Technique Karyolite BoBs : bilan d’un an d’utilisation en routine pour le diagnostic prénatal direct

Capucine Hyon Service de Génétique et d’Embryologie Médicales

Pr. JP Siffroi

Mémoire pour l’obtention du Diplôme d’Étude Spécialisé Complémentaire

de Cytogénétique Humaine

Introduction

1970

1980

1990

2000

2010

1960

A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal

Introduction

1970

1980

1990

2000

2010

1960

A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal

Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales

Introduction

1970

1980

1990

2000

2010

1960

A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal

Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales

Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies

Introduction

1970

1980

1990

2000

2010

1960

A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal

Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales

Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies

Développement méthodes de diagnostic rapide des aneuploïdies : - qPCR - QMPSF - MLPA

Introduction

1970

1980

1990

2000

2010

1960

A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal

Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales

Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies

Développement méthodes de diagnostic rapide des aneuploïdies : - qPCR - QMPSF - MLPA

Diagnostic rapide aneuploïdies et syndromes microdélétionnels ou grands remaniements

Objectif

Évaluer l’apport du kit Karyolite BoBs en anténatal pour le diagnostic rapide des aneuploïdies et des remaniements chromosomiques de grande taille pendant un an au laboratoire de cytogénétique de l’hôpital Armand Trousseau.

Technique BoBs

BoBs : BACs on Beads

Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN

Technique BoBs

BoBs : BACs on Beads

Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN

BACs fixés sur billes de polystyrène

Technique BoBs

BoBs : BACs on Beads

Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN

BACs fixés sur billes de polystyrène

Coloration des billes avec 2 fluorochromes

=> Distinction de 100 billes différentes

Kit Karyolite

Étude des régions télomériques et péricentromériques des 23 pairs

1 bille = 1 région = 3 BACs ≠

=> 1 région = 1 à 15 Mb

Principe de la technique

P

TF

TM

Principe de la technique

P

TF

TM

Principe de la technique

P

TF

TM

Principe de la technique

P

TF

TM

Principe de la technique

P

TF

TM

Principe de la technique

Principe de la technique

Principe de la technique

Résultats

Type de prélèvement Prélèvements BoBs FISH directes BT directes

LA 737 531 180 0

BT 210 177 23 8

SF 39 0 0 0

Tissus 11 11 0 0

Total 997 719 203 8

Nombre de prélèvements

Résultats

Type de prélèvement Prélèvements BoBs FISH directes BT directes

LA 737 531 180 0

BT 210 177 23 8

SF 39 0 0 0

Tissus 11 11 0 0

Total 997 719 203 8

Nombre de prélèvements

Résultats

Indications FISH directe

Indication BoBs FISH

Demande de FISH spécifique associée : 4p, 5p, 22q

+

Grossesse gémellaire +

LA>25 SA

Arrivée Lundi - Mardi - Jeudi +

Arrivée Mercredi - Vendredi +

Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41

4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1

Convenance personnelle 1

Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32

Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2

BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1

Total 203

Indications FISH directe

Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41

4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1

Convenance personnelle 1

Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32

Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2

BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1

Total 203

Indications FISH directe

Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41

4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1

Convenance personnelle 1

Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32

Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2

BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1

Total 203

Indications FISH directe

Résultats Résultats BoBs

Normaux 639

Echec 6

Contamination maternelle 1

Aneuploïdies autosomiques 57

Anomalies des gonosomes 5

Anomalies des autosomes 5

Ségrégation 3:1 t(11;22) 1

Ségrégation 3:1 t(5;12) 1

Duplication 4qter 1

Délétion 22qter 1

Trisomie 18qter 1

Faux positifs 1

Duplication 22qter, XXY

Faux négatifs 4

XXX 1

Triploïdie XXX 2

Triploïdie XXY 1

Faux positif et faux négatif 1

Délétion 8p, Duplication 8q

Total 719

Dont trisomie 21, 18, 13 et 16

Dont monosomie X, Sd Klinefelter et Double Y

BoBs

Résultats Résultats BoBs

Normaux 639

Echec 6

Contamination maternelle 1

Aneuploïdies autosomiques 57

Anomalies des gonosomes 5

Anomalies des autosomes 5

Ségrégation 3:1 t(11;22) 1

Ségrégation 3:1 t(5;12) 1

Duplication 4qter 1

Délétion 22qter 1

Trisomie 18qter 1

Faux positifs 1

Duplication 22qter, XXY

Faux négatifs 4

XXX 1

Triploïdie XXX 2

Triploïdie XXY 1

Faux positif et faux négatif 1

Délétion 8p, Duplication 8q

Total 719

Dont trisomie 21, 18, 13 et 16

Dont monosomie X, Sd Klinefelter et Double Y

BoBs

Profils obtenus

Trisomie 21

Profils obtenus

Trisomie 13

Profils obtenus

Trisomie 18

Profils obtenus

Anomalies des gonosomes

Anomalies de structure

del(22)(qter)dn Indication : MSM T2 à 1/39

Anomalies de structure

del(22)(qter)dn Indication : MSM T2 à 1/39

Anomalies de structure

+der(22)t(11;22)mat Indication : dépistage combinée 1er T à 1/38

Anomalies de structure

+der(22)t(11;22)mat Indication : dépistage combinée 1er T à 1/38

Anomalies de structure

+der(12)t(5;12)mat Indication : profil particulier au 3ème T

Anomalies de structure

+der(12)t(5;12)mat Indication : profil particulier au 3ème T

Anomalies de structure

dup(18qter) Indication : SAE au 3ème T

Anomalies de structure

dup(18qter) Indication : SAE au 3ème T

Der(12)t(12;18)(p13.3;q12.2)

Anomalies de structures

dup(4qter) Indication : dépistage combinée 1er T à 1/70

Anomalies de structures

dup(4qter) Indication : dépistage combinée 1er T à 1/70

Faux positif

Faux positif

Faux positif

Faux négatifs

Trisomie X Triploïdie

Faux négatifs

Trisomie X Triploïdie

Faux positif + faux négatif

Faux positif + faux négatif

Discussion

Technique BoBs permet diagnostic rapide pour tous les prélèvements

Taux d’échec <1%

Détection de toutes les aneuploïdies (y compris T16)

Détection d’anomalies de structure

Principalement sur dépistage 1er ou 2ème T

Diagnostic d’une anomalie non visible au caryotype

Avantages

Discussion

Pas de technique en urgence

FISH directe si MAP

Difficultés d’interprétation de certains profils

Faux positifs alors que les critères de qualité sont acceptables

Nouvelles limites du laboratoire

Pas de détection des polyploïdies

Billes 22q proximale ne couvre pas la région DGS

Coût : x3 par rapport à la FISH directe

Limites

Remerciements

Service de Génétique et d’Embryologie Médicales

Sylvie Giaccuzo Sylvie Lucchini Patricia Diourne Catherine Jacquet Dr. Nicole Joyé Pr. Jean-Pierre Siffroi

Perkin Elmer

Jennifer Perez Alix Joseph

Cliniciens

Maternité de l’hôpital Trousseau Maternité de l’hôpital Tenon Maternité de la Pitié Salpêtrière Maternité des Bluets Maternité de Villeneuve Saint Georges Maternité du Centre Hospitalier Sud-Francilien