Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin 1.

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Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin 1

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Sérogroupage des Salmonellapar Christiane Joffin

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POURQUOI ?

Obtenir la formule antigénique qui

désigne le SÉROVAR, seul

moyen de préciser l’identification

d’une Salmonella

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QUE RECHERCHE T’ON ?

Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches

mobilesAg Vi de la micro-capsule

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1- Les antigènes des 1- Les antigènes des SalmonellaSalmonella

1- Les antigènes des 1- Les antigènes des SalmonellaSalmonella

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Voir dicitonnaire p 299

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2- Le principe du 2- Le principe du sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

2- Le principe du 2- Le principe du sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

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COMMENT ?

Après l’identification biochimique du genre Salmonella, on réalise à partir d’une culture PURE sur milieu non sélectif (GO, MH, Kligler) : une identification des Ag O, H (et Vi) de la bactérie • en utilisant des Ac connus • par une technique d’agglutination directe sur lame.

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Procédure du sérogroupage

Identifier :- d’abord les Ag O de paroi,- puis les Ag H de flagelle- et éventuellement l’Ag Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag

O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de l’Ag Vi.

Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation d’un réseau volumineux visible sous forme d’un agglutinat. 9

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Agglutination des Salmonella par suite

réaction Ag O/ Ac anti O

Agglutination des Salmonella par suite

d’une réaction Ag H / Ac anti H

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3- Les réactifs pour le 3- Les réactifs pour le sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

3- Les réactifs pour le 3- Les réactifs pour le sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

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Voir dictionnair

e p 296

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Origine des Ac :

Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum

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COÛT :

• 30 € les 3 mL

• 10 € par mL

• 10 000 € par L !!!!!!!!!!!!!!!! Soit 0,300 Kg d’OR.

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3-1- Les Ac anti Ag O• Des sérums O mélange

Sérums (contenant un grand nombre d’Ac différents) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG)

• Des sérums O monovalents

Sérums ne contenant qu’un seul type d’Ac : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24.

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Sérum O mélange

Ag spécifiques des Ac du sérum

Groupes agglutinés

OMA 1,2,3,4,5,9,10,12,19,21,46

A,B,D,E,L

OMB 6,7,8,11,13,14,20,22,23,24

C,F,G,H

OMC 16,17,18,28,30,35,38 I,J,K,L,M,N,O,P

OMD 39,40,41,42,43,44,45 Q,R,S,T,U,V,W

OMF 47,48,50,51,52,53 X,Y,Z,51,52,53

OMG 60,61,62,63,65,66,67 60,61,62,63,65,66,67

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Les Ac anti Ag O monovalents• Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si

agglutination avec le sérum OMA ?

• Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ?

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Ac anti 0 1, 2 pour le groupe AAc anti 0 4, 5 pour le groupe BAc anti 0 9 pour le groupe DAc anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E

Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti 0 6 7 8

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3-2- Les Ac anti Ag H

• Des sérums H mélange – Sérum contenant un mélange d’Ac anti

Ag H

• Des sérums H monovalents – Sérum ne contenant qu’un seul type

d’Ac

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3-3- Les Ac anti Vi

• Il n’existe d’un Ag Vi(microcapsule de

– S. Typhi– S. PARATYPHI C– S. Dublin)

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4- La technique du 4- La technique du sérogroupagesérogroupage

4- La technique du 4- La technique du sérogroupagesérogroupage

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Voir p 296

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4-1- Les étapes du sérogroupage

Premières étapes

1- S’assurer que la bactérie est bien une Salmonella

2- Vérifier que la souche n’est pas auto-agglutinable (réalisation d’un témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence d’eau physiologique)

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Les étapes du sérogroupage (suite)

Étapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O

3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges d’Ac anti-O– OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1,

2, 3, 4, 5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46)– OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7,

8, 11, 13, 14, 20, 22, 23, 24)Remarque : si pas d’agglutination avec OMA et OMB, il faudra rechercher si la souche possède l’Ag Vi en utilisant des AC anti Vi

4- Préciser l’identification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe.

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Les étapes du sérogroupage (suite)

Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H

.5- Identifier les Ag H parmi ceux possibles (en fonction du

résultat de l’identification de l’Ag O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter l’ordre des fréquences de groupe.

ATTENTION : nous ne disposons pas au laboratoire de tous les sérums nécessaires… Il faut donc faire au mieux !

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1 2 3 4 5 6

Sérum OMA Anti O4, 5 Anti O 9 Anti H g, m Anti H l, v

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Anti H 1, 5

4-2- Exemple de résultats d’un sérogroupage

Pas d’agglutination avec l’eau physiologique :

Agglutination avec OMA :

Agglutination avec Anti O9 :

Agglutination avec Anti H1 et H5

Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés

les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L

les Salmonella appartiennent au groupe D

les Salmonella sont Salmonella Panama

La bactérie n’appartient pas au groupe B