4. 1. 2. 3. Techniques de coloration complexe : Coloration de GramC'est une double coloration qui nous permet de connaître la forme, l'arrangement, la puretéainsi que la nature biochimique de la paroi des cellules purifiées.Cette coloration permet de classer les bactéries selon leur capacité à fixer le cristalviolet. Celles qui possèdent une enveloppe externe sont décolorées lors du lavage à l’éthanol(Gram-), alors que celles qui n’en possèdent pas vont retenir le colorant (Gram+) (Perry,2004). La consistance et la valeur de la coloration de Gram correspond à des différencesbiochimiques entre la paroi des bactéries Gram positif et les bactéries Gram négatif (Marchalet Bourdon, 1982).Technique :- Préparer et fixer un frottis bactérien à la chaleur du bec Bunsen.- Recouvrir au violet de Gentiane pendant 1min. Eliminer l'excès par l'eau courante;- Ajouter du Lugol : deux bains de 45 secondes, jeter l'excès par l'eau courante;- Traiter à l'alcool 95° pendant 30 secondes, puis rinçage à l'eau;- Recolorer à la Fuschine pendant 1à 2 minutes, rinçage à l'eau puis séchage;L'observation se fait en ajoutant de l'huile à immersion .Les bactéries Gram positif se colorenten violet alors que les Gram négatif se colorent en rose.