3e Pharmacie 2011

Pr Abderraouf Oueslati

Janvier 2011

Fémur

Humérus

Péroné

Tibia

La moelle rouge chez l’adulte1. Extrêmités supérieures du fémur et de

l’humérus

2. Les cavités des os courts et des os plats Vertèbres, côtessacrum, sternum

clavicules , os iliaqueos du crâne

Le réseau vasculaire médullaire

Sinus central

Stroma médullaireFibroblastesAdipocytes

Cellules endothélialesOstéoblastesMacrophages

Homing

Diabase

Cellule souche totipotente

Cellule souche myéloïde pluripotente

CFU-GEMM

GBGR

Plaquettes

Cellule souche lymphoïdepluripotente

Lymphocytes T, B, NK

CFU-GEMM

Progéniteurs spécifiques

CFU-GM CFU-E0 CFU-B

CFU-G CFU-M

Cellule souche totipotente

La granulopoïèse

Progéniteur spécifique (CFU-G ou CFU-E0 ou CFU-B)

Myéloblaste

Promyélocyte

Myélocyte

Métamyélocyte

Granulocyte mür = PolynucléaireSang

PHASE MITOTIQUE

Granulopoïèse

PHASE POSTMITOTIQUE

Granulopoïèse

Index de maturation

Métamyélocyte

Myéloblaste + Promyélocyte + myélocyte

= 1

RÉGULATION POSITIVE

CFU-GM

IL-3GM-CSFG-CSF

CFU-G

IL-3GM-CSFG-CSF

Myéloblaste

G-CSF

PNN

CFU-B

IL-3IL-4

Myéloblaste

IL-4

PNB

CFU-E

IL-3GM-CSF

IL-5

Myéloblaste

IL-5

PNE

RÉGULATION NÉGATIVE

Les inhibiteurs de la granulopoïèse

Prostaglandines EInterférons

Isoferritines acidesLactotransferrine

TNFTGF-MIP-

ÉTUDE DE LA GRANULOPOÏÈSE

NFS

Étude des granulations

cytoplasmiques

..

CytochimieDosage du lysozyme

Immunologie

Culture des cellules

médullaires

PNN 40 à 75 %

PNE 0 à 5 %

PNB < 0,5 %

Lymphocytes 20 à 40 % Monocytes 2 à 10 %

Formule sanguine

PNN 1700 à 7000/mm3

PNE 0 à 500/mm3

PNB 0 à 50/mm3

4000 à 10 000/mm3

4 à 10.109/L

Nombre de globules blancs chez l’adulte

(> 15 ans)

Les granulations cytoplasmiquesde la lignée neutrophile

Granulationsprimaires

Granulations secondaires « spécifiques »

Granulations secondaires « spécifiques »

Rouges ou rouge violet

MPO +

Myéloblaste PromyélocyteMyélocyte : STOP

Métamyélocye PNN : 20-30 %

Beige rosé ou marron

Lactotransferrine +

Myélocyte

PNN(70-80 %)

Granulations primairesGranulations primaires

Myéloperoxydase (MPO)  

Mucopolysaccharides acides

LysozymeHydrolases acides

Protéases actives à pH neutre

(collagénase, élastase…)

Protéines cationiques Défensines...

Granulations spécifiquesGranulations spécifiques

Lactotransferrine  Transcobalamines I et III

LysozymeGélatinase

Collagénase spécifique ...

Le contenu des granulations

Les granulations cytoplasmiquesde la lignée éosinophile

* Apparaissent à partir du promyélocyte

* Bleues puis bleu-violet puis orangées

*Sphériques

*Contiennent de nombreuses enzymes communes aux granulations primaires

des neutrophiles

Les granulations cytoplasmiquesde la lignée basophile

* violacée foncée * Volumineuses

* Assez nombreuses* Dispersées dans tout le PNB

CYTOCHIMIE

Pyronine naphtol

H202

MPO

Rouge vifG.N +

Monocytes + inconstamment

naphtol AS-D acétate

Estérase

Grains bleus de tailles diverse

G.N+ M +

Si + fluorure de sodium

seules GN +

naphtol AS-D chloroacétate

Estérase

Agrégats brun-rouge

G.N +

Dosage du lysozymeDans le sérum ou les urines

LysosymeEnzyme

produite par les granuleux et les monocytes

Substrat du dosage

Suspension bactérienne « Micrococcus lysodeikticus »

Lecture du résultat

L'hydrolyse par le lysozyme se traduit par la clarification de

la suspension et donc par une diminution

de l'absorbance à 550 nm.

L’étalon

Lysozyme de blanc d'oeuf de poule

Immunologie

Cellule souche totipotente : CD34+ CFU-GEMM : CD 34 +, CD33+

CFU-GM : CD13+

CD34 et CD33 disparaîssent

avec l'avancée en maturation

Immuno-cytochimie à l’aide d’anticorps spécifiques

MPOLysozyme

Analyse d'une colonie (Microscopie)

*Taille *Composition cellulaire

*Temps nécessaire à l'obtention d'une colonie mature

5 % CO2

37°CÉtuve humide

Milieu semi-solide (1 % méthyl-cellulose)

+Milieu nutritif

(aa, vitamines)

+ 30 % sérum de veau foetal

+Cytokines recombinantes

.Interleukines .GM-CSF.G-CSF.M-CSF.EPO

.TPO …

Colonie

Suspensioncellulaire

5 à 21 jours

Culture des cellules médullaires

Les cellules matures ou en maturation

terminale meurent. Les progéniteurs

se divisent

LES FONCTIONS DU PNN

3.

Puissant système de défense contre les

agents pathogènes

Surtout les

bactériesChampignons

Parasitesvirus

Élimine les structures étrangères cellules altérées

molécules altérées

régulation du système immunitaire

MIGRATION DU PNN

Pool marginal

Pool marginal

Pool circulant

Tissus

DiapédèseSubstances

chimioattractantes

MO1011 PNN/ j

0 à 5 j

ADHÉRENCE ET PHAGOCYTOSE

Fc

Fab

IgG

Bactérie

Opsonines :IgGIgAC3

Phagosome

Phagolysosome

Bactérie

PNN phagocytant des bacilles

MÉCANISMES TUEURS DU PNN

Explosion oxydative« Bactéricidie dépendante

de l’O2»

Bactéricidie indépendante

de l’O2

L’EXPLOSION OXYDATIVE

FRO

NADPH oxydase2O2 + NADP 2O.

2 + NADP+ + H+

anion superoxyde

Superoxyde dismutaseO.

2 + O.2 + 2H+ H2O2 + 02

pH acide

H2O2/O.2 + Métal de transition Radical hydroxyle (.OH)

MPOH2O2 + Cl- acide Hypochloreux (HOCl) + H2O

H+ + OCl- + R-NH2 Chloramines (R-NHCl) + H20

BACTÉRICIDIE INDÉPENDANTE DE L’O2

Molécules et enzymes directement bactéricides

présentes dans les granulations du PNN

(surtout les granulations I )

Molécules et enzymes directement bactéricides

présentes dans les granulations

surtout I

Lysozyme CathepsineProtéines

cationiques « BPI »

Protéases actives à pH neutre

Défensines

Lactotransferrine

ACTIVITÉ DÉGRADATIVE

Activités :Protéasique

LipasiqueRNAsiqueDNAsique

Bactéries tuées Autres particules ou

cellules et molécules altérées

Diminution du pH (≈ 5)favorise l'action deshydrolases acides

LES FONCTIONS DES PN ÉOSINOPHILES

Amplification de la réponse inflammatoire

- Production de cytokines po-inflammatoires (IL-1, IL-6, TNF)

- Production de substances chimioattractantes amplifiant la réaction inflammatoire

(éotaxine, IL-16…)

Régulation de la réponse immunitaire

Production de cytokines immuno-modulatrices

Réaction d'hypersensibilité

Libération d’histamine et de prostaglandines

CytotoxicitéDéfense contre les larves de parasites

ADCC : IgG et IgE Protéines cationiques

Faible fonctions de phagocytose et de bactéricidie

Coopération cellulaire

LES FONCTIONS DU PN BASOPHILE

Allergène

IgE

Dégranulation du PNB

Libération d’histamine

RHS immédiate

LES LIGNÉES LYMPHOCYTAIRES

Thymus M.O

Lympocytes T

CFU-GEMM Cellule souche lymphoïde

Cellule souche totipotente

Lymphocytes

BLymphocytes

NK

MIGRATION DES LYMPHOCYTES

T,B

MALT :* Carrefour aéro-digestif * Amygdales linguales, pharyngées, palatines* végétations adénoïdes * Bronches* Plaques de peyer dans l'intestin.

Organes lymphoïdes périphériques

GanglionsRate

MALT MO

Organes lymphoïdes périphériques

GanglionsRate

MALT MO

Migration des Lymphocytes NK ?

Beaucoup d'inconnues persistent quant à

la localisation des cellules NK

dans l'organisme.

Certains organes comme le foie et l'utérus contiennent de

nombreuses cellules NK

Les ganglions périphériques

ne contienenent des Lymphocytes NK

qu’en cas de situation pathologique

Les récepteurs spécifiques de l’Ag

Lymphocytes B

Ig de sur surface« sIg »

LymphocytesT

« TCR » associé àL’Ag CD3

Reconnaissance107 à 109

Ag et épitopes antigéniques différents

LA LYMPHOPOÏÈSE « T » « Thymus »

ProthymocyteCD4+, CD8+

IL-1, IL-2, IL-7 GM-CSF

Stroma thymique(cellules épithéliales,

macrophages, cellules dentritiques)

Réarrangement des gènes TCR

Tymocyte immature

Thymocyte mature CD3+, CD4+ ou CD3+, CD8+

Sélection> 90 %

autoréactifséliminés

Lymphocyte T

LA LYMPHOPOÏÈSE « B »MO

Pro-lymphocyte B(Pas d’Ig)

Pré-lymphocyte B (Ig cytosolique)

Lymphocyte B(sIg)

Stroma médullaire, IL-4

IL-4, IL-5, IL-6

Réarrangement de gènesCodant pour les Ig

ACTIVATION DES LYMPHOCYTES T

Apparition de différents clones lymphocytaires

ayant 3 fonctions spécifiques différentes

Fonctions de mémoire

Fonction effectrice de l'immunité à

médiation cellulaire

Fonction de régulation de la réponse immunitaire

Th1 (CD4+)

Th2 (CD4+)

Lymphocytes T suppresseurs

(CD8+)

Th1 impliquées dans

I’Imm à médiation Cellulaire IL-2, IFN-, TNF

Th2impliquées dans l’imm

humorale IL-4, 5, 6, 10, 13

Fonction effectrice de l'immunité à

médiation cellulaire

Lym T cytotoxiques

Cytotoxicitérestreinte par le CMH

Cytotoxicité dépendante d’Ac (ADCC)

Lymphocyte B

Activation des lymphocytes B

Plasmocyte

Certains lymphocytes B gardent la mémoire de l'Ag.

Cette mémoire antigénique B est entretenue dans

la circulation par les complexes immuns

circulants

LES LYMPHOCYTES NK

Lymphocytesgranuleux

CD56+, CD16+, CD3-.

Composantes de l'immunité innée cellulaire

Capables de tuer des cellules tumorales

ou des cellules infectées par des virus

CMH classe I déficientes

NK reconnaît

un état de stress ou de transformation cellulaire

NK produisent des cytokines

*Acteurs de la coopération cellulaire

*Pont entre l'immunité innée et acquise

ÉTUDE DES LIGNÉES LYMPHOCYTAIRES

Nombre de lymphocytes chez l’adulte :

1500 à 4000/mm3

1,5 à 4.109/L

Frottis sanguin

Immunophénotypage et numération

en « cytométrie de flux » utilisant des AC monoclonaux

Ly T (CD3+) : 70 à 80 % 2/3 CD4+, 1/3 CD8+

Ly B (CD19+) : 5 à 15 %

Ly NK (CD16+; CD3-) : 5 à 20 %

LES MONOCYTES - MACROPHAGES

CFU-GM CFU-G

CFU-M M-CSF, IL-3, GM-CSF

Monoblaste

Promonocyte

Monocyte

Monocyte : Sang

MacrophageTissus

PNN

Ex : Cellules de Kupffer du foieOstéoclaste de l’os

Astrocytes du cerveau

M-CSF

G-CSF

Activités de synthèse et de sécrétion

Cytokines

Facteurs d’hémostase

Chimioattractants

Inhibiteurs de protéases

Composés du complément

Protéines de transport: transferrine

ferritine transcobalamine

ProstaglandinesMonoxyde d’azote

(NO) 

Enzymes lysosomiales 

Cytokines

Interleukines (IL1, IL6, IL-8, IL-10, IL-12) TNF INFα PDGF

Les fonctions des monocytes-macrophages

TGFFacteur de croissance

hématopoïétiques (G-CSF, GM-CSF, M-CSF)

Phagocytose et destrucion des micro-organismes

Subtancesendogènes

GR âgésGR et plaquettes

SensibilisésPar des Ac

PNN vieillisCorps nécrotiques

Corps apoptotiques

Lipides

Substancesexogènes

BactériesVirus

ParasitesChampignons

PoussièresDébrits

Rôle dans l’immunité adaptative

Présentation de l'antigène aux lymphocytes T

Détermination du type de réponse

T ou B

Fonctions immunitaires régulatrices

Cytotoxicité

Déclenchement de la réaction inflammatoire

Régulation de l'hématopoïèse

Rôle dans l’hémostase

Paramètres biologiques

Nombre de monocytes dans le sang

100 à 1000/mm3

0,1 à 1.109/L

* Myéloperoxydase + (inconstamment)

* Estérases + * Dosage du lysozyme * Phosphatase acide +

CD45 + CD33 +, CD13 +, CD14 +

CD68 + et CD61+

*Culture cellulaire La CFU-M

génère en 7 jours une petite colonie de

20 à 200 cellules strictement monocytaires

LE MYÉLOGRAMME

Trocarts

Ponction sternale

Ponction à l'épine iliaque postérosupérieure

Frottis médullaires

Lignée granuleuse 60 à 70 % Érythroblastes 15 à 30 %

Lymphocytes 5 à 20 % Plasmocytes 0 à 3 % Monocytes 0 à 2 %

MERCI DE

VOTRE ATTENTION