Sérogroupage des Salmonellapar Christiane Joffin

1

2

POURQUOI ?

Obtenir la formule antigénique qui

désigne le SÉROVAR, seul

moyen de préciser l’identification

d’une Salmonella

3

QUE RECHERCHE T’ON ?

Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches

mobilesAg Vi de la micro-capsule

1- Les antigènes des 1- Les antigènes des SalmonellaSalmonella

1- Les antigènes des 1- Les antigènes des SalmonellaSalmonella

4

5

6

Voir dicitonnaire p 299

2- Le principe du 2- Le principe du sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

2- Le principe du 2- Le principe du sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

7

8

COMMENT ?

Après l’identification biochimique du genre Salmonella, on réalise à partir d’une culture PURE sur milieu non sélectif (GO, MH, Kligler) : une identification des Ag O, H (et Vi) de la bactérie • en utilisant des Ac connus • par une technique d’agglutination directe sur lame.

Procédure du sérogroupage

Identifier :- d’abord les Ag O de paroi,- puis les Ag H de flagelle- et éventuellement l’Ag Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag

O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de l’Ag Vi.

Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation d’un réseau volumineux visible sous forme d’un agglutinat. 9

10

11

Agglutination des Salmonella par suite

réaction Ag O/ Ac anti O

Agglutination des Salmonella par suite

d’une réaction Ag H / Ac anti H

3- Les réactifs pour le 3- Les réactifs pour le sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

3- Les réactifs pour le 3- Les réactifs pour le sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

12

Voir dictionnair

e p 296

Origine des Ac :

Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum

13

COÛT :

• 30 € les 3 mL

• 10 € par mL

• 10 000 € par L !!!!!!!!!!!!!!!! Soit 0,300 Kg d’OR.

3-1- Les Ac anti Ag O• Des sérums O mélange

Sérums (contenant un grand nombre d’Ac différents) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG)

• Des sérums O monovalents

Sérums ne contenant qu’un seul type d’Ac : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24.

14

15

Sérum O mélange

Ag spécifiques des Ac du sérum

Groupes agglutinés

OMA 1,2,3,4,5,9,10,12,19,21,46

A,B,D,E,L

OMB 6,7,8,11,13,14,20,22,23,24

C,F,G,H

OMC 16,17,18,28,30,35,38 I,J,K,L,M,N,O,P

OMD 39,40,41,42,43,44,45 Q,R,S,T,U,V,W

OMF 47,48,50,51,52,53 X,Y,Z,51,52,53

OMG 60,61,62,63,65,66,67 60,61,62,63,65,66,67

Les Ac anti Ag O monovalents• Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si

agglutination avec le sérum OMA ?

• Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ?

16

Ac anti 0 1, 2 pour le groupe AAc anti 0 4, 5 pour le groupe BAc anti 0 9 pour le groupe DAc anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E

Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti 0 6 7 8

3-2- Les Ac anti Ag H

• Des sérums H mélange – Sérum contenant un mélange d’Ac anti

Ag H

• Des sérums H monovalents – Sérum ne contenant qu’un seul type

d’Ac

17

3-3- Les Ac anti Vi

• Il n’existe d’un Ag Vi(microcapsule de

– S. Typhi– S. PARATYPHI C– S. Dublin)

18

4- La technique du 4- La technique du sérogroupagesérogroupage

4- La technique du 4- La technique du sérogroupagesérogroupage

19

Voir p 296

4-1- Les étapes du sérogroupage

Premières étapes

1- S’assurer que la bactérie est bien une Salmonella

2- Vérifier que la souche n’est pas auto-agglutinable (réalisation d’un témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence d’eau physiologique)

20

Les étapes du sérogroupage (suite)

Étapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O

3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges d’Ac anti-O– OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1,

2, 3, 4, 5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46)– OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7,

8, 11, 13, 14, 20, 22, 23, 24)Remarque : si pas d’agglutination avec OMA et OMB, il faudra rechercher si la souche possède l’Ag Vi en utilisant des AC anti Vi

4- Préciser l’identification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe.

21

Les étapes du sérogroupage (suite)

Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H

.5- Identifier les Ag H parmi ceux possibles (en fonction du

résultat de l’identification de l’Ag O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter l’ordre des fréquences de groupe.

ATTENTION : nous ne disposons pas au laboratoire de tous les sérums nécessaires… Il faut donc faire au mieux !

22

23

1 2 3 4 5 6

Sérum OMA Anti O4, 5 Anti O 9 Anti H g, m Anti H l, v

7

Anti H 1, 5

4-2- Exemple de résultats d’un sérogroupage

Pas d’agglutination avec l’eau physiologique :

Agglutination avec OMA :

Agglutination avec Anti O9 :

Agglutination avec Anti H1 et H5

Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés

les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L

les Salmonella appartiennent au groupe D

les Salmonella sont Salmonella Panama

La bactérie n’appartient pas au groupe B