénombrement des colonies. Aussi, lors de l’étude comparative des méthodes de référence et du test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes gazogènes, l’étude de linéarité a été menée en comparant les résultats du test Petrifilm RCC à ceux obtenus par la méthode ISO 4832, basée également sur le principe de dénombrement des colonies. L’étude de linéarité étant effectuée en analysant uniquement des produits artificiellement contaminés dont les taux d’inoculation sont déterminés, il apparaissait préférable de réaliser les tests de linéarité avec des méthodes basés sur des principes équivalents. La limite de répétabilité de la méthode ISO 4831 a été déterminée au cours de l’étude d’exactitude pour deux catégories et au cours de l’étude collaborative, permettant ainsi de ponctuer les conclusions de l’étude d’exactitude effectuée par l’analyse d’échantillons naturellement contaminés.

2.1 Etude bibliographique

Depuis la reconduction de validation AFNOR en 2001, les performances du test Petrifilm RCC ont été comparées à celles de la méthode de référence au sein d’un article rapportant les résultats de la validation AOAC (Cf. paragraphe 1.5.2.) : Référence : Kinneberg et Lindberg (2002), Dry rehydratable film method

for rapid enumeration of coliforms in foods (3MTM PetrifilmTM Rapid Coliform count plate) : collaborative study. Journal of AOAC International. vol. 85, n° 1, 56-71. Publication relative aux résultats détaillés de l’étude collaborative AOAC.

Conclusion : La répétabilité et la reproductibilité de la méthode Petrifilm RCC 14 h et 24 h ne sont pas significativement différentes de celles des méthodes de référence. La répétabilité du test Petrifilm RCC apparaît supérieure à celle de la méthode de référence dans 46 % des cas.

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2.2 Linéarité

2.2.1 Matrices utilisées et protocole de contamination Une étude a été réalisée en 1996 par le laboratoire R. Tech, à la fois, par la méthode de référence et la méthode alternative, avec les catégories suivantes d’aliments (données utilisées pour l’obtention de la validation AFNOR en 1997) : produits laitiers, produits végétaux, et plats cuisinés (salades à base de pâtes). Une interprétation statistique, selon la norme NF ISO 16140, des données acquises lors de cette étude, menée par le laboratoire R. Tech, a été réalisée sur les catégories « produits laitiers », « produits végétaux » et « plats cuisinés ». L’étude comparative avec la norme NF ISO 4832 a été complétée. Les analyses ont été effectuées en double à la fois par la méthode de référence et la méthode alternative. Les niveaux d’inoculation, les matrices ainsi que les souches utilisées, sont listés ci-après.

Catégorie Souche Taux testés (UFC/g)

Méthodes

Jambon blanc Enterobacter cloacae 128

100, 500, 1 000, 5 000, 50 000

NF ISO 4832 RCC 14 H IncubationRCC 24 H TC 30°C

Viande hachée Citrobacter freundii 35 100, 500, 1 000, 5 000, 50 000

NF ISO 4832 RCC 14 H IncubationRCC 24 H TC 35°CRCC Gaz+

Poisson Escherichia coli Ad 228 100, 500, 1 000, 5 000, 50 000

NF ISO 4832 RCC 14 H IncubationRCC 24 H TC 30°CRCC Gaz+

2.2.2 Résultats bruts

Les graphiques bidimensionnels pour chaque catégorie sont présentés figure 1.

3M SANTE


Figure 1 - Graphiques bidimensionnels pour chaque catégorie

RCC 14 h TC

Jambon14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00

log(Méthode de référence)

log

(Mét

hode

alte

rnat

ive)

lait pasteurisé 14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Plat cuisiné 14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Pommes de terre 14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Viande hachée 14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Poisson 14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

3M SANTE


RCC 24 h TC

Jambon24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Lait pasteurisé 24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Plat cuisiné 24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Pommes de terre 24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Viande hachée 24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Poisson 24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

3M SANTE


RCC 24 h Gaz +

lait pasteurisé 24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Plat cuisiné 24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Poisson 24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Pommes de terre 24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Viande hachée 24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

3M SANTE


2.2.3 Interprétations statistiques selon la norme ISO 16140

Tableau 1 - Comparaison Test Petrifilm RCC 14 h / ISO 4832

Matrice R Régression utilisée

Rob.F Valeur critique

P% Coefficient de corrélation

Droite de régression*

jambon blanc 1,75 GMFR 1,641 5,41 29 0,999 log Alt = - 0,21 + 1,02 log Ref lait pasteurisé 0,95 GMFR 9,034 1,93 0 0,995 log Alt = 0,14 + 0,95 log Ref plat cuisiné 1,24 GMFR 1,686 4,17 8 0,997 log Alt = 0,08 + 0,98 log Ref poisson 0,70 GMFR 3,893 5,41 9 0,998 log Alt = - 0,174 + 0,962 log Ref pommes de terre 0,72 GMFR 5,504 1,93 0 0,993 log Alt = 0,15 + 0,95 log Ref viande hachée 2,67 OLS1 1,202 5,41 40 0,998 log Alt = - 0,20 + 1,05 log Ref

* le choix de l’abscisse et de l’ordonnée dépend du type de régression retenue.

Interprétation statistique : P > 5 % : pas significatif 1 % < P < 5 % : significatif P < 1 % : très significatif

Tableau 2 - Comparaison Test Petrifilm RCC 24 h / ISO 4832

Matrice R Régression utilisée

Rob.F Valeur critique

P% Coefficient de corrélation

Droite de régression*

jambon blanc 1,25 GMFR 2,976 5,41 14 0,999 log Alt = - 0,24 + 1,03 log Ref lait pasteurisé 0,86 GMFR 8,232 1,93 0 0,996 log Alt = 0,19 + 0,96 log Ref plat cuisiné 1,16 GMFR 4,883 4,17 0 0,995 log Alt = 0,11 + 0,98 log Ref poisson 0,60 GMFR 6,206 5,41 4 0,998 log Alt = 0,12 + 0,978 log Ref pommes de terre 0,69 GMFR 5,115 1,93 0 0,994 log Alt = 0,19 + 0,95 log Ref viande hachée 3,33 OLS1 0,282 5,41 84 0,998 log Alt = - 0,16 + 1,05 log Ref



Tableau 3 - Comparaison Test Petrifilm RCC gazogènes / ISO 4832

Matrice R Régression

utilisée Rob.F Valeur

critique P% Coefficient

de corrélationDroite de

régression* lait pasteurisé 1,00 GMFR 11,426 2,37 0 0,995 log Alt = 0,971 + 0,145 log Ref plat cuisiné 0,99 GMFR 5,158 2,25 0 0,997 log Alt = 1,001 + 0,050 lof Ref poisson 0,70 GMFR 6,370 5,41 4 0,997 log Ref = 0,967x + 0,151 log Alt pommes de terre 0,99 GMFR 1,630 2,09 14 0,996 log Alt = 0,966x + 0,098 log Ref viande hachée 2,67 OLS1 1,256 5,41 38 0,998 log Alt = 1,053 - 0,185 log Ref



Les droites de régression sont données en Annexe 4.

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2.2.4 Discussion Quelle que soit la matrice testée, les coefficients de corrélation obtenus sont tous supérieurs ou égaux à 0,99 pour : - le dénombrement des coliformes totaux après 14h et 24h

d’incubation du test Petrifilm RCC, - le dénombrement des coliformes gazogènes. Le test de non-linéarité apparaît significatif dans certains cas, sa robustesse étant mise défaut par les coefficients de corrélation associés. L’étude de linéarité du Test Petrifilm RCC apparaît satisfaisante pour : - le dénombrement des coliformes totaux après 14h et 24h d’incubation du

test Petrifilm RCC, - le dénombrement des coliformes gazogènes

2.3 Exactitude relative

2.3.1 Nombre et nature des échantillons

Tableau 4 - Nombre et nature des échantillons analysés Test Petrifilm RCC 14 h / ISO 4832

Catégories Types Nombre d’échantillons

analysés Nombre de

résultats exploités*produits carnés bœuf - volaille 34 31 produits laitiers lait cru - pâtisseries - fromages au lait cru 35 27 produits de la mer plats traiteurs, poissons crus et cuits 13 13 végétaux salades - végétaux crus - farines 25 22 ovoproduits coules d’œuf - oeufs 20 20

* Certains résultats n’ont pas été exploités, le seuil de détection par l’une ou l’autre des

méthodes n’étant pas atteint.

3M SANTE


Tableau 5 - Nombre et nature des échantillons analysés Test Petrifilm RCC 24 h / ISO 4832

Catégories Types Nombre

d’échantillons analysés

Nombre de résultats

exploités* produits carnés bœuf - volaille 34 28 produits laitiers lait cru - pâtisseries - fromages 35 27 produits de la mer plats traiteurs, poissons crus et cuits 13 13 végétaux salades - végétaux crus - farines 25 23 ovoproduits coules d’œuf - oeufs 20 17


méthodes n’étant pas atteint.

Tableau 6 - Nombre et nature des échantillons analysés

Test Petrifilm RCC gazogènes / ISO 4831

Catégories Types Nombre

d’échantillons analysés

Nombre de résultats

exploités* produits carnés bœuf - volaille 13 13 produits laitiers lait cru - pâtisseries - fromages au lait cru 35 16 produits de la mer plats traiteurs, poissons crus et cuits 13 12 végétaux salades - végétaux crus - farines 25 14 ovoproduits coules d’œuf - oeufs 24 10


méthodes n’étant pas atteint. Seuls des échantillons naturellement contaminés ont été analysés.

2.3.2 Résultats bruts Les échantillons ont été analysés en double par chacune des deux méthodes, excepté pour la méthode ISO 4831. Les échantillons analysés présentaient les niveaux de contamination suivantes :

3M SANTE


Tableau 7 - Test Petrifilm RCC 14h / ISO 4832

Catégorie d’aliments Domaine de contamination (log) produits carnés 2,13 à 5,56 produits laitiers 1,00 à 8,11 produits de la mer 1,88 à 5,08 végétaux 2,36 à 7,94 ovoproduits 2,99 à 5,57

Tableau 8 - Test Petrifilm RCC 24h / ISO 4832

Catégorie d’aliments Domaine de contamination (log)

produits carnés 2,30 à 5,56 produits laitiers 1,30 à 8,15 produits de la mer 1,88 à 5,32 végétaux 2,40 à 7,94 ovoproduits 2,78 à 5,66

Tableau 9 - Test Petrifilm RCC gazogènes / ISO 4831

Catégorie d’aliments Domaine de contamination (log)

produits carnés 1,36 à 5,04 produits laitiers 0,97 à 4,41 produits de la mer 1,63 à 4,63 végétaux 1,38 à 6,32 ovoproduits 1,63 à 5,04

Les graphiques bidimensionnels sont donnés figure 2. Les droites de régression (sous la forme de graphiques et d’équations) pour chacune des matrices et pour l’ensemble des matrices sont données en annexe 5.

3M SANTE


Figure 2 - Graphiques bidimensionnels Par catégorie

RCC 14h TC

Produits Laitiers14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Ovoproduits14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits carnés14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Végétaux et divers14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits de la mer14H

(avec données acquises en 2005)

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits de la mer 14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

3M SANTE


RCC 24h TC

Produits Laitiers24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Ovoproduits24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits carnés 24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits végétaux et divers24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits de la mer24H TC

(avec données acquises en 2005)

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits de la mer24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

3M SANTE


RCC 24h Gaz+

Produits Laitiers24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits végétaux et divers24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Ovoproduits24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Ovoproduits24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

(Absence des valeurs aberrantes)

Produits de la mer24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Produits carnés 24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

3M SANTE


Tous produits confondus

Tous produits14H

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Tous produits24H TC

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

Tous produits24H GAZ

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

9,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00


log(

Mét

hode

alte

rnat

ive)

3M SANTE


2.3.3 Interprétations statistiques selon la norme ISO 16140

Dans le cas de la comparaison Test Petrifilm RCC gazogènes / ISO 4831, la régression GMFR a systématiquement été appliquée, les échantillons n’ayant pas été analysés en double par la méthode ISO 4831.

Tableau 10 - Test Petrifilm RCC 14 h / ISO 4832

P% Catégorie n R

Régression utilisée

a t(a) b t(b) T

critique Ordonnée à 0

Pente à 1

produits carnés 31 1,00 GMFR - 0,091 0,348 0,907 1,492 2,045 28 29 produits laitiers 27 0,8 GMFR 0,051 0,462 0,970 0,890 2,060 65 38 produits de la mer 13 0,71 GMFR - 0,088 0,472 1,005 0,084 2,200 65 93 végétaux 22 0,82 GMFR - 0,028 0,099 0,965 0,611 2,086 92 55 ovoproduits 20 1,07 OLS1 0,219 1,107 0,946 1,085 2,101 28 29 Tous produits 113 0,63 GMFR 0,0202 0,284 0,947 3,035 1,981 78 0



Catégorie Biais D Limite de répétabilité méthode alternative

Limite de répétabilité méthode de référence

produits carnés - 0,410 0,235 0,235 produits laitiers - 0,005 0,117 0,148 produits de la mer - 0,045 0,147 0,205 végétaux - 0,180 0,132 0,161 ovoproduits - 0,140 0,191 0,235 Toutes produits - 0,120 0,150 0,235


P%

Catégorie n R Régression

utilisée a t(a) b t(b)

T critique Ordonnée

à 0 Pente à

1 produits carnés 28 0,81 GMFR 0,083 0,539 0,935 1,734 2,056 59 9 produits laitiers 27 0,86 GMFR 0,198 1,481 0,975 0,629 2,059 15 54 produits de la mer 13 1,00 GMFR -0,080 0,783 1,044 1,374 2,200 45 20 végétaux 23 0,80 GMFR 0,109 0,580 0,967 0,897 2,080 57 38 ovoproduits 17 1,00 GMFR 0,157 0,230 1,062 0,356 2, 131 82 73 Tous produits 108 0,87 GMFR 0,175 2,968 0,965 2,393 1,983 0 2


3M SANTE





produits carnés - 0,140 0,191 0,235 produits laitiers 0,130 0,176 0,205 produits de la mer 0,035 0,205 0,205 végétaux - 0,045 0,088 0,176 ovoproduits 0,300 0,205 0,205 Toutes catégories confondues - 0,025 0,210 0,235

* Interprétation statistique incluant les nouvelles données


P% Catégorie n R

Régression utilisée

a t(a) b t(b) T critique Ordonnée à 0

Pente à1

produits carnés 13 0,37 OLS2 - 0,127 0,112 1,089 0,248 2,200 91 81 produits laitiers 16 / GMFR 0,187 0,854 0,963 0,432 2,144 41 67 produits de la mer

12 0,32 OLS2 0,461 0,644 0,883 0,450 2,228 53 66

végétaux 14 / GMFR 0,603 1,012 0,818 1,286 2,179 33 22 ovoproduits 10 / GMFR 1,261 2,685 0,572 2,574 2,306 3 3 Tous produits 65 / GMFR 0,542 4,038 0,811 4,563 1,998 0 0


Une valeur aberrante est obtenue dans la catégorie ovoproduit pour la méthode de référence ; l’interprétation a été réalisée également en supprimant l’échantillon concerné (n°89 données ADRIA 1997). Les valeurs obtenues sont alors de 34% (pente à 1%) et 67% (ordonnée à 0), avec une équation de la droite de régression :

logAlt = 1,237 log Ref - 0,26




produits carnés 0,100 0,293 0,795 produits laitiers 0,133 0,117 / produits de la mer - 0,183 0,323 0,998 végétaux - 0,148 0,396 / ovoproduits 0,305 0,352 / Toutes catégories confondues 0,100 0,300 /

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2.3.4 Discussion

2.3.4.1. Comparaison des résultats du Test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes totaux après 14 et 24 h d'incubation aux résultats de la méthode de référence ISO 4832 Les tests statistiques valident des ordonnées à l’origine proches de 0 et les pentes proches de 1 pour chacune des catégories étudiées séparément. Après 14h d'incubation des tests Petrifilm RCC, les biais entre les deux méthodes sont faibles et varient de - 0,410 à - 0,005 Log UFC/g. Après 24 h d'incubation des tests Petrifilm RCC, les biais entre les deux méthodes sont faibles et varient de - 0,140 à + 0,3 Log UFC/g. Ces observations permettent d’appréhender les résultats de tests statistiques indiquant une pente différente de 1 ou une origine différente de zéro pour toutes catégories confondues. Enfin, les répétabilités de la méthode de référence et de la méthode Petrifilm après 14h et 24h d'incubation sont similaires.

2.3.4.2. Comparaison des résultats du Test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes gazogènes aux résultats de la méthode de référence ISO 4831 Les tests statistiques valident la corrélation entre les deux méthodes pour les catégories suivantes : - produits laitiers, - ovoproduits, - produits végétaux et divers. Les biais entre les deux méthodes sont compris entre - 0,183 Log UFC/g et 0,305 Log UFC/g. Bien que ces mêmes tests statistiques montrent des valeurs satisfaisantes pour les catégories produits carnés et produits de la mer, une dispersion des résultats est observée entre les deux méthodes. Les biais entre les deux méthodes sont alors respectivement de 0,183 et de -0,100 Log UCF/g. La répétabilité de la méthode alternative apparaît satisfaisante, les valeurs variant entre 0,117 et 0,396. Exploitant des données antérieures où la méthode de référence avait été réalisée en simple, la répétabilité de cette dernière n'est pas disponible pour l’ensemble des catégories Les limites de répétabilité ont cependant été déterminées pour les catégories produits carnés et produits de la mer au cours de l’étude d’exactitude, les manipulations étant récentes. Ainsi les valeurs sont respectivement de 0,795 et 0,998, nettement supérieures à celles observées pour la méthode alternative. Les valeurs obtenues lors de l'étude collaborative (paragraphe

3M SANTE


3.2.5) montrent également une répétabilité de la méthode de référence comprise entre 0,983 à 1,507, traduisant la variabilité significative des résultats générés par cette méthode. Ainsi, certaines discordances de résultats observés entre les deux méthodes sont davantage imputables aux valeurs de limite de répétabilité observées pour la méthode de référence.

2.3.4.3. Conclusion L’étude d’exactitude du test Petrifilm RCC apparaît satisfaisante pour : - le dénombrement des coliformes totaux après 14 h et 24 h d’incubation du

test Petrifilm RCC, - le dénombrement des coliformes gazogènes.

2.4 Limite de détection (LOD) et limite de quantification (LOQ) 2.4.1 Protocole

Les limites de détection et de quantification ont été déterminées par l’analyse de blancs indépendants, d’une part, et par l’analyse de dilutions d’une culture pure de E. coli par la méthode Petrifilm RCC pour les trois types de dénombrement (14 h, 24 h total et 24 h gazogènes), d’autre part. Les taux testés sont les suivants : - 0,5 UFC/ml - 1 UFC/ml - 5 UFC/ml Six réplicats ont été testés par taux.

2.4.2 Résultats Les données sont intrinsèques à la méthode. Les interprétations sont données dans les tableaux suivants :

3M SANTE


Tableau 16 - Test Petrifilm RCC 14 h

Niveau Nombre d’échantillons positifs Ecart-type Biais 0 0/6 / / 1 2/6 0,816 0,5 5 4/6 1,265 1,5

Formules Valeurs obtenues

LC 1,65 S0 + X0 1,8

LOD 3.3 S0 + X0 3,2

LOQ 10 S0 + X0 8,7

Tableau 17 - Test Petrifilm RCC 24 h

Niveau Nombre d’échantillons positifs Ecart-type Biais

0 0/6 / / 1 2/6 0,816 0,5 5 4/6 1,265 1,5


LC 1,65 S0 + X0 1,8

LOD 3.3 S0 + X0 3,2

LOQ 10 S0 + X0 8,7

Tableau 18 - Test Petrifilm RCC gazogènes

Niveau Nombre d’échantillons positifs Ecart-type Biais

0 0/6 / / 1 2/6 0,816 0,5 5 4/6 1,265 1,5


LC 1,65 S0 + X0 1,8

LOD 3.3 S0 + X0 3,2

LOQ 10 S0 + X0 8,7

2.5 Sensibilité relative

Les données sont intrinsèques à la méthode. Elles sont obtenues à partir des résultats obtenus dans l’étude de linéarité. Les profils de précision obtenus pour les différentes matrices sont présentés Figures 3, 4 et 5.

3M SANTE


Figure 3 - Profils de précision obtenus pour les différentes matrices Test Petrifilm RCC 14 h / ISO 4832

Figure 4 - Profils de précision obtenus pour les différentes matrices Test Petrifilm RCC 24 h / ISO 4832

0,00%

5,00%

10,00%

15,00%

20,00%

25,00%

1 10 100 1000 10000 100000 1000000

Méthode de référence ufc/g(X)

CV(

<X(Y

)>)

jambon blancLait pasteuriséPlat cuisinéPoissonPommes de terreViande hachée

0,00%

5,00%

10,00%

15,00%

20,00%

25,00%

1 10 100 1000 10000 100000 1000000

Méthode de référence ufc/g (X)

CV(

<X(Y

)>)

jambon blancLait pasteuriséPlat cuisinéPoissonPommes de terreViande hachée

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Figure 5 - Profils de précision obtenus pour les différentes matrices Test Petrifilm RCC gazogènes / ISO 4832

2.6 Spécificité/Sélectivité

Cette partie a été traitée lors de l’étude menée en 1996 par l’ADRIA et l’étude précollaborative menée par le laboratoire R.TECH en 1999.

2.7 Praticabilité Les données acquises lors de la validation AFNOR menée en 1997 sont reportées tableau 19.

Tableau 19 - Evaluation de la praticabilité du Test Petrifilm RCC

Critère Communication sur le critère 1. Mode de conditionnement des éléments

de la méthode

2. Dimension des éléments 2 pochettes de 25 Tests Petrifilm dans 1 carton de 50 → emballage

3. Conditions de stockage + 4°C avant ouverture de la pochette, à température ambiante après ouverture d'une pochette → indiqué sur la notice

4. Modalité d'utilisation après la première utilisation

Date de péremption sur l'emballage

RCC 24H GAZ

0,0%

5,0%

10,0%

15,0%

20,0%

25,0%

30,0%

35,0%

40,0%

1 10 100 1000 10000 100000 1000000

Méthode de référence ufc/g (X)

CV(

<x(Y

)>) Lait pasteurisé

Plat cuisinéPoissonPommes de terreViande hachée

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Critère Communication sur le critère

5. Equipements supplémentaires spécifiques par rapport à la méthode de référence (ou cas contraires, équipements inutiles)

Rien de spécifique à part l'adaptateur plastique → notice (fourni avec chaque boîte)

6. Réactifs prêts à l'emploi ou à reconstituer

Prêt à l'emploi → notice

7. Durée d'entraînement de l'opérateur à la méthode

0,5 jour (à indiquer dans l'attestation)

8. Temps réel de manipulation / Flexibilité de la technique par rapport au nombre d'échantillons à analyser

Même temps pour grande ou petite série (à indiquer dans l'attestation)

9. Intégration de la technique dans l'organisation d'un laboratoire

S'intègre bien dans l'organisation (à indiquer dans l'attestation ou dans la notice)

10 Degré de qualification de l'opérateur Technicien même niveau que référence (à indiquer dans l'attestation)

11. Etapes communes avec la méthode de référence

Broyage et dilution (à indiquer dans l'attestation ou la notice)

12. Milieux, réactifs, équipements spécifiques commercialisés par le fabricant de la méthode

Le produit en totalité (à indiquer dans la notice)

13 Traçabilité des résultats d'analyse idem référence (à indiquer dans la notice)

3 ETUDE INTERLABORATOIRE

3.1 Préparation Les résultats obtenus lors de l’étude de validation, réalisée en 1997 ont été exploités selon la norme ISO 16140. Cette étude a été réalisée sur du lait pasteurisé demi-écrémé inoculé par Enterobacter cloacae. Douze laboratoires avaient participé à l’étude. Les résultats de onze laboratoires ont été exploités (un laboratoire a reçu son colis à 9°C).

3.2 Analyses Les laboratoires collaborateurs et le laboratoire expert ont effectué les analyses à la fois par la méthode alternative et par la méthode de référence.

3M SANTE


3.3 Résultats

3.3.1 Résultats obtenus par le laboratoire expert

Tableaux 20 - Résultats du laboratoire expert (en log UFC/g) Comparaison Test Petrifilm RCC 14h / ISO 4832

Méthode de référence

ISO 4832

Méthode alternative

Test Petrifilm RCC 14h

Taux visé

(log UFC/g)

Duplicat 1 Duplicat 2 Duplicat 1 Duplicat 2

< 10 < 1 < 1 1 2

10 - 100 5 20 35 39

100 - 1 000 170 55 240 240

1 000 - 10 000 1 300 960 3 500 4 200

Comparaison Test Petrifilm RCC 24h / ISO 4832


ISO 4832


Test Petrifilm RCC 24h

Taux visé

(log UFC/g)


< 1 < 1 < 1 1 2

10 - 100 5 20 40 41

100 - 1 000 170 55 250 240

1 000 - 10 000 1 300 960 3 500 4 200

Comparaison Test Petrifilm RCC gaz + / ISO 4831


ISO 4831 Méthode alternative Test Petrifilm gaz+

Taux visé (log UFC/g)


< 1 0,3 0,3 1 2 10 - 100 24 46 40 41

100 - 1 000 1 100 930 250 240 1 000 - 10 000 2 400 4 600 3 500 4 200

3.3.2 Résultats obtenus par les laboratoires collaborateurs

Une synthèse des résultats est présentée tableaux 21, 22 et 23.

3M SANTE


Tableau 21 - Test Petrifilm RCC 14h / ISO 4832 (UFC/ml)

Niveau 0 Niveau 1 Niveau 2 Niveau 3

Laboratoires Méthode de référence








A <1 <1 <1 <1 44 63 28 31 520 330 260 330 3500 3500 3800 3800 B 2 <1 <1 3 45 43 35 31 520 450 330 320 5600 4200 5100 5200 C <1 <1 <1 <1 28 30 40 25 280 220 360 410 4000 6200 3900 4900 D <1 <1 <1 <1 55 46 32 29 440 310 380 290 5800 4500 4000 5300 E <1 <1 <1 2 56 38 37 39 310 330 340 420 5000 6700 4600 3800 F 20 0 1 2 390 37 250 69 470 560 260 450 2300 4000 3300 3200 G <1 <1 <1 <1 29 39 31 28 420 390 473 410 4500 4100 3800 4800 I <1 <1 <1 <1 43 45 25 21 490 540 260 390 3800 1400 3500 2400 J <1 1 <1 <1 44 41 38 34 410 490 420 400 7000 5800 6500 4800 L <1 <1 <1 <1 45 44 26 28 360 410 400 355 5500 5100 5000 3900

Tableau 22 - Test Petrifilm RCC 24h / ISO 4832 (UFC/ml)










A <1 <1 <1 2 44 63 34 42 520 330 360 360 3500 3500 4700 4000 B 2 <1 <1 <1 45 43 44 37 520 450 340 320 5600 4200 5200 5300 C <1 <1 1 <1 28 30 50 41 280 220 360 460 4000 6200 4900 5300 D <1 <1 <1 <1 55 46 41 35 440 310 410 300 5800 4500 4000 5200 E <1 <1 <1 2 56 38 45 42 310 330 360 430 5000 6700 4900 4100 F 20 0 3 3 390 37 26 72 470 560 290 540 2300 4000 4100 3400 G <1 <1 1 <1 29 39 42 34 420 390 510 440 4500 4100 4500 5100 I <1 <1 <1 <1 43 45 44 37 490 540 270 440 3800 1400 4500 3400 J <1 1 <1 <1 44 41 46 32 410 490 430 420 7000 5800 6600 5000 K 1 <1 1 2 43 46 35 27 340 490 370 510 5500 6000 4500 4800 L <1 <1 <1 <1 45 44 36 33 360 410 400 360 5500 5100 5100 3900

3M SANTE


Tableau 23 - Test Petrifilm RCC gaz + / ISO4831 (UFC/ml)










A <0,3 0,92 <1 2 75 23 10 31 930 430 360 290 2400 11000 4600 3600 B 0,3 <0,3 <1 <1 14 93 44 37 430 930 340 320 4600 11000 5200 5300 C <0,3 0,36 <1 <1 93 43 48 51 930 240 360 460 11000 4600 4800 5300 D 0,92 <0,3 <1 <1 24 38 41 35 930 230 410 300 4600 2400 4000 5200 E 0,36 0,92 <1 2 43 93 45 42 1500 430 360 430 2400 2400 4900 4100 F 2,3 0,92 3 3 930 43 26 72 230 380 290 540 2400 2400 4100 3400 G 0,36 <0,3 1 <1 75 43 40 34 430 930 510 440 11000 1100 4500 5100 I 1,5 <0,3 <1 <1 240 21 44 37 20 240 270 440 >11000 2100 4500 3400 J <0,3 <0,3 <1 <1 24 93 46 32 240 240 430 420 11000 2400 6600 5000 K 0,3 0,92 1 2 43 150 35 27 930 430 370 510 >11000 11000 4500 4800 L 0,36 0,36 <1 <1 29 43 36 33 930 150 380 360 4600 11000 5100 3900

3M SANTE


Interprétation statistique CALCULS

Exactitude relative

Pour chaque niveau, la différence des moyennes des réplicats (di) obtenues par la méthode alternative et la méthode de référence est calculée : di = (Mi,alt - Mi, réf). La médiane (MED {di} des di permet de déterminer le biais D (MED{di} = biais D). Le biais D et l’écart-type robuste S {di} = K1Sn donnent une statistique de t (t(d) = MED{di} n /S{di}). Cette valeur de t obtenue est comparée à une valeur critique trouvée dans la table de Student (pour n=12, t critique = 2,201). Les valeurs de t(d) obtenues par niveau sont reportées dans le tableau 24.

Tableaux 24 - Valeurs de t(d) obtenues par niveau


Niveau Nombre de résultats

exploitables (nombre de laboratoires)

Biais D t(d) t critique ddl (n-1) Conclusion

0 / / / / / 1 10 - 0,14 3,241 2,262 Biais significatif 2 10 - 0,04 0,835 2,262 Biais non significatif 3 10 -0,03 0,911 2,262 Biais non significatif





0 / / / / / 1 11 - 0,04 1,203 2,228 Biais non significatif 2 11 - 0,02 0,556 2,228 Biais non significatif 3 11 0,01 0,278 2,228 Biais non significatif

3M SANTE






0 / / / / / 1 11 - 0,16 2,499 2,228 Biais non significatif 2 11 - 0,12 1,639 2,228 Biais non significatif 3 9 0,05 0,581 2,306 Biais non significatif

Niveau critique : t(d) < t critique Répétabilité

Les valeurs obtenues pour la limite de répétabilité, ainsi que les valeurs obtenues pour le test F sont données dans les tableaux 25 à 27.

Valeurs obtenues pour la limite de répétabilité et valeurs pour le Test F

Tableau 25 - Comparaison Test Petrifilm RCC 14h / ISO 4832

Limite de répétatibilité





F calculé

ou (1/F)*

F critique

(0,05 ; n ; n) P %

1 10 0,147 0,132 1,23* 2,98 37 2 10 0,205 0,220 1,15 2,98 42 3 10 ,0338 0,294 1,32* 2,98 33


Limite de répétatibilité





F calculé

ou (1/F)*

F critique

(0,05 ; n ; n) P %

1 11 0,117 0,264 5,06 2,82 1 2 11 0,235 0,205 1,31* 2,82 33 3 11 0,294 0,235 1,56* 2,82 24

3M SANTE


Tableau 27 - Comparaison Test Petrifilm RCC gaz + / ISO 4831

Limite de répétatibilité Niveau

Nombre de résultats exploitables

(nombre de laboratoires) Méthode

de référence Méthode

alternative

F calculé

ou (1/F)*

F critique

(0,05 ; n ; n) P %

1 11 1,507 0,221 46,53* 2,82 0 2 11 0,983 0,264 13,86* 2,82 0 3 9 1,111 0,235 22,40* 3,18 0

Interprétation statistique P > 5% : non significatif 1 % < P < 5 % : significatif P < 1 % : très significatif Reproductibilité

Les valeurs obtenues pour la limite de reproductibilité, ainsi que les valeurs obtenues pour le test F sont données dans le tableaux 28 à 30.

Valeurs obtenues pour la limite de reproductibilité et valeurs pour le Test F


Limite de reproductibilité Niveau Nombre de résultats




F calculé (ou 1/F)*

F critique (0,05 ; n - 1; n - 1) P %

1 10 0,263 0,170 2,40* 3,18 10 2 10 0,319 0,260 1,50* 3,18 28 3 10 0,377 0,313 1,46* 3,18 29


Limite de reproductibilité Niveau Nombre de résultats


Méthode de

référence



F critique (0,05 ; n - 1; n - 1) P %

1 11 0,217 0,220 1,03 2,98 48 2 11 0,300 0,221 1,84* 2,98 17 3 11 0,332 0,230 2,09* 2,98 13

3M SANTE


Tableau 30 - Comparaison Test Petrifilm RCC gaz + / ISO 4831

Limite de reproductibilité Niveau Nombre de résultats exploitables

(nombre de laboratoires) Méthode

de référence Méthode

alternative


F critique (0,05 ; n - 1; n - 1) P %

1 11 1,266 0,249 25,90* 2,98 0 2 11 0,830 0,262 10,04* 2,98 0 3 9 1,09 0,235 21,41* 3,44 0

Interprétation statistique P > 5% : non significatif 1 % < P < 5 % : significatif P < 1 % : très significatif Les rapports limite de reproductibilité / limite de répétabilité sont donnés dans les tableaux 31 à 33.

Rapports limite de reproductibilité / limite de répétabilité


Limite de reproductibilité / limite de répétabilité

Niveau Nombre de

résultats exploitables (nombre de laboratoires) Méthode de référence Méthode alternative

1 10 1,795 1,286

2 10 1,552 1,183

3 10 1,118 1,065


Limite de reproductibilité / limite de répétabilité Niveau


(nombre de laboratoires) Méthode de référence Méthode alternative

1 11 1,847 0,834

2 11 1,280 1,077

3 11 1,130 0,978 Tableau 33 - Comparaison Test Petrifilm RCC gaz + / ISO 4831

Limite de reproductibilité / limite de répétabilité Niveau


(nombre de laboratoires) Méthode de référence Méthode alternative

1 11 0,840 1,126

2 11 0,844 0,992

3 9 0,98 1,003

Niveau critique : reproductibilité / répétabilité : < 2

3M SANTE


Dispersion entre les laboratoires


Niveau Nombre de résultats exploitables

(nombre de laboratoires)


F ou 1/F*

Méthode alternative F ou 1/F*

F crititque (0,05 ; n - 1 ; n)

1 10 5,442 2,309 3,02

2 10 3,816 1,797 3,02

3 10 1,498 1,268 3,02





F ou 1/F*



1 11 5,824 1,095* 2,85

2 11 2,275 1,321 2,85

3 11 1,555 1,095* 2,85





F ou 1/F*



1 11 2,426* 1,535 2,85

2 11 2,349* 1,035 2,85

3 9 1,085* 1,011 3,23

Niveau critique : F ou 1/F < F (critique)

3.4 Discussion 3.4.1 Comparaison des résultats du test Petrifilm RCC pour le

dénombrement des coliformes totaux après 14 et 24h d'incubation aux résultats de la méthode de référence ISO 4832 Les biais entre les deux méthodes apparaissent non significatifs pour l’ensemble des niveaux et des temps d'incubation testés, à l’exception du biais calculé pour le niveau 1 lors de la comparaison des résultats de la méthode de référence ISO 4832 et des résultats du Test Petrifilm RCC après 14h d'incubation. Avec une valeur de -0,14 log UFC/g, le biais observé est cependant faible et acceptable.

3M SANTE


Les tests statistiques valident des limites de répétabilités et limites de reproductibilité comparables entre les deux méthodes, à l'exception des limites de répétabilité du test Petrifilm RCC après 24h d'incubation et de la méthode ISO 4832 au niveau 1. La limite de répétabilité de la méthode alternative est alors supérieure à celle de la méthode de référence, mais montre une valeur de 0,264 satisfaisante. Quelle que soit la méthode, les valeurs du rapport «Reproductibilité / répétabilité» sont toutes inférieures à 2, tel que souhaité dans la norme ISO 16140 Enfin, de manière générale, la dispersion des résultats entre laboratoires est meilleure par la méthode Petrifilm RCC que par la méthode de référence.

3.4.2 Comparaison des résultats du Test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes gazogènes aux résultats de la méthode de référence ISO 4831 Le biais entre les deux méthodes est non significatif, pour tous les niveaux testés. Les limites de répétabilité et de reproductibilité de la méthode alternative sont satisfaisantes, nettement meilleures que celles de la méthode de référence. Quelle que soit la méthode, les valeurs du rapport «Reproductibilité / répétabilité» sont toutes inférieures à 2, tel que souhaité dans la norme ISO 16140 Enfin, la dispersion des résultats entre laboratoires est meilleure par la méthode Petrifilm RCC que par la méthode de référence.

3M SANTE


4 CONCLUSION Les conclusions de l’étude préliminaire sont les suivantes : Comparaison des résultats du Test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes totaux après 14 et 24h d'incubation aux résultats de la méthode de référence ISO 4832 :

Les limites de répétabilité de la méthode alternative sont similaires à celle de la méthode de référence

Après 14h d'incubation des Tests Petrifilm RCC, les biais entre les

deux méthodes varient de -0,780 à -0,005 Log UFC/g. Après 24 h d'incubation des Tests Petrifilm RCC, les biais entre les deux méthodes varient de -0,025 à +0,3 Log UFC/g

De manière générale, la méthode Petrifilm RCC pour le

dénombrements coliformes totaux montre une linéarité et une exactitude relative satisfaisantes.

La méthode Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes

totaux offre :

un gain de place à l’incubation, une gestion facilitée des déchets, un gain de temps à l'obtention des résultats pour le Test Petrifilm

RCC 14h

3M SANTE


Comparaison des résultats du Test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes gazogènes aux résultats de la méthode de référence ISO 4831 pour l’étude d’exactitude et aux résultats de la méthode de référence ISO 4832 pour l’étude de linéarité

Bien que la limite de répétabilité de la méthode de référence ne soit

pas disponible, il est fort probable que cette dernière soit proches des valeurs observées dans l'étude collaborative, valeurs comprises entre 0,983 à 1,507. La méthode Petrifilm RCC montre une limite de répétabilité satisfaisante, avec des valeurs variant de 0,117 et 0,396.

Les biais entre les deux méthodes sont compris entre

- 0,183 Log UFC/g et 0,100 Log UFC/g.

La méthode Petrifilm RCC pour le dénombrements gazogènes montre une linéarité relative satisfaisante.

Une dispersion de certains résultats est observée entre les deux

méthodes, dispersion imputable à la limite de répétabilité de la méthode de référence ISO 4831.

L’étude d’exactitude montre des résultats satisfaisants, compte-tenu des limites de répétabilité de la méthode de référence supérieures à celles de la méthode alternative.

La méthode Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes

gazogènes offre :

un gain de place à l’incubation, une gestion facilitée des déchets, un gain de temps à l'obtention des résultats, un gain de temps important de manipulation.

3M SANTE


Les conclusions de l’étude interlaboratoire sont les suivantes : Comparaison des résultats du Test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes totaux après 14 et 24 h d'incubation aux résultats de la méthode de référence ISO 4832 : De manière générale, les biais entre les deux méthodes apparaissent

non significatifs, les limites de répétabilités et limites de reproductibilité sont comparables entre les deux méthodes. La dispersion des résultats entre laboratoires est meilleure par la

méthode Petrifilm RCC que par la méthode de référence. Comparaison des résultats du Test Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes gazogènes aux résultats de la méthode de référence ISO 4831 :

Le biais entre les deux méthodes est non significatif, pour tous les

niveaux testés.

Les limites de répétabilité et de reproductibilité de la méthode alternative sont particulièrement satisfaisantes, mettant en défaut la méthode de référence.

Enfin, la dispersion des résultats entre laboratoires est meilleure par la

méthode Petrifilm RCC que par la méthode de référence.

3M SANTE


Annexe 1 - Notice technique du Test Petrifilm RCC

3M SANTE


3M SANTE


Annexe 2 - Méthode de référence NF EN ISO 4831 - Technique du nombre le plus probable

Suspension mère (produit solide) Echantillon pour essai (produit liquide)

10 ml 3 tubes

Bouillon à la tryptone et au lauryle sulfate

Double concentration

1 ml 3 tubes

Solutions mères et dilutions Bouillon à la tryptone et au lauryle sulfate

Simple concentration avec cloches de Durham Incubation 30°C

24 h ± 2 h Incubation 30°C

24 h ± 2 h ou/et 48 h ± 2 h

Confirmation milieu lactosé bilié au vert brillant de production repiquage à l'anse en tube avec cloche de Durham de gaz Incubation à 30°C ± 1 ; 24 h ± 2 h ou 48 h ± 2 h

3M SANTE


Annexe 3 - Méthode NF ISO 4832 – Méthode par comptage des colonies sur VRBL

Suspension mère (produit solide) Echantillon pour essai (produit liquide)

et dilutions décimales en tryptone NaCl 1 ml par boîte

Ajout de 15 ml de milieu sélectif solide : gélose lactosée biliée au cristal violet

et au rouge neutre VRBL

Solidification

Ajout de 4 ml de VRBL (double couche)

Incubation 24 h ± 2 h à 30°C ± 1

Comptage des colonies caractéristiques (violacées, d'un diamètre de 0,5 mm ou plus, parfois entourées d'une zone rougeâtre)

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Annexe 4 - Linéarité : Droites de régression

RCC 14 h TC

Lait RCC 14h - Régression GMFR

y = 0,9453x + 0,141

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Jambon RCC 14h - Régression GMFR

y = 1,0229x - 0,2114

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Plats cuisinés RCC 14h - Régression GMFR

y = 0,976x + 0,0768

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Pommes de terre RCC 14hRégression GMFR

y = 0,9458x + 0,1524

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Viande hachée RCC 14h - Régression OLS 1

y = 1,054x - 0,2037

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Poisson RCC 14 h - Régression GMFR

y = 0,9622x + 0,1738

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

3M SANTE


RCC 24h TC

Jambon 24h TC - Régression GMFR

y = 1,0314x - 0,2353

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Lait 24h TC - Régression GMFR

y = 0,9591x + 0,1856

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Plats cuisinés 24h TC - Régression GMFR

y = 0,9824x + 0,1117

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Pommes de terre 24h TC - Régression GMFR

y = 0,9459x + 0,1944

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00

Référence

Alte

rnat

ive

Viande hachée 24h TC - Régression OLS 1

y = 1,0462x - 0,1585

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

Poisson 24 h TC - Régression GMFR

y = 0,978x + 0,12

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

Référence

Alte

rnat

ive

3M SANTE


RCC 24 h Gaz +

Lait 24h gaz+ - Régression GMFR

y = 0,9706x + 0,1452

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00

Référence

Alte

rnat

ive

Plats cuisinés 24h gaz+ - Régression GMFR

y = 1,001x + 0,0504

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00

Référence

Alte

rnat

ive

Poisson cru 24 h Gaz + - Régression GMFR

y = 0,9672x + 0,1514

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00

Référence

Alte

rnat

ive

Pommes de terre 24h gaz+ Régression GMFR

y = 0,9663x + 0,0976

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00

Référence

Alte

rnat

ive

Viande hachée 24h gaz+ - Régression OLS 1

y = 1,0527x - 0,1853

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00

Référence

Alte

rnat

ive

3M SANTE


Annexe 5 - Exactitude relative : Droites de régression

RCC 14 h

Produits laitiers 14 H - Régression GMFR

y = 0,9704x + 0,0514

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Ovoproduits 14 h - Régression OLS 1

y = 0,9463x + 0,2191

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits carnés 14 h - Régression GMFR

y = 0,9067x - 0,0913

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits végétaux 14 h - Régression GMFR

y = 0,9654x - 0,028

0

2

4

6

8

10

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits de la mer 14 h - Régression GMFR

y = 1,0049x - 0,0885

0

2

4

6

8

10

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

3M SANTE


RCC 24 h

Produits laitiers 24 h TC Régression GMFR

y = 0,9746x + 0,1982

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Ovoproduits 24 h TC Régression GMFR

y = 1,0623x + 0,1565

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits carnés 24 h TC Régression GMFR

y = 0,9351x + 0,0829

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits végétaux 24 h TCRégression GMFR

y = 0,9666x + 0,1088

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits de la mer 24 h CT - Régression GMFR

y = 1,0441x - 0,0796

0

2

4

6

8

10

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

3M SANTE


RCC 24 h Gaz

Produits laitiers 24 h Gaz +Régression GMFR

y = 0,9632x + 0,1867

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Ovoproduits 24 h Gaz+Régression GMFR

y = 0,5103x + 1,5192

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits végétaux 24 h Gaz +Régression GMFR

y = 0,8183x + 0,603

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits de la mer 24 h Gaz+Régression OLS 2

y = 0,8826x + 0,4613

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Alternative

Réf

éren

ce

Ovoproduits 24 h Gaz + (9 éch.)Régression GMFR

y = 1,2371x - 0,2581

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Produits carnés 24 h Gaz +Régression OLS 2

y = 1,099x - 0,1585

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Alternative

Réf

éren

ce

3M SANTE


Tous produits confondus

Tous produits 14 hRégression GMFR

y = 0,9466x + 0,0202

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Tous produits 24 hRégression GMFR

y = 0,9647x + 0,1754

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Tous produits 24 h Gaz + Régression GMFR

y = 0,8114x + 0,5425

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00

Référence

Alte

rnat

ive

Rapport de Synthèse - Adria Développement · Petrifilm RCC pour le dénombrement des coliformes...

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