Diagnostic biologique de l’infection respiratoire à ...
32
Diagnostic biologique de l’infection respiratoire à Legionella pneumophila Y.K. SOUAMI, S. TARIGHT-MAHI, M. HASNI, H. AMARI, S. GUETTOUCHE, D. YALA, M. GHAFFOUR et le réseau d’infection respiratoire basse. Les journées de LAMM, le 12 octobre 2019 Hôtel El-Aurassi (Alger)
Transcript of Diagnostic biologique de l’infection respiratoire à ...
Diagnostic biologique de lrsquoinfection respiratoire agrave Legionella pneumophila
YK SOUAMI S TARIGHT-MAHI M HASNI
H AMARI S GUETTOUCHE D YALA M GHAFFOUR
et le reacuteseau drsquoinfection respiratoire basse
Les journeacutees de LAMM le 12 octobre 2019
Hocirctel El-Aurassi (Alger)
Legionellose et santeacute publique MDO Deuxiegraveme cause de pneumonies seacutevegraveres ( apregraves Spneumoniae)
Taux de leacutetaliteacute eacuteleveacute 10 qui peut aller jusqursquoagrave 27 si le traitement antibiotique cibleacute anti-Legionella nrsquoest pas administreacute agrave temps
2-15 des pneumonies communautaires hospitaliseacutees en Europe et en Ameacuterique du Nord
Evolution rapide Aucun singe speacutecifique Notion de resistance aux Beacutetalactamines
Suspecteacute devant une pneumonie +-Sneurologiques etou Sdigestifs Preacutesence de biomarqueurs
Morbiditeacute agrave long terme (neurologique respiratoire)
Importance drsquoun diagnostic preacutecoce et de certitude
Phin N and al Lancet Infect Dis 2014 Oct14(10)1011-21
Lettinga KDand al Cln infect Dis2002 Jul 135(1
Historique
Legionella est une bacteacuterie deacutecouverte en 1977
lrsquohocirctel Bellevue-Stratford agrave Philadelphie (USA) en juillet 1976
58 eacuteme congreacutes des Legionnaires
Fraser DW and al N Engl JMed 2971189-1197 1977
Mc Dade JE and al N Engl JMed 2971197-12031977
Enquecircte du CDC
Legionella pathogegravene pour lrsquoHomme
61 espegraveces
Legionella pneumophila 915 des cas de legionellose
Legionella pneumophila serogroupe 1 79 - 842 des cas de legionellose
Legionella pneumophila a 16 serogroupes
Legionella non-pneumophila pathogegravene pour lrsquoHomme 27 espegraveces
L anisa L birminghamensis L bozemanii L cardiaca L cincinnatiensis L clemsonensis L dumoffii L erythra L feeleii L gormanii L hackeliae L jamestowniensis L jordansi s L lansingensis L londiniensis L longbeachae L lytica L maceachernii L micdadei L nagasakiensis L oakridgensis L parisiensisL sainthelensi L steelei L tucsonensis L wadsworthii L waltersii
wbacterionetlegionellahtml
Yu VL and al J Infect Dis 2002 Jul 1186(1)127-8
ECDC Technical document European Legionnairesrsquo Disease Surveillance Network (ELDSNet) Operating procedures for the surveillance of travel associated Legionnairesrsquo disease in the EUEEA 2017
Caracteacuteristiques microbiologiques
Bacille Gram neacutegatif non sporuleacute non capsuleacutemobile
Aeacuterobie stricte exigeant ( fer L-cysteine)
JGrosjean et al In Bacteacuteriologie et Virologie pratiquepp173-175 (2011) 2 eacuteme eacutedition Editeur de Boeck
Biochimie
Espegravece
Catalase Oxydase Geacutelatinase Mobiliteacute Hydrolyse
lrsquohippurate
Lpneumphila + +faible + + Variable
Bacteacuterie de lrsquoenvironnement hydrotellurique et meacutesophile
Inhalation drsquoaeacuterosols
03 formes cliniques de seacuteveacuteriteacute diffeacuterentes
Habitat reacuteservoirs naturels et artificiels
Legionellose infection opportuniste
Mercante JW Winchell JM 2015 Clin Microbiol Rev 2880ndash118
Deacutefinition de la legionellose diagnostic biologique Pneumonie clinique etou radiologique avec au moins un
des signes biologiques -Cas confirmeacute au moins un des signes
bull Isolement de la souche de Legionella sp dans des seacutecretions respiratoires ou dans le tissu pulmonaire ou un epanchement pleural ou tout autre preacutelegravevement qui est normalement steacuterile
bull Preacutesence drsquoantigegravenes urinaires de Legionella pneumophila Le CDC preacutecise le serogroupe 1 de Legionella pneumophila par des reacuteactifs valideacutes
bull Seacuterocoversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 en utilisant des reacuteactifs valideacutes et utiliseacutes sur une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparemment de trois agrave six semaines drsquointervalle
-Cas probable au moins un des signes
bull Preacutesence drsquoacides nucleacuteiques (ADN) de Legionella sp dans les seacutecretions respiratoires dans le tissu de poumon ou de toute localisation qui est normalement steacuterile par une technique valideacutee (ex polymerase chain reaction dite PCR)
bull Preacutesence drsquoantigegravenes de Legionella pneumophila dans les seacutecreacutetions respiratoires ou dans le tissu de poumon ou dans lrsquoepanchement pleural ex immunofluorescence directe en utilisant des anticorps monoclonaux coloration par immunohistochimie
bull Seacuteroconversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps anti-Legionella pneumophila autre que ceux dirigeacutes contre Legionella pneumophila serogroupe 1 ou dirigeacute contre Legionella sp dans une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparement de trois agrave six semaines drsquointervalle en utilisant des reacuteactifs valideacutes
bull Unique taux eacuteleveacute drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 dans le seacuterum Ce critegravere nrsquoest pas indiqueacute par le CDC aux Etats Unis
Biomarqueurs Syndrome inflammatoire
( CRP ge180 mgl ferriteacuteneacutemie 2xNle Tax de GB nrsquoest pas tregraves augmenteacute ndash autour de 12 000 eacutelegravementsmm3 relative lymphopeacutenie)
Hypophosphateacutemie transitoire (preacutecoce)
Hyponatreacutemie profonde (le133 mEql)
LDH et CPK eacuteleveacutees
Dysfonctionnement heacutepatique augmentation des transaminases (2-5xNle) parfois syndrome de cholestase
Dysfonctionnement reacutenal ( heacutematurie sans explication creacuteatineacutemie eacuteleveacutee insuffisance reacutenale aigue)
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Legionellose et santeacute publique MDO Deuxiegraveme cause de pneumonies seacutevegraveres ( apregraves Spneumoniae)
Taux de leacutetaliteacute eacuteleveacute 10 qui peut aller jusqursquoagrave 27 si le traitement antibiotique cibleacute anti-Legionella nrsquoest pas administreacute agrave temps
2-15 des pneumonies communautaires hospitaliseacutees en Europe et en Ameacuterique du Nord
Evolution rapide Aucun singe speacutecifique Notion de resistance aux Beacutetalactamines
Suspecteacute devant une pneumonie +-Sneurologiques etou Sdigestifs Preacutesence de biomarqueurs
Morbiditeacute agrave long terme (neurologique respiratoire)
Importance drsquoun diagnostic preacutecoce et de certitude
Phin N and al Lancet Infect Dis 2014 Oct14(10)1011-21
Lettinga KDand al Cln infect Dis2002 Jul 135(1
Historique
Legionella est une bacteacuterie deacutecouverte en 1977
lrsquohocirctel Bellevue-Stratford agrave Philadelphie (USA) en juillet 1976
58 eacuteme congreacutes des Legionnaires
Fraser DW and al N Engl JMed 2971189-1197 1977
Mc Dade JE and al N Engl JMed 2971197-12031977
Enquecircte du CDC
Legionella pathogegravene pour lrsquoHomme
61 espegraveces
Legionella pneumophila 915 des cas de legionellose
Legionella pneumophila serogroupe 1 79 - 842 des cas de legionellose
Legionella pneumophila a 16 serogroupes
Legionella non-pneumophila pathogegravene pour lrsquoHomme 27 espegraveces
L anisa L birminghamensis L bozemanii L cardiaca L cincinnatiensis L clemsonensis L dumoffii L erythra L feeleii L gormanii L hackeliae L jamestowniensis L jordansi s L lansingensis L londiniensis L longbeachae L lytica L maceachernii L micdadei L nagasakiensis L oakridgensis L parisiensisL sainthelensi L steelei L tucsonensis L wadsworthii L waltersii
wbacterionetlegionellahtml
Yu VL and al J Infect Dis 2002 Jul 1186(1)127-8
ECDC Technical document European Legionnairesrsquo Disease Surveillance Network (ELDSNet) Operating procedures for the surveillance of travel associated Legionnairesrsquo disease in the EUEEA 2017
Caracteacuteristiques microbiologiques
Bacille Gram neacutegatif non sporuleacute non capsuleacutemobile
Aeacuterobie stricte exigeant ( fer L-cysteine)
JGrosjean et al In Bacteacuteriologie et Virologie pratiquepp173-175 (2011) 2 eacuteme eacutedition Editeur de Boeck
Biochimie
Espegravece
Catalase Oxydase Geacutelatinase Mobiliteacute Hydrolyse
lrsquohippurate
Lpneumphila + +faible + + Variable
Bacteacuterie de lrsquoenvironnement hydrotellurique et meacutesophile
Inhalation drsquoaeacuterosols
03 formes cliniques de seacuteveacuteriteacute diffeacuterentes
Habitat reacuteservoirs naturels et artificiels
Legionellose infection opportuniste
Mercante JW Winchell JM 2015 Clin Microbiol Rev 2880ndash118
Deacutefinition de la legionellose diagnostic biologique Pneumonie clinique etou radiologique avec au moins un
des signes biologiques -Cas confirmeacute au moins un des signes
bull Isolement de la souche de Legionella sp dans des seacutecretions respiratoires ou dans le tissu pulmonaire ou un epanchement pleural ou tout autre preacutelegravevement qui est normalement steacuterile
bull Preacutesence drsquoantigegravenes urinaires de Legionella pneumophila Le CDC preacutecise le serogroupe 1 de Legionella pneumophila par des reacuteactifs valideacutes
bull Seacuterocoversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 en utilisant des reacuteactifs valideacutes et utiliseacutes sur une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparemment de trois agrave six semaines drsquointervalle
-Cas probable au moins un des signes
bull Preacutesence drsquoacides nucleacuteiques (ADN) de Legionella sp dans les seacutecretions respiratoires dans le tissu de poumon ou de toute localisation qui est normalement steacuterile par une technique valideacutee (ex polymerase chain reaction dite PCR)
bull Preacutesence drsquoantigegravenes de Legionella pneumophila dans les seacutecreacutetions respiratoires ou dans le tissu de poumon ou dans lrsquoepanchement pleural ex immunofluorescence directe en utilisant des anticorps monoclonaux coloration par immunohistochimie
bull Seacuteroconversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps anti-Legionella pneumophila autre que ceux dirigeacutes contre Legionella pneumophila serogroupe 1 ou dirigeacute contre Legionella sp dans une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparement de trois agrave six semaines drsquointervalle en utilisant des reacuteactifs valideacutes
bull Unique taux eacuteleveacute drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 dans le seacuterum Ce critegravere nrsquoest pas indiqueacute par le CDC aux Etats Unis
Biomarqueurs Syndrome inflammatoire
( CRP ge180 mgl ferriteacuteneacutemie 2xNle Tax de GB nrsquoest pas tregraves augmenteacute ndash autour de 12 000 eacutelegravementsmm3 relative lymphopeacutenie)
Hypophosphateacutemie transitoire (preacutecoce)
Hyponatreacutemie profonde (le133 mEql)
LDH et CPK eacuteleveacutees
Dysfonctionnement heacutepatique augmentation des transaminases (2-5xNle) parfois syndrome de cholestase
Dysfonctionnement reacutenal ( heacutematurie sans explication creacuteatineacutemie eacuteleveacutee insuffisance reacutenale aigue)
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Historique
Legionella est une bacteacuterie deacutecouverte en 1977
lrsquohocirctel Bellevue-Stratford agrave Philadelphie (USA) en juillet 1976
58 eacuteme congreacutes des Legionnaires
Fraser DW and al N Engl JMed 2971189-1197 1977
Mc Dade JE and al N Engl JMed 2971197-12031977
Enquecircte du CDC
Legionella pathogegravene pour lrsquoHomme
61 espegraveces
Legionella pneumophila 915 des cas de legionellose
Legionella pneumophila serogroupe 1 79 - 842 des cas de legionellose
Legionella pneumophila a 16 serogroupes
Legionella non-pneumophila pathogegravene pour lrsquoHomme 27 espegraveces
L anisa L birminghamensis L bozemanii L cardiaca L cincinnatiensis L clemsonensis L dumoffii L erythra L feeleii L gormanii L hackeliae L jamestowniensis L jordansi s L lansingensis L londiniensis L longbeachae L lytica L maceachernii L micdadei L nagasakiensis L oakridgensis L parisiensisL sainthelensi L steelei L tucsonensis L wadsworthii L waltersii
wbacterionetlegionellahtml
Yu VL and al J Infect Dis 2002 Jul 1186(1)127-8
ECDC Technical document European Legionnairesrsquo Disease Surveillance Network (ELDSNet) Operating procedures for the surveillance of travel associated Legionnairesrsquo disease in the EUEEA 2017
Caracteacuteristiques microbiologiques
Bacille Gram neacutegatif non sporuleacute non capsuleacutemobile
Aeacuterobie stricte exigeant ( fer L-cysteine)
JGrosjean et al In Bacteacuteriologie et Virologie pratiquepp173-175 (2011) 2 eacuteme eacutedition Editeur de Boeck
Biochimie
Espegravece
Catalase Oxydase Geacutelatinase Mobiliteacute Hydrolyse
lrsquohippurate
Lpneumphila + +faible + + Variable
Bacteacuterie de lrsquoenvironnement hydrotellurique et meacutesophile
Inhalation drsquoaeacuterosols
03 formes cliniques de seacuteveacuteriteacute diffeacuterentes
Habitat reacuteservoirs naturels et artificiels
Legionellose infection opportuniste
Mercante JW Winchell JM 2015 Clin Microbiol Rev 2880ndash118
Deacutefinition de la legionellose diagnostic biologique Pneumonie clinique etou radiologique avec au moins un
des signes biologiques -Cas confirmeacute au moins un des signes
bull Isolement de la souche de Legionella sp dans des seacutecretions respiratoires ou dans le tissu pulmonaire ou un epanchement pleural ou tout autre preacutelegravevement qui est normalement steacuterile
bull Preacutesence drsquoantigegravenes urinaires de Legionella pneumophila Le CDC preacutecise le serogroupe 1 de Legionella pneumophila par des reacuteactifs valideacutes
bull Seacuterocoversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 en utilisant des reacuteactifs valideacutes et utiliseacutes sur une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparemment de trois agrave six semaines drsquointervalle
-Cas probable au moins un des signes
bull Preacutesence drsquoacides nucleacuteiques (ADN) de Legionella sp dans les seacutecretions respiratoires dans le tissu de poumon ou de toute localisation qui est normalement steacuterile par une technique valideacutee (ex polymerase chain reaction dite PCR)
bull Preacutesence drsquoantigegravenes de Legionella pneumophila dans les seacutecreacutetions respiratoires ou dans le tissu de poumon ou dans lrsquoepanchement pleural ex immunofluorescence directe en utilisant des anticorps monoclonaux coloration par immunohistochimie
bull Seacuteroconversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps anti-Legionella pneumophila autre que ceux dirigeacutes contre Legionella pneumophila serogroupe 1 ou dirigeacute contre Legionella sp dans une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparement de trois agrave six semaines drsquointervalle en utilisant des reacuteactifs valideacutes
bull Unique taux eacuteleveacute drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 dans le seacuterum Ce critegravere nrsquoest pas indiqueacute par le CDC aux Etats Unis
Biomarqueurs Syndrome inflammatoire
( CRP ge180 mgl ferriteacuteneacutemie 2xNle Tax de GB nrsquoest pas tregraves augmenteacute ndash autour de 12 000 eacutelegravementsmm3 relative lymphopeacutenie)
Hypophosphateacutemie transitoire (preacutecoce)
Hyponatreacutemie profonde (le133 mEql)
LDH et CPK eacuteleveacutees
Dysfonctionnement heacutepatique augmentation des transaminases (2-5xNle) parfois syndrome de cholestase
Dysfonctionnement reacutenal ( heacutematurie sans explication creacuteatineacutemie eacuteleveacutee insuffisance reacutenale aigue)
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Legionella pathogegravene pour lrsquoHomme
61 espegraveces
Legionella pneumophila 915 des cas de legionellose
Legionella pneumophila serogroupe 1 79 - 842 des cas de legionellose
Legionella pneumophila a 16 serogroupes
Legionella non-pneumophila pathogegravene pour lrsquoHomme 27 espegraveces
L anisa L birminghamensis L bozemanii L cardiaca L cincinnatiensis L clemsonensis L dumoffii L erythra L feeleii L gormanii L hackeliae L jamestowniensis L jordansi s L lansingensis L londiniensis L longbeachae L lytica L maceachernii L micdadei L nagasakiensis L oakridgensis L parisiensisL sainthelensi L steelei L tucsonensis L wadsworthii L waltersii
wbacterionetlegionellahtml
Yu VL and al J Infect Dis 2002 Jul 1186(1)127-8
ECDC Technical document European Legionnairesrsquo Disease Surveillance Network (ELDSNet) Operating procedures for the surveillance of travel associated Legionnairesrsquo disease in the EUEEA 2017
Caracteacuteristiques microbiologiques
Bacille Gram neacutegatif non sporuleacute non capsuleacutemobile
Aeacuterobie stricte exigeant ( fer L-cysteine)
JGrosjean et al In Bacteacuteriologie et Virologie pratiquepp173-175 (2011) 2 eacuteme eacutedition Editeur de Boeck
Biochimie
Espegravece
Catalase Oxydase Geacutelatinase Mobiliteacute Hydrolyse
lrsquohippurate
Lpneumphila + +faible + + Variable
Bacteacuterie de lrsquoenvironnement hydrotellurique et meacutesophile
Inhalation drsquoaeacuterosols
03 formes cliniques de seacuteveacuteriteacute diffeacuterentes
Habitat reacuteservoirs naturels et artificiels
Legionellose infection opportuniste
Mercante JW Winchell JM 2015 Clin Microbiol Rev 2880ndash118
Deacutefinition de la legionellose diagnostic biologique Pneumonie clinique etou radiologique avec au moins un
des signes biologiques -Cas confirmeacute au moins un des signes
bull Isolement de la souche de Legionella sp dans des seacutecretions respiratoires ou dans le tissu pulmonaire ou un epanchement pleural ou tout autre preacutelegravevement qui est normalement steacuterile
bull Preacutesence drsquoantigegravenes urinaires de Legionella pneumophila Le CDC preacutecise le serogroupe 1 de Legionella pneumophila par des reacuteactifs valideacutes
bull Seacuterocoversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 en utilisant des reacuteactifs valideacutes et utiliseacutes sur une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparemment de trois agrave six semaines drsquointervalle
-Cas probable au moins un des signes
bull Preacutesence drsquoacides nucleacuteiques (ADN) de Legionella sp dans les seacutecretions respiratoires dans le tissu de poumon ou de toute localisation qui est normalement steacuterile par une technique valideacutee (ex polymerase chain reaction dite PCR)
bull Preacutesence drsquoantigegravenes de Legionella pneumophila dans les seacutecreacutetions respiratoires ou dans le tissu de poumon ou dans lrsquoepanchement pleural ex immunofluorescence directe en utilisant des anticorps monoclonaux coloration par immunohistochimie
bull Seacuteroconversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps anti-Legionella pneumophila autre que ceux dirigeacutes contre Legionella pneumophila serogroupe 1 ou dirigeacute contre Legionella sp dans une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparement de trois agrave six semaines drsquointervalle en utilisant des reacuteactifs valideacutes
bull Unique taux eacuteleveacute drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 dans le seacuterum Ce critegravere nrsquoest pas indiqueacute par le CDC aux Etats Unis
Biomarqueurs Syndrome inflammatoire
( CRP ge180 mgl ferriteacuteneacutemie 2xNle Tax de GB nrsquoest pas tregraves augmenteacute ndash autour de 12 000 eacutelegravementsmm3 relative lymphopeacutenie)
Hypophosphateacutemie transitoire (preacutecoce)
Hyponatreacutemie profonde (le133 mEql)
LDH et CPK eacuteleveacutees
Dysfonctionnement heacutepatique augmentation des transaminases (2-5xNle) parfois syndrome de cholestase
Dysfonctionnement reacutenal ( heacutematurie sans explication creacuteatineacutemie eacuteleveacutee insuffisance reacutenale aigue)
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Caracteacuteristiques microbiologiques
Bacille Gram neacutegatif non sporuleacute non capsuleacutemobile
Aeacuterobie stricte exigeant ( fer L-cysteine)
JGrosjean et al In Bacteacuteriologie et Virologie pratiquepp173-175 (2011) 2 eacuteme eacutedition Editeur de Boeck
Biochimie
Espegravece
Catalase Oxydase Geacutelatinase Mobiliteacute Hydrolyse
lrsquohippurate
Lpneumphila + +faible + + Variable
Bacteacuterie de lrsquoenvironnement hydrotellurique et meacutesophile
Inhalation drsquoaeacuterosols
03 formes cliniques de seacuteveacuteriteacute diffeacuterentes
Habitat reacuteservoirs naturels et artificiels
Legionellose infection opportuniste
Mercante JW Winchell JM 2015 Clin Microbiol Rev 2880ndash118
Deacutefinition de la legionellose diagnostic biologique Pneumonie clinique etou radiologique avec au moins un
des signes biologiques -Cas confirmeacute au moins un des signes
bull Isolement de la souche de Legionella sp dans des seacutecretions respiratoires ou dans le tissu pulmonaire ou un epanchement pleural ou tout autre preacutelegravevement qui est normalement steacuterile
bull Preacutesence drsquoantigegravenes urinaires de Legionella pneumophila Le CDC preacutecise le serogroupe 1 de Legionella pneumophila par des reacuteactifs valideacutes
bull Seacuterocoversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 en utilisant des reacuteactifs valideacutes et utiliseacutes sur une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparemment de trois agrave six semaines drsquointervalle
-Cas probable au moins un des signes
bull Preacutesence drsquoacides nucleacuteiques (ADN) de Legionella sp dans les seacutecretions respiratoires dans le tissu de poumon ou de toute localisation qui est normalement steacuterile par une technique valideacutee (ex polymerase chain reaction dite PCR)
bull Preacutesence drsquoantigegravenes de Legionella pneumophila dans les seacutecreacutetions respiratoires ou dans le tissu de poumon ou dans lrsquoepanchement pleural ex immunofluorescence directe en utilisant des anticorps monoclonaux coloration par immunohistochimie
bull Seacuteroconversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps anti-Legionella pneumophila autre que ceux dirigeacutes contre Legionella pneumophila serogroupe 1 ou dirigeacute contre Legionella sp dans une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparement de trois agrave six semaines drsquointervalle en utilisant des reacuteactifs valideacutes
bull Unique taux eacuteleveacute drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 dans le seacuterum Ce critegravere nrsquoest pas indiqueacute par le CDC aux Etats Unis
Biomarqueurs Syndrome inflammatoire
( CRP ge180 mgl ferriteacuteneacutemie 2xNle Tax de GB nrsquoest pas tregraves augmenteacute ndash autour de 12 000 eacutelegravementsmm3 relative lymphopeacutenie)
Hypophosphateacutemie transitoire (preacutecoce)
Hyponatreacutemie profonde (le133 mEql)
LDH et CPK eacuteleveacutees
Dysfonctionnement heacutepatique augmentation des transaminases (2-5xNle) parfois syndrome de cholestase
Dysfonctionnement reacutenal ( heacutematurie sans explication creacuteatineacutemie eacuteleveacutee insuffisance reacutenale aigue)
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Bacteacuterie de lrsquoenvironnement hydrotellurique et meacutesophile
Inhalation drsquoaeacuterosols
03 formes cliniques de seacuteveacuteriteacute diffeacuterentes
Habitat reacuteservoirs naturels et artificiels
Legionellose infection opportuniste
Mercante JW Winchell JM 2015 Clin Microbiol Rev 2880ndash118
Deacutefinition de la legionellose diagnostic biologique Pneumonie clinique etou radiologique avec au moins un
des signes biologiques -Cas confirmeacute au moins un des signes
bull Isolement de la souche de Legionella sp dans des seacutecretions respiratoires ou dans le tissu pulmonaire ou un epanchement pleural ou tout autre preacutelegravevement qui est normalement steacuterile
bull Preacutesence drsquoantigegravenes urinaires de Legionella pneumophila Le CDC preacutecise le serogroupe 1 de Legionella pneumophila par des reacuteactifs valideacutes
bull Seacuterocoversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 en utilisant des reacuteactifs valideacutes et utiliseacutes sur une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparemment de trois agrave six semaines drsquointervalle
-Cas probable au moins un des signes
bull Preacutesence drsquoacides nucleacuteiques (ADN) de Legionella sp dans les seacutecretions respiratoires dans le tissu de poumon ou de toute localisation qui est normalement steacuterile par une technique valideacutee (ex polymerase chain reaction dite PCR)
bull Preacutesence drsquoantigegravenes de Legionella pneumophila dans les seacutecreacutetions respiratoires ou dans le tissu de poumon ou dans lrsquoepanchement pleural ex immunofluorescence directe en utilisant des anticorps monoclonaux coloration par immunohistochimie
bull Seacuteroconversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps anti-Legionella pneumophila autre que ceux dirigeacutes contre Legionella pneumophila serogroupe 1 ou dirigeacute contre Legionella sp dans une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparement de trois agrave six semaines drsquointervalle en utilisant des reacuteactifs valideacutes
bull Unique taux eacuteleveacute drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 dans le seacuterum Ce critegravere nrsquoest pas indiqueacute par le CDC aux Etats Unis
Biomarqueurs Syndrome inflammatoire
( CRP ge180 mgl ferriteacuteneacutemie 2xNle Tax de GB nrsquoest pas tregraves augmenteacute ndash autour de 12 000 eacutelegravementsmm3 relative lymphopeacutenie)
Hypophosphateacutemie transitoire (preacutecoce)
Hyponatreacutemie profonde (le133 mEql)
LDH et CPK eacuteleveacutees
Dysfonctionnement heacutepatique augmentation des transaminases (2-5xNle) parfois syndrome de cholestase
Dysfonctionnement reacutenal ( heacutematurie sans explication creacuteatineacutemie eacuteleveacutee insuffisance reacutenale aigue)
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Deacutefinition de la legionellose diagnostic biologique Pneumonie clinique etou radiologique avec au moins un
des signes biologiques -Cas confirmeacute au moins un des signes
bull Isolement de la souche de Legionella sp dans des seacutecretions respiratoires ou dans le tissu pulmonaire ou un epanchement pleural ou tout autre preacutelegravevement qui est normalement steacuterile
bull Preacutesence drsquoantigegravenes urinaires de Legionella pneumophila Le CDC preacutecise le serogroupe 1 de Legionella pneumophila par des reacuteactifs valideacutes
bull Seacuterocoversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 en utilisant des reacuteactifs valideacutes et utiliseacutes sur une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparemment de trois agrave six semaines drsquointervalle
-Cas probable au moins un des signes
bull Preacutesence drsquoacides nucleacuteiques (ADN) de Legionella sp dans les seacutecretions respiratoires dans le tissu de poumon ou de toute localisation qui est normalement steacuterile par une technique valideacutee (ex polymerase chain reaction dite PCR)
bull Preacutesence drsquoantigegravenes de Legionella pneumophila dans les seacutecreacutetions respiratoires ou dans le tissu de poumon ou dans lrsquoepanchement pleural ex immunofluorescence directe en utilisant des anticorps monoclonaux coloration par immunohistochimie
bull Seacuteroconversion augmentation significative drsquoau moins quatre fois du titre drsquoanticorps anti-Legionella pneumophila autre que ceux dirigeacutes contre Legionella pneumophila serogroupe 1 ou dirigeacute contre Legionella sp dans une paire de seacuterum preacuteleveacutes seacuteparement de trois agrave six semaines drsquointervalle en utilisant des reacuteactifs valideacutes
bull Unique taux eacuteleveacute drsquoanticorps speacutecifique anti-Legionella pneumophila serogroupe 1 dans le seacuterum Ce critegravere nrsquoest pas indiqueacute par le CDC aux Etats Unis
Biomarqueurs Syndrome inflammatoire
( CRP ge180 mgl ferriteacuteneacutemie 2xNle Tax de GB nrsquoest pas tregraves augmenteacute ndash autour de 12 000 eacutelegravementsmm3 relative lymphopeacutenie)
Hypophosphateacutemie transitoire (preacutecoce)
Hyponatreacutemie profonde (le133 mEql)
LDH et CPK eacuteleveacutees
Dysfonctionnement heacutepatique augmentation des transaminases (2-5xNle) parfois syndrome de cholestase
Dysfonctionnement reacutenal ( heacutematurie sans explication creacuteatineacutemie eacuteleveacutee insuffisance reacutenale aigue)
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Biomarqueurs Syndrome inflammatoire
( CRP ge180 mgl ferriteacuteneacutemie 2xNle Tax de GB nrsquoest pas tregraves augmenteacute ndash autour de 12 000 eacutelegravementsmm3 relative lymphopeacutenie)
Hypophosphateacutemie transitoire (preacutecoce)
Hyponatreacutemie profonde (le133 mEql)
LDH et CPK eacuteleveacutees
Dysfonctionnement heacutepatique augmentation des transaminases (2-5xNle) parfois syndrome de cholestase
Dysfonctionnement reacutenal ( heacutematurie sans explication creacuteatineacutemie eacuteleveacutee insuffisance reacutenale aigue)
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Meacutet
hod
e
Deacutelai Ech Se () Sp () Avantages Inconveacutenients
Cult
ure
3-10 j sang lt10-80 99-100 -Diag de certitude
-Deacuteteacutecte toutes les eacutespegraveces
et seacuterogroupes
-Indispensables aux
enquecirctes eacutepideacutemiologiques
-Lente (10 j)
-Peu sensibile
-Neacutegativation rapide sous traitement
IFD lt4 h resp 25-70 gt95 -Rapide -Lab specialiseacutes
-Reacuteactions croiseacutees
Seacutero
logie
3-4
sem
seacuterum 60-80 gt95 -Identification des
seacuterogroupes
-Peu drsquointerecirct en phase aigue
-Doit ecirctre interpreacuteteacutee avec preacutecaution
-Diag reacutetrospectif (ex enquecircte
eacutepideacutemiologique seropreacutevalence)
Anti
geacutenu
rie
lt1h-
4h
urine 56-80
(Lp1)
gt99 -rapide preacutecoce
Reste positif mecircme apregraves
traitement
-ne permet pas la deacutetection fiable que Lp1
PCR 24 h resp 80-100 gt90 Deacutetecte toutes les espegravece et
tous les seacuterogroupes
Rapide
-Lab specialiseacutes
-critegravere de diagnostic probable et non
deacutefinitif des cas
seacuterum 30-50
urine 46-86
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des antigegravenes urinaires (1 )
Principe deacutetecter les LPS de la paroi de Legionella pneumophila dans les urines par des anticorps speacutecifiques
Preacutelegravevement urines agrave nrsquoimporte quel moment de la journeacutee dans un reacutecipient steacuterile
sans condition preacutealable
Meacutethodes utiliseacutees
Rapide (15 mn-60mn) Immunochromatographie
Immunofluorescence
Deacutelai de 4 heures Immuno-enzymatique
Performances
Sensibiliteacute 74 (IC95 68-81)
Speacutecificiteacute 991 (IC95 984-997)
Shimada T and al Chest 20091361576ndash85
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 la majoriteacute des tests (eacutepideacutemiologie)Quelques exemples drsquoillustration de la simpliciteacute drsquoutilisation
Sensibiliteacute peut ecirctre ameacutelioreacutee par des lecteurs selon le fabricant
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunofluorescence
Impeacuterativement chauffer les urines Ne pas allonger le temps drsquoincubation
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et 6
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Legionella longbeachae
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des antigegravenes urinaires (2 ) Tests unitaires ( tests rapides)
Tests immunochromatographiques
bull Legionella pneumophila serogroupe 1 et Streptococcus pneumoniae
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des antigegravenes urinaires (3 ) Deacutelai de 4 heures Tests immuno-enzymatiques
bull Plus sensible que la meacutethode immun chromatographique
bull Deacutetecte des seacuterogroupes de Legionella pneumophila non cibleacutes par le test (reacuteactions croiseacutees)
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Antigegravenurie de Legionella pneumophila
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats positifs
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
SBlanco and al
Antigegravenurie de Legionella pneumophila Concentration des urines pour augmenter la
sensibiliteacute des tests
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Antigegravenurie de Legionella pneumophila allongement agrave 60 mn le temps de lecture
des tests rapides (Immunochromatographie) sauf ceux dont le principe est lrsquoimmunofluorescence
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Avantages du test
1 Adapteacute agrave lrsquourgence
2 Non invasif
3 Aucun impact de lrsquoantibiotheacuterapie sur la persistance des antigegravenes urinaires contrairement agrave la culture et la PCR
4 Diagnostic rapide preacutecoce de certitude
5 Couvre la majoriteacute des patients (cible Legionella pneumophila seacuterogroupe 1 Mab 31 + c-a-d le plus freacutequent )
6 Adapteacute aux situations drsquourgence (eacutepideacutemie et niveau individuel)
AGRanc et al In pp -
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
Une NEGATIVITE de lrsquoantigeacutenurie NrsquoELIMINE PAS le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave
Legionella pneumophila
Neacutecessiteacute drsquoassocier au moins un deuxiegraveme test (Culture etou PCR des preacutelegravevements respiratoires)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
1 Cible des tests de recherche des LPS de Legionella pneumophila Lp serogroupe 1 souche pontiac ( Mab 31 + dans le panel de Dresden)
Ne couvre pas tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila
Origine de lrsquoinfection (nosocomiale communautaire associeacutee au voyage)
Reacuteactions croiseacutees avec drsquoautres seacuterogroupes
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
2- Seacuteveacuteriteacute de la forme clinique
40-53 pour les formes modereacutees
88-100 pour les formes seacutevegraveres (besoin drsquohospitalisation immeacutediate en
uniteacute de soins intensifs)
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Antigeacutenurie de Legionella pneumophila Limites agrave prendre en compte lors de lrsquointerpreacutetation
3- Cineacutetique drsquoexcreacutetion des LPS de Legionella pneumophila persistance apregraves lrsquoeacutepisode aigue de lrsquoinfection
-Tous les patients nrsquoexcreacutetent pas LPS -Deacutelai drsquoexcreacutetion 1 agrave 326 jours apregraves le deacutebut de lrsquoantibiotheacuterapie 1-3 j du deacutebut de la symptomatologie parfois retardeacutee agrave 21 j -Disparition geacuteneacuteralement de quelques jours agrave deux mois -Excreacutetion prolongeacutee agrave plus de 60 j lrsquoimmunosupresssion lrsquoapparition de lrsquoapyrexie apreacutes 72 h apregraves lrsquoinstauration de llsquoantibiotheacuterapie
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Culture de Legionella pneumophila
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Les geacutenes cibleacutes sont 16 sRNA (Lspp) mip (Lp) et wzm (Lp sg 1)
La PCR en temps reacuteel a une sensibiliteacute de 80-100 et une speacutecificiteacute de plus 90 sur les preacutelegravevements respiratoires
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Avantages Deacutetecte les formes modeacutereacutees Permet un diagnostic preacutecoce et rapidement Deacutetecte tous les seacuterogroupes de Legionella pneumophila Evalue le pronostic en fonction de la quantiteacute preacutesente dans les
preacutelegravevements Inconveacutenients Preacutesence drsquoinhibiteurs Possibiliteacute de reacuteactions faussement positives Neacutecessiteacute drsquoun strict respect des bonnes pratiques de laboratoire et drsquoun
raccordement de controcircle qualiteacute externe Neacutecessite eacutequipement speacutecifique (PCR en temps reacuteel)
Amplification geacutenique de Legionella pneumophila
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Principe Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila dirigeacutes contre ses LPS (deacutefinissent les seacuterogroupes)
Meacutethodes utiliseacutees
Immuno- enzymatique (test de screening qui doit ecirctre confirmeacute par IFI)
Immunofluorescence indirecte (IFI)
Les Immunoglobulins rechercheacutees Ig A Ig M et Ig G
Les kits geacuteneacuteralement sont polyvalents (Lp sg1-7)
Applications Etudes eacutepideacutemiologiques
Peu ou pas drsquointerecirct dans le diagnostic de lrsquoinfection respiratoire agrave Lp
A-GRanc and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
Avantages
Diagnostic de lrsquoinfection agrave Legionella pneumophila non seacuterogroupe 1
Diagnostic reacutetrospective et eacutetude eacutepideacutemiologique ( seropreacutevalence)
Deacutepistage de patients potentiellement contamineacutes lors drsquoune eacutepideacutemie
Doit acirctre associeacute aux autres tests elle est test de screening
A-GRanc LBerraud GDesours and coll In Bacteacuteriologie MeacutedicaleTechniques usuellesElsevier-Masson3 eacuteme eacutedition2016pp379-387
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Recherche des anticorps anti-Legionella pneumophila
-Limites
Variation individuelle de reacuteponse
Non reacutepondant (20 ) et des dispariteacutes de reacuteponse selon le type drsquoIg
La preacutesence drsquoIg M ne signe pas la pneumonie
La persistance des immunoglobulines chez les patients ayant preacutesenteacute une legionellose
Reacuteactions croiseacutees Chlamydiae de Mycoplasma de Citrobacter de Campylobacter de Coxiella burnetii de Pseudomonas Bacteriodes fragilis Haemophilus influenzae des leptospires et des Mycobacteacuteries et de Bordetella
les seacuterogroupes de Legionella pneumophila et drsquoautre part avec drsquoautres espegraveces de Legionella non-pneumophila
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Messages cleacutes Associer au moins deux tests sur deux types de preacutelegravevements diffeacuterents
Ex Antigegravenurie + culture antigeacutenurie + PCR
Chauffer les urines avant de valider les reacutesultats
Pour augmenter la sensibiliteacute des tests drsquoantigeacutenurie Elisaconcentration et allongement du temps de lecture des cartes drsquoimunochromatographie
Seacuterologie nrsquoa pas drsquointerecirct dans le diagnostic ( car neacutecessiste un deuxiegraveme preacutelegravevement seacuteroconversions sur 02 preacutelegravevements seacutepareacutes de 4 semaines)
La seacuterologie (sur un premier preacutelegravevement unique) DOIT ETRE ASSOCIEE agrave une deuxiegraveme test pour son interpreacutetation
La seacuterologie soit associer la recherche des Ig A M et G
Elisa est une meacutethode de screening qui doit ecirctre confirmeacutee par lrsquoIFI
Merci pour votre attention
Merci pour votre attention
