Marqueurs génétiques Marqueurs génétiques de résistance aux antipaludiques de résistance aux antipaludiques communément utilisés en Afrique communément utilisés en Afrique

et à Madagascaret à Madagascar

S. ABOUBACAR

IntroductionIntroductionPaludismePaludisme

•• endémie majeure en Afrique endémie majeure en Afrique

•• une des premières causes de morbidités et mortalitésune des premières causes de morbidités et mortalités

•• situation exacerbée par la résistance confirmée de situation exacerbée par la résistance confirmée de P.P.falciparumfalciparum aux antipaludiques usuels (chloroquine, et aux antipaludiques usuels (chloroquine, et sulfadoxinesulfadoxine/pyriméthamine)/pyriméthamine)

•• chimiorésistance: un des obstacles qui entravent les chimiorésistance: un des obstacles qui entravent les Politiques Nationales de luttes contre le PaludismePolitiques Nationales de luttes contre le Paludisme

DjamanDjaman, Cahiers Santé 2002, Cahiers Santé 2002

Définition de la chimiorésistanceDéfinition de la chimiorésistance

Chimiorésistance = aptitude d’une souche à Chimiorésistance = aptitude d’une souche à survivre ou à se reproduire malgré survivre ou à se reproduire malgré l’administration et l’absorption d’un l’administration et l’absorption d’un médicament employé à des doses égales médicament employé à des doses égales ou supérieures aux doses ordinairement ou supérieures aux doses ordinairement recommandées mais comprises dans les recommandées mais comprises dans les limites de tolérance du sujet.limites de tolérance du sujet.

Marqueurs génétiques opérationnels Marqueurs génétiques opérationnels de la résistance de de la résistance de PP. . falciparum falciparum (1)(1)

PyriméthaminePyriméthamine ::

Protéine cible : Protéine cible : DHFRDHFR

Mutations du gène Mutations du gène pfdhfr pfdhfr associées à la associées à la résistance à la pyriméthaminerésistance à la pyriméthamineSerineSerine--108 (S108) → 108108 (S108) → 108--Asparagine (108N)Asparagine (108N)CysteineCysteine--59 (C59) → 5959 (C59) → 59--ArginineArginine--59 (59R)59 (59R)AsparagineAsparagine--51 (N51) → 5151 (N51) → 51--Isoleucine(51I)Isoleucine(51I)

Marqueurs génétiques opérationnels Marqueurs génétiques opérationnels de la résistance de de la résistance de P.P. falciparum falciparum (2)(2)

AssociationAssociation sulfadoxinesulfadoxine--pyriméthaminepyriméthamine2 2 protéinesprotéines cibles :cibles : DHPSDHPS et et DHFRDHFR

Des mutations qui peuvent rendre compte de la Des mutations qui peuvent rendre compte de la résistance à cette associationrésistance à cette association

pfdhfrpfdhfr SerineSerine--108 → 108108 → 108--AsparagineAsparagineCysteineCysteine--59 → 5959 → 59--ArginineArginineAsparagineAsparagine--51 → 5151 → 51--IsoleucineIsoleucine

pfdhpspfdhps AlanineAlanine--437 (A437) 437 (A437) →→ 437437--Glycine (437G)Glycine (437G)LysineLysine--540 (K540) 540 (K540) →→ 540540--Glutamic (540ZGlutamic (540Z

Marqueurs génétiques opérationnels Marqueurs génétiques opérationnels de la résistance de de la résistance de PP. . falciparum falciparum (3)(3)

Chloroquine Chloroquine Protéine impliquée : Protéine impliquée : CRTCRT

Mutation associée au phénotype résistant :Mutation associée au phénotype résistant :lysinelysine--76 (K76) → 7676 (K76) → 76--thréonine (76T )thréonine (76T )

((FidockFidock et et alal., 2000; Randrianarivelojosia M et al. 2002)., 2000; Randrianarivelojosia M et al. 2002)

Détections des mutationsDétections des mutations

extraction de l’ADN parasitaireextraction de l’ADN parasitaireamplification de la région d’intérêt du génomeamplification de la région d’intérêt du génomeséquençage du produit d’amplificationséquençage du produit d’amplificationou digestion du produit d’amplification avec de ou digestion du produit d’amplification avec de

l’enzyme de restriction pour différencier mutés/non l’enzyme de restriction pour différencier mutés/non mutés et visualisation des bandes (PCR/RFLP)mutés et visualisation des bandes (PCR/RFLP)

Illustration de la PCR/RFLPPhotos de gél après incubation de l’amplicon de pfdhfr en

présence de l’enzyme de restriction AluI

Pas de coupure =MUTANT

i.e. résistant

Coupure(presence du site

de coupure) =SAUVAGE

i.e. sensible à la pyriméthamine

Les ComoresLes Comores

Quelle (s) alternative (s) thérapeutique (s) ?

Où est le paludisme à Où est le paludisme à P. falciparumP. falciparumchimiorésistantchimiorésistant ??

ConclusionConclusionLes résistances de Les résistances de P. falciparumP. falciparum sont liées à une ou sont liées à une ou plusieurs mutations chromosomiques.plusieurs mutations chromosomiques.Les marqueurs génétiques de la résistance permettent et Les marqueurs génétiques de la résistance permettent et permettront de surveiller la sensibilité de permettront de surveiller la sensibilité de PlasmodiumPlasmodium aux aux antipaludiques à grande échelle. antipaludiques à grande échelle. Les marqueurs génétiques offrent et offriront comme Les marqueurs génétiques offrent et offriront comme avantage la possibilité de tester la sensibilité d’un isolat de avantage la possibilité de tester la sensibilité d’un isolat de plasmodies à différents antipaludiques.plasmodies à différents antipaludiques.Les résultats permettent d’identifier des alternatives Les résultats permettent d’identifier des alternatives potentielles aux médicaments de première ou de potentielles aux médicaments de première ou de deuxième lignes.deuxième lignes.

BibliographieBibliographieJ.Le Bras Mécanismes et dynamique des chimiorésistances de J.Le Bras Mécanismes et dynamique des chimiorésistances de PP.falciparum ..falciparum .Journée SPE du 13 octobre 1999.Journée SPE du 13 octobre 1999.J.Delmont et chimiorésistance du paludisme difficultés J.Delmont et chimiorésistance du paludisme difficultés d’aujourd’hui d’aujourd’hui médecine d’Afrique noire 1990, 37; 7médecine d’Afrique noire 1990, 37; 7J.Gardon et al évaluation de la chloroquinoJ.Gardon et al évaluation de la chloroquino--sensibilité de Psensibilité de P.falciparum.falciparum au au Cameroun médecine d’Afrique noire 1991,38,4Cameroun médecine d’Afrique noire 1991,38,4M.Randrianarivelojosia et al M.Randrianarivelojosia et al Réseau d’Etude de la Résistance (RER) Réseau d’Etude de la Résistance (RER) pour pérenniser la surveillance de la sensibilité de pour pérenniser la surveillance de la sensibilité de Plasmodium Plasmodium falciparum falciparum aux antipaludiques à Madagascar 2002 68 ( 1&2):73aux antipaludiques à Madagascar 2002 68 ( 1&2):73--7878L. Basco, P. RingwaldL. Basco, P. Ringwald Cahiers d'études et de recherches Cahiers d'études et de recherches francophones / Santé. Vol. 10, N°1, Janvier francophones / Santé. Vol. 10, N°1, Janvier -- Février 2000 : 47Février 2000 : 47--5050

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http://http://www.johnwww.john--libbeylibbey--eurotext.freurotext.fr/articles//articles/sansan/10/1/47/10/1/47--5050//