UNIVERSITE KASDI MERBAH OUARGLA...Co-promoteur: Mr. DADA MOUSSA K. Biochimiste. Hôpital Mohamed...
Transcript of UNIVERSITE KASDI MERBAH OUARGLA...Co-promoteur: Mr. DADA MOUSSA K. Biochimiste. Hôpital Mohamed...
REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE
LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE KASDI MERBAH OUARGLA
FACULTE DES SCIENCES ET DES SCIENCES DE L’INGENIEUR DEPARTEMENT DE BIOLOGIE
MEMOIRE DE FIN D’ETUDE
En vue de l'obtention du Diplôme d'étude supérieure en biologie Option Biochimie THEME
Présenté par
KECHIDA Hadjer
MECHARA Nadjiba Devant le jury : Président : Mme. SIBOUKEUR. O. M. A. C. C. Université. Ouargla Promoteur : Mr. OUELD ELHADJ .M.D M.C. Université. Ouargla Co-promoteur: Mr. DADA MOUSSA K. Biochimiste. Hôpital Mohamed Boudiaf. Examinateur : Melle. MIMOUNI YAMINA Ass. . Université. Ouargla
Année Universitaire 2005/2006
Contribution à l’étude de la relation entre les transaminases et l’hépatite
dans la cuvette de Ouargla (cas de l’hépatite B)
Je dédie ce modeste travail a mes parents
Souad et Belgacem Les deux personnes, les plus chers au monde que
je ne remercie jamais assez leurs aides, encouragement Soutien, sacrifies et leurs patience pendant mes années
d’études. Que dieu leurs accorde une longue vie
A ma très chère sœur Sara mes très chères frères
Issam et Hakim A toute ma grande famille
KECHIDA Et surtout a ma très chère Khaltou Ouidad et son mari e ainsi que ses fils et ses belles filles Redah ; Ryad ; Yacin et Imem sans oublier Mey ;
Khaoula et Souhila ُُEt a tous mes amis
Zohar, Dadi, Sabrina, Eva, Khadîdja, Linda,Fatima Jiji, Sidou, Fawaz, Brahim, Aidou
Aux étudiants de la 4ème promotion Spécialité biochimie
Je dédie ce modeste travail
Mes parents
SADOK RACHIDA
Les deux personnes, les plus chers on monde que je ne remercier jamais assez leurs aides, encouragement,
Soutien, sacrifies et leurs patience pendant mes années d’études. Que dieu leurs accorde une longue vie.
A mes très chères sœurs FATIMA ,MALIKA,BASMA,SOUMIA,SAFA.
A mes très chères frères HADJ ALI, SAïD, NOUR EDINE
A toute ma grande famille
" MECHARA "
A tous mes amis HADJER – ZOHRA et DADI-
Fatiha, Nadia, Djahida, Fatima, Fouzia, Amel, Kawthar, Djamila, Fadila, Fatima, Abla, Nadir, Ammar, Brahim,
Walid, Sihem, Hayet, Beya, Badra, Radjah, Karim, Razika, Wassila…..
Aux étudiants de la 5 ème Promotion de biochimie
Résumé
Une hépatite correspond à une inflammation du parenchyme hépatique survenant en
réponse à une agression et pouvant conduire à une nécrose hépatocytaire. Le terme d'hépatite
virale est réservé aux hépatites provoquées par des virus à hépatotropisme dominant.
L’atteinte hépatique est la conséquence de la maladie elle-même et du traitement qu’elle
nécessite; elle peut être modérée et transitoire, ou sévère voire fatale. Les transaminases sont
des enzymes présentes dans le foie, mais également dans le muscle (notamment le myocarde)
et le rein. Elles sont libérées dans le flux sanguin en cas de lyse cellulaire, le dosage de leur
concentration sérique est l’un des examens pratiqués pour l’exploration des lésions de
l’hépatocyte. L’intérêt de doser ces enzymes, pour diagnostiquer une atteinte hépatique et de
suivre son évolution peut aider à limiter les différentes formes d’hépatites dans la localité de
Ouargla. Cette présente étude met en relief l’importance effective de doser les transaminases
sériques qui renseigne le clinicien sur l’état du foie, sur l’évolution de la pathologie et
l’oriente dans la recherche étiologique pour le praticien de l’hôpital MOHAMED BOUDIAF.
Summary
Hepatitis corresponds to an ignition of the hepatic parenchyma occurring in response to
an aggression and being able to lead to one hépatocytaire necroses. The term of viral hepatitis
is reserved for hepatitises caused by viruses with hepatotropism dominating. The hepatic
attack is the consequence of the disease itself and the treatment which it requires; it can be
moderated and transitory, or severe even fatal. Transaminases are enzymes present in the
liver, but also in the muscle (in particular the myocardium) and the kidney. They are released
in blood flow in the event of cellular lysis, the proportioning of their serum concentration is
one of the examinations practised for the exploration of the lesions of the hépatocyte. The
interest to proportion these enzymes, to diagnose a hepatic attack and to follow its evolution
can help to limit the various forms of hepatitises in the locality of Ouargla. This present study
highlights the effective importance to proportion serum transaminases which informs the
clinician about the state of the liver, about the evolution of pathology and directs it in
etiologic research for the expert of Hospital MOHAMED BOUDIAF.
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SOMMAIRE
Introduction ……………………………………………………….............. 1
Chapitre I- Hépatites virales
1.1. - Historique de l’hépatite.............................................................................................. 3
1.2. - Particularités cliniques et épidiomiologiques (exemple de l’hépatites B)…............. 6
1.2.1.- Pathogénie HBV............................................................................................... 7
1.2.1.1.- Virus et structure virale.......................................................................... 7
1.2.1.2.- Type de virus........................................................................................... 8
1.2.3. –Signe clinique …………………………………………………………......... 9
1.2.4. - Culture et pouvoir………………………………………………………… 10
1.3.- Constitution d’antigène……………………………………………………………. 10
1.4.- Cycle de multiplication ……………………………………………………………. 10
1.5.- Marqueurs …………………………………………………………………………. 11
1.5.1.- Hépatite aiguë …………...………………………………………………… 11
1.5.2.- Porteurs sains ................................................................................................ 11
1.5.3.- Hépatite fulminante ...................................................................................... 12
1.5.4 Hépatite chronique ......................................................................................... 12
1.5.6. - Convalescents, guéris ou vaccinés ........................................................................ 12
1.5.7. – Marqueurs de la réplication virale......................................................................... 12
1.6.- Diagnostic ................................................................................................................. 13
1.6.1. - Hépatite aiguë.............................................................................................. 13
1.6.2. - Hépatite chronique...................................................................................... 13
1.7. – Traitement................................................................................................................ 13
1.7.1– Prévention..................................................................................................... 14
1.7.2. – Vaccination................................................................................................. 14
Chapitre II- Transaminases
2.1. - Classification des enzymes..................................................................................... 17
2.2. –Transamination........................................................................................................ 17
2.2.1. –Découverte..................................................................................................... 17
2.2.2. – Définition...................................................................................................... 18
2.3.- Mécanisme d'action de transaminase....................................................................... 19
2.4. - Intérés semiologique des transaminases (BENHAMON, 1981)............................. 23
2.4.1. - Atteints hépatiques....................................................................................... 23
2.4.2. -Obstructions biliaires..................................................................................... 24
2.5. - Différent cas d'apparition de la transaminase dans le sang..................................... 24
2.6.- Méthode de dosage des transaminases..................................................................... 26
2.6.1.- Mesure de l’activité des enzymes................................................................. 26
2.6.1.1.- Détermination directe .............................................................................. 26
2.6.1.2.- Cas des réactions couplées...................................................................... 27
2.6.2. Technique....................................................................................................... 27
2.6.2.1.- Méthodes de mesure de la vitesse moyenne dite méthode "2 points".... 27
2.6.2.2.- Méthodes de mesure de la vitesse instantanée dite méthode cinétique. 27
2.6.3.- Standardisation des méthodes, les méthodes optimisées................................ 28
2.6.4.- Quelques schémas des méthodes recommandées de détermination de
l’activité transaminasique (AGNERAY et al., 1990�……………………..... 28
Chapitre III – Matériels et méthodes
3.1.- Présentation de la zone d'étude ............................................................................... 31
3.2.- Choix du site et enquête........................................................................................... 31
3.3.- Matériels.................................................................................................................. 31
3.3.1.- Matériel biologique........................................................................................ 31
3.3.2.- Appareillage ................................................................................................. 32
3.2.3.- Réactifs .......................................................................................................... 32
3.4.- Mode opératoire........................................................................................................ 33
3.4.1.-Prélèvement..................................................................................................... 33
3.4.2.- Enregistrement................................................................................................ 33
3.4.3.- Centrifugation................................................................................................. 33
3.4.4.- Dosage ........................................................................................................... 33
Chapitre IV- Résultats et discussion
4.1.- Résultats..................................................................................................................... 39
4.2.- Discussion.................................................................................................................. 45
Conclusion.......................................................................................................................... 48
Références bibliographiques............................................................................................ 50
Annexes.............................................................................................................................. 53
LISTE DES ABREVIATIONS
Abbreviations Signification Abs/min Absorbance/minute. ALAT alanine aminotransférase. ASAT aspartate aminotransférase. C.K créatinine kinase. C.V.O crise vaso-occlusive. D.G.K.C société Allemande de biologie clinique. E-PLP enzyme-pyridoxal-5’-phosphate. E-PMP enzyme-pyridoxamine-5’-phosphate.
G.G.T gamma glutamate aminotransférase. G.L.D glutamate déshydrogénase. HBV virus de l’hépatite B. HCV virus de l’hépatite C. I.F.C.C federation internationale de chimie clinique. kat Unité internationnale LDH lactate déshydrogénase. PAL phosphatase alcaline. S.F.B.C société française de biochimie clinique. TGO transaminase glutamo-oxaloacitique. TGP transaminase glutamo-pyruvique. Tris Tampon Tris. Ul/l Unité internationnale/litre VN : valeur normale
GLOSSAIRE
Anoxie Insuffisance d’apport en oxygène aux organes et aux tissus vivants. Antalgique Un médicament qui calme la douleur. Anti-inflammatoire Médicament utilisé dans le traitement local de l’inflammation. Bile épaisse La densité bile (liquide jaune sécrété par les cellules du foie. Carcinome Tumeur épithéliale maligne. Embolie Obstruction provoque l’arrêt de l’irrigation sanguine. Glomérulonéphrite Toute maladie rénale caractérisé par une atteinte des glomérules
(unité de filtration du rein) Hépatotropisme Est l’affinité que présentent certaines substances et virus pour le foie. Prodromique Il y a des signes annonciateurs d’une maladie. Vaso-occlussive Les vaisseaux sanguines sont bouchés.
LISTE DES TABLEAUX
N° Titer de Tableaux page 1 Découvertes des différentes hépatites virales et mesures prises pour lutter contre (MEILI, 2005) 3 2 Formes d’hépatites et leur évolution (MEILI, 2005) 4 3 Classification internationale des enzymes (HAMES et al., 2000) 17 4 Répartition des patients selon le taux de GOT 39 5 Répartition des patients selon leur taux de GPT 39 6 répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT 57 7 Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT 57 8 Répartition des patients ayant les valeurs pathologiques de GOT selon l’age 57 9 Répartition des patients ayant les valeurs pathologiques de GPT selon l’age 57 10 Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon le sexe 41 11 Répartition des patients selon les résultats de la recherche étiologique 44
LISTE DES FIGURES
N° Titre de figure Page
1 Phosphate de pyridoxal (BISERT, 1977). 19
2 Deux formes du phosphate de pyridol (PELMONT, 1993) 20
3 - Mécanisme de transamination (BISERT, 1977). 21
4 Mécanisme d'action proposé pour les réactions de transamination (STRYER 1993).
21
5 Schéma d'une demi-réaction de transamination (Action de l'aspartate aminotransférase) (PELMONT, 1993).
22
6 La réaction globale d'une transamination (HAMES et al 2000). 23
7 Evolution des taux sériques de GOT et GPT au cours de l'hépatite aigue (BENHAMON, 1981).
24
8 Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT. 40
9 Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT. 41
10 Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GOT selon l’age. 42
11 Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon l’âge. 43
12 Répartition des malades d’hépatite B selon l’age et les zones. 44
13 Répartition des malades d’hépatite B selon le sexe et les zones. 45
LISTE DES ANNEXE
Annexe : 1 Répartition de l’hépatite B dans le monde Annexe : 2 Virus de l’hépatite B
Annexe : 3 La structure du virus de l’hépatite B
Annexe : 4 Recueil des résultats
INTRODUCTION
1
L’homme vit dans des environnements complexes et il est exposé à un ensemble de
maladies dangereuses et mortelles menaçant sa vie. L'hépatite est une maladie inflammatoire
du foie, provoquée par des infections bactériennes ou virales, l'abus d'alcool ou diverses
toxines. C'est une maladie caractérisée par la jaunisse, des douleurs abdominales et l'anorexie.
Le foie qui est l’un de ces organes affecté, est le siège de différentes complications aigues et
chroniques due à l’hépatite elle-même ou en rapport avec le traitement.
La surveillance biologique par une exploration fonctionnelle hépatique est
indispensable. Le dosage des transaminases sériques, doit être systématique pour le diagnostic
et le suivi de ces atteintes hépatiques malgré que ces enzymes ne soient pas spécifiques du
foie et quelles peuvent être augmentées dans d’autres situations pathologiques.
Face à ce constat le présent travail est une évaluation, mais aussi une précision sur
l’intérêt du dosage des transaminases dans l’exploration des atteintes hépatiques chez un
groupe de patients au service d’hématologie de l’hôpital MOHAMED BOUDIAF de Ouargla.
L’objectif recherché est de comparer les résultats obtenus à d’autres examens
biologiques biochimiques et sérologiques. Ceci permet en vu de confirmer, et aussi de
considérer que ce dosage simple et répétitif peut dépister et surveiller l’évolution d’une
atteinte hépatique dans la maladie l’hépatite B.
Dans le premier chapitre, les Hépatites virales sont présentées. Le second chapitre
porte sur les transaminases. La méthodologie de travail est consignée dans le troisième
chapitre. Elle est consacrée d’une part aux méthodes utilisées pour la collecte des
informations sur le terrain et au laboratoire et d’autre part aux techniques de traitement des
données. Les résultats obtenus et la discussion sont placés à part dans le quatrième chapitre.
Une conclusion générale qui est un ensemble de réflexions et de suggestions termine cette
étude.
ChapitreI: Hépatites Virales
3
1.1. - Historique de l’hépatite
Une hépatite est une inflammation du foie qui peut avoir de multiples causes. On parle
d'hépatite virale lorsque cette inflammation est liée à l'infection par un virus. Il existe
différents types d'hépatites virales, chacun lié à un virus différent, dont l’hépatite A, l’hépatite
B, l’hépatite C, l’hépatite D, l’hépatite E et l’hépatite G. Mais il existe d’autres virus
d’hépatites à savoir:
- Les virus à tropisme extra hépatique pouvant être responsable d’une hépatite. Ce sont les
virus de la mononucléose infectieuse qui sont très fréquents.
- Le cytomégalovirus est assez fréquent aussi, mais habituellement peu ou pas ictérique.
- Notons aussi les virus d’hep et de la fièvre jaune (exceptionnels) (Tab. 1).
Les hépatites virales constituent par leur fréquence que par leur gravité potentielle un
véritable problème de la santé publique; et leur fréquence varie en fonction du virus et du
niveau d’hygiène publique. Dans les pays en voie de développement 10% des adultes sont
séropositifs au virus A, 15 à 30 % de séropositifs au virus B (GEUBEL, 1998).
Tableau 1 - Découvertes des différentes hépatites virales et mesures prises pour lutter contre
(MEILI, 2005)
1945 Fait établi selon lequel les transfusions sanguines et plasmatiques peuvent transmettre une hépatite.
1965 Découverte du virus de l’hépatite A • 1992 Vaccin contre l’hépatite A
1975 Découverte de l’hépatite B • 1975: Test de l’hépatite B sur les donneurs de sang • 1981: Vaccin contre l’hépatite B
1982 Les premières préparations coagulantes désactivées viralement sont disponibles en Suisse
1986 Définition de la transaminase (ALAT) dans le plasma des donneurs 1986 (Août) Passage en Suisse à une utilisation exclusive de préparations coagulantes
désactivées viralement 1989 Découverte du virus de l’hépatite C
• 1990 Test de l’hépatite C sur les dons de sangs
* Hépatite A: Anciennement appelée hépatite "infectieuse", elle est transmise lors de la
consommation d'aliments ou d'eau de boisson contaminés par des matières fécales: aliments
souillés, fruits de mer crus, ... Elle est beaucoup plus fréquente dans les pays en voie de
développement et le risque de la contracter est particulièrement élevé pour les voyageurs.
ChapitreI: Hépatites Virales
4
Pour les Belges, ce risque est en augmentation puisque le nombre de personnes qui ont été en
contact avec le virus (on parle de sujets "immunisés") diminue avec l'amélioration des
conditions d'hygiène (Tab. 2).
La maladie s'accompagne souvent d'une "jaunisse" (on parle "d'ictère"). Elle est
généralement bénigne chez l'enfant. Sa gravité est plus grande chez l'adulte et la personne
âgée. L'hépatite A guérit habituellement en quelques semaines ou quelques mois. Elle
n'évolue jamais en hépatite chronique (GEUBEL, 1998).
Tableau 2 - Formes d’hépatites et leur évolution (MEILI, 2005)
Hépatite
Mise en
évidence
du virus
Vaccination Evolution Remarques spécifiques
Hép
atite
A
1965 Depuis 1992
Formation d’anticorps
avec élimination du
virus; pas d’évolution
chronique.
Il ne s’agit pas d’une hépatite
de transfusion typique.
Contamination habituelle: eau
et denrées alimentaires
polluées de germes, évolution
difficile chez des patients
atteints d’hépatite C
chronique; vaccination donc
recommandée.
Hép
atite
B
1975 Depuis 1981
Production
d’anticorps/souvent une
élimination du virus.
Evolution chronique
chez <5% (porteurs)
> 80 % des hémophiles
adultes avec substitution avant
1981 (vaccination) ont produit
une hépatite B.
Hép
atite
C
1989
Aucune
Production d’anticorps,
souvent sans élimination
virale hépatite C
chronique, porteur de
virus.
Avant 1989, nommée hépatite
NonA-NonB
* Hépatite B: Anciennement appelée "hépatite sérique", c'est la forme d'hépatite la plus
ChapitreI: Hépatites Virales
5
répandue dans le monde. Le virus de l'hépatite B est en effet beaucoup plus répandu que celui
du Sida. L'infection par voie "parentérale" (transfusions, piqûres, tatouages,...) et sexuelle.
Elle est plus sévère que l'hépatite A. Elle se transforme en hépatite chronique chez un petit
nombre de patients infectés (environ 5%). En l'absence de traitement efficace, l'évolution
prolongée de la maladie entraîne un risque de "cirrhose" (cicatrices et dysfonctionnement du
foie) et, à long terme, un risque accru de tumeur du foie.
L'antigène " Australia " a été découvert en 1964 par Blumberg et la relation directe
entre sa présence dans le sérum et celle de l'agent responsable de l'hépatite B fut admise 3 ans
plus tard. L'antigène " Australia " est maintenant appelé antigène HBs et le virus est dénommé
VHB. Il est apparenté au HIV et aux rétrovirus car il possède une transcriptase (GEUBEL,
1998).
* Hépatite C: Le virus de l'hépatite C est responsable de la majorité des hépatites que l'on
appelait "non-A, non-B" avant la découverte du virus responsable, en 1989. Tout comme le
virus de l'hépatite B, il se transmet surtout par voie "parentérale" (transfusions, piqûres
d'aiguille,...). On admet actuellement qu'un tiers des cas d'hépatite C observés sont d'origine
transfusionnelle, un second tiers restant à une transmission d'origine mal connue (on dit
"nosocomiale "). Le risque lié aux transfusions de sang a été considérablement réduit à partir
de janvier 1990, date depuis laquelle existe d'examens sanguins spécifiques réalisés
systématiquement chez les donneurs de sang. Chez beaucoup de personnes, la contamination
est donc survenue avant que l'on dispose de ces tests.
L'hépatite C évolue très fréquemment en hépatite chronique (environ 70% des cas).
Cette hépatite chronique est de gravité et d'évolution très variables. Les formes "actives"
entraînent à long terme (15-20 ans), un risque de cirrhose et un risque accru de tumeur du foie
(GEUBEL, 1998).
* Hépatite D: L'hépatite D est une hépatite rare dans les pays développés. Elle atteint le plus
souvent des personnes qui ont fait usage de drogues intraveineuses et sont aussi porteuses du
virus de l'hépatite B.
* Hépatite E: Aussi appelée hépatite non-A, non-B "épidémique" ou "entérique", elle se
transmet comme l'hépatite A et évolue généralement de la même manière. Le virus est
commun dans les régions de l'Océan Indien, de l'Afrique et les pays en voie de
ChapitreI: Hépatites Virales
6
développement.
* Hépatite G: Le virus de l'hépatite G a été récemment identifié. Il reste très mal connu, de
même que l'hépatite qu'il peut occasionner.
1.2. - Particularités cliniques et épidiomiologiques (Exemple de l’hépatites B)
Les hépatites B sont moins fréquentes que les hépatites A, mais elles sont plus sévères.
Elles évoluent souvent vers la chronicité (une fois sur dix chez les sujets immunocompétents,
plus encore chez les sujets âgés et presque constamment chez les nouveau-nés, les
immunodéprimés et les homosexuels même séronégatifs pour le VIH). La forme gravissime
(hépatite fulminante) survient une fois sur mille cas et une fois sur vingt environ une cirrhose
ou un cancer du foie apparaissent plusieurs années après une hépatite B. La maladie est
endémique et mondiale, sans prédominance saisonnière. La prévalence varie selon les régions
du globe:
- L'Europe de l'ouest, l'Amérique du Nord et l'Australie sont des zones de faible endémicité;
- L'Amérique latine, l'Amérique centrale, l'Europe de l'Est, l'Inde, le Moyen-Orient, l'Asie
centrale, les pays méditerranéens et l'Afrique du Nord sont des zones de moyenne endémicité;
- La Chine, le Japon, l'Asie du Sud-Est et l'Afrique tropicale sont des zones de forte
endémicité.
Les principaux modes de transmission sont les suivants :
- Transmission parentérale par le sang et ses dérivés au cours de transfusions, traitements par
des produits sanguins (chez les hémophiles ou les hémodialysés), à la suite d'injections avec
des seringues ou des aiguilles souillées (toxicomanes) ou après contaminations accidentelles
ou professionnelles (personnels soignants ou de laboratoire).
- Transmission sexuelle par le sperme ou les sécrétions vaginales: l'hépatite B est la "MST"
(maladie sexuellement transmissible" la plus fréquente, 50 fois plus fréquente que l'infection
par le VIH).
- Transmission entre mère et enfant au moment de l'accouchement ou en période néonatale (le
passage transplacentaire du virus est exceptionnel).
- Transmission directe (par contact, par le baiser..) n'est pas exclue.
Toute la population est soumise au risque de contamination mais certaines catégories
ChapitreI: Hépatites Virales
7
de personnes sont plus exposées:
- Polytransfusés, hémophiles, hémodialysés (le risque est maintenant réduit depuis l'éviction
par les centres de transfusion des donneurs HBs positifs).
- Personnels des banques de sang, des laboratoires, les soignants qui doivent prendre de
grandes précautions et être vaccinés.
- Homosexuels et prostituées et surtout toxicomanes chez qui les mesures préventives
d'hygiène sont peu appliquées (LEURT, 1998).
1.2.1. – Pathogénie HBV
La maladie est due à la réaction immunitaire du sujet plus qu'à l'action du virus lui-
même. La pénétration virale provoque, dans un premier temps, une réaction immunitaire avec
formation de complexes immuns responsables de la phase prodromique. La fixation hépatique
du virus est suivie de sa multiplication. Les hépatocytes infectés, se comportant comme des
néo-antigènes suscitent une réaction immunitaire à médiation cellulaire et humorale et les
anticorps et lymphocytes T cytotoxiques ainsi formés sont la cause de la lyse des cellules
hépatiques (GEUBEL, 1998).
1.2.1.1. – Virus et structure virale
Le virus VHB appartient à la famille des Hepadnavirus qui comprend en outre des
virus animaux provoquant une maladie analogue chez leur hôte respectif. Bayer, Dane
trouvaient à l'examen au microscope électronique des sérums infectés:
- Des particules sphériques très nombreuses de 22 nanomètres,
- Des tubules de même diamètre mais allongés mesurant jusqu'à 230 nm,
- Des particules sphériques plus rares mais plus grandes (42 nm) qui représentent le virus lui-
même. Elles comportent une partie centrale ou "côre" de 27 nm correspondant à la
nucléocapside et une partie périphérique correspondant à l'enveloppe. Ces particules,
dénommées particules de Dane, sont infectieuses.
Le VHB est constitué d'un ADN contenu dans une nucléocapside de 27 nm entourée
d'une enveloppe. Les particules de 22 nm sont des enveloppes vides. Le génome est court et
fait de 3200 nucléotides. C'est un ADN circulaire bicaténaire sur deux tiers de sa longueur
seulement. Il possède donc un brin long L (-) et un brin court S (+). L'enveloppe porte
l'antigène de surface AgHBs. La nucléocapside contient l'antigène du côre appelé AgHBc
associé à un autre antigène dénommé AgHBe. On a également mis en évidence dans la
ChapitreI: Hépatites Virales
8
nucléocapside une activité enzymatique ADN polymérase et une thymidine kinase. Sur
l'enveloppe est également localisé un récepteur pour la sérumalbumine humaine qui intervient
dans la phase de pénétration des virus dans l'hépatocyte. Malgré son enveloppe, le virus
résiste assez bien à l'éther, à la dessiccation et à la chaleur. Les sérums contagieux restent
infectieux de longues années à -20°C, plusieurs mois à +30 °C et plusieurs heures à +60 °C.
Le virus est détruit par ébullition et par l'action de l'hypochlorite de sodium (GEUBEL, 1998).
1.2.1.2. – Type de virus
- HBV (virus de l'hépatite B)
- Famille des hepadnavirus
- Virus à ADN
- Avec enveloppe
La protéine d'enveloppe porte l'appellation AgHBs. La protéine de capside est appelée
AgHbc: sa forme soluble (celle circulant dans le sang) est AgHbe. Certains virus dits
"mutants de côre" ne synthétisent plus AgHbe. Le virus est détectable dans le sang entre 10 et
20 jours après la contamination. Cette phase virémique ne dure que 2 à 3 mois chez 90% des
sujets infectés, mais persiste chez les porteurs chroniques. Pendant la phase de virémie, le
virus est présent dans les larmes, la sueur, la salive, le sperme et les sécrétions vaginales.
La durée d'incubation va de 50 à 100 jours. 10% des sujets contaminés deviennent porteurs
chroniques (15% chez les hommes, 5% chez les femmes). Les nouveaux-nés de mère infectée
tolèrent le virus B et vont développer une infection chronique B dans 80% des cas. Les
immunodéprimés (patients soumis à une chimiothérapie anticancéreuse, hémodialysés,
malades du SIDA,...) infectés par HBV le gardent dans 40 % des cas (LEURT, 1998).
1.2.2. - Mode de contamination
La transmission du virus peut avoir lieu de différentes voies:
- Voie parenterale,
- Transfusions de sang ou de ses dérivés (ce mode de contamination est devenu plus rare
depuis le dépistage systématique du virus B chez les donneurs de sang).
- Inoculation accidentelle (acupuncture, tatouage, piqûre par du matériel souillé, comme chez
les toxicomanes utilisant des drogues illicites par voie intraveineuse ou chez les
ChapitreI: Hépatites Virales
9
professionnels de la santé).
- Accouchement: passage du virus de la mère infectée à l'enfant,
- Contact interindividuel,
- Contamination par les sécrétions; contact hétéro- ou homo- sexuel, contact familial.
1.2.3. – Signe clinique
a/- Phase aiguë
Pas de symptômes dans 90% des cas. Si des symptômes apparaissent, ils sont peu
spécifiques: asthénie, anoréxie, température, puis ictère. Les transaminases sont élevées (1000
à 4000 µI). Une glomérulonéphrite, une arthrite peuvent survenir, liées à des dépôts de
complexes immuns. Une fois sur cent, l'hépatite aiguë B peut prendre une forme fulminante et
conduire presque invariablement au décès en l'absence de transplantation hépatique (LEURT,
1998).
b/- Phase chronique
C’est une atteinte hépatique nécrotique et inflammatoire évoluant depuis 6 mois au
moins. Cette période de portage se divise en trois étapes successives:
- Phase réplicative: Elle correspond à la multiplication de HBV dans le foie. Elle dure
plusieurs années; la contagiosité est importante. Les transaminanses sont normales ou peu
élevées.
- Phase dite "de séroconversion" : elle est brève et correspond à la destruction d'hépatocytes
infectés. Sa fréquence spontanée est d'une dizaine de pourcents par an. Les transaminases sont
élevées, parfois de manière importante (> 1000 µl/l). Elle peut être symptomatique si elle
vient aggraver une cirrhose préexistante.
- Phase non réplicative: Le virus ne se multiplie plus. Son code génétique s'est intégré à celui
de son hôte. Les transaminases sont normales ou peu élevées. Une réactivation (c'est-à-dire
une nouvelle période de réplication virale) est possible au cours des 2 dernières phases; elle
est spontanée ou induite par une immunosupression. 30% des sujets atteints d'hépatite
chronique B vont évoluer vers la cirrhose en 10 ans; 20% d'entre eux souffriront d'un
carcinome hépatocellulaire. Le risque d'hépatocarcinome est multiplié par 100 par rapport au
ChapitreI: Hépatites Virales
10
sujet non porteur du virus B (LEURT, 1998).
1.2.4. - Culture et pouvoir pathogénique
Il n'y a pas de système de culture cellulaire capable de propager le virus. Toutefois des
cultures en lignée continues d'hépatocarcinome humain produisent de l'HBs (particules de 22
nm) mais pas d'HBc ni donc de virus. On a pu également transfecter des fragments d'ADN
viral dans des cellules bactériennes ou eucaryotes et obtenir ainsi d'utiles informations sur
l'expression des gènes du virus.
Le singe chimpanzé est sensible au VHB et fait une maladie cliniquement et
biologiquement semblable à la maladie humaine.
1.3.- Constitution d’antigène
L'antigène HBs se subdivise en sous types qui possèdent un déterminant commun "a"
et des motifs secondaires constituants des systèmes alléliques. La spécificité "w" est divisée
en quatre sous-classes numérotées de 1 à 4. Ces variétés antigéniques ont un intérêt
épidémiologique. L'antigène nucléocapsidique HBc n'est pas détectable dans le sérum même
si celui-ci contient des particules de Dane. On peut le mettre en évidence dans le noyau des
cellules hépatiques. L'antigène HBe, décrit par HAGNIUS en 1972, est lié à la nucléocapside
mais s'exprime, contrairement à l'HBc, quand celle-ci est en voie de lyse. Sa présence dans le
sérum est un témoin de multiplication virale et un critère d'infectiosité. Elle aurait en outre
une signification pronostique défavorable. L'antigène de surface HBs, constitué par
l'enveloppe, n'est pas infectieux. C'est l'antigène viral le plus important, quantitativement mais
également fonctionnellement car c'est sur sa détection dans le sérum que repose le diagnostic
et les anticorps qu'il suscite confèrent une protection contre une infection ultérieure. Ces
antigènes induisent la formation d'anticorps anti-HBc, anti-HBs, anti-HBe (LEURT, 1998).
1.4.- Cycle de multiplication
La première phase, dite "de réplication" se déroule dans le noyau de l'hépatocyte et
conduit à la libération de virions complets, infectieux et à une forte production d'antigènes
HBs et HBc. Le virus pénètre dans la cellule, débarrassé de son enveloppe grâce à son
"récepteur pour l'albumine". Après décapsidation, l'ADN viral pénètre dans le noyau et
ChapitreI: Hépatites Virales
11
devient bicatenaire sur toute sa longueur. Le brin L (-) est transcrit en ARN "pré-génomique"
par une ARN polymérase de l'hôte. Cet ARN s'encapside et quitte le noyau pour le
cytoplasme où l'ADN polymérase virale, qui a une activité transcriptase-réverse, synthétise le
nouveau brin L (-) à partir de l'ARN pré-génomique. Le brin S (+) est alors synthétisé sur la
matrice du brin L (-) nouvellement créé. Le virus est ensuite enveloppé et excrété. La phase
"d'intégration" fait suite à cette première phase de multiplication. L'ADN viral s'intègre dans
le génome de l'hépatocyte qui devient capable de produire l'HBs mais il n'y a plus de
production de virions complets ni d'expression d'antigènes HBc ou HBe: le sérum n'est plus
infectieux. L'étape de "transcription réverse" apparente le VHB aux rétrovirus (FEVERY,
1998).
1.5.- Marqueurs
L'évolution de la présence dans le sérum des antigènes et anticorps a été bien étudiée
dans les différentes formes cliniques de la maladie.
1.5.1.- Hépatite aiguë
- L'Ag HBs apparaît avant l'ictère et persiste pendant la phase aiguë,
- Les IgM anti-HBc apparaissent ensuite pendant la phase clinique.
- L'anti-HBs apparaît plus tardivement quand l'AgHBs disparaît et sa présence signe la
guérison; il persiste longtemps.
- L'Ag HBe est présent lors de la phase aiguë, sa disparition suivie ou non de l'apparition de
l'Ac anti-HBe signe la guérison. Au contraire, la persistance de l'Ag HBe fait redouter une
évolution vers la chronicité.
- Il peut arriver qu'au cours d'une hépatite aiguë, l'Ag HBs ne soit plus décelable et l'Ac anti-
HBs pas encore apparu: dans ces cas, le seul témoin biologique de la maladie est la présence
de l'Ac anti-HBc qui est donc un marqueur très précieux (FEVERY, 1998).
1.5.2.- Porteurs sains
- L'Ag HBs est présent par définition souvent accompagné d'un taux élevé d'anticorps IgG
anti-HBc. La recherche de l'Ag HBe est alors essentielle pour éliminer l'éventualité d'une
hépatite chronique HBe +.
ChapitreI: Hépatites Virales
12
- Chez certains porteurs chroniques d'Ag HBs, en cas d'infestations répétées (dialyse,
polytransfusés...), on peut trouver des Ac anti-HBs.
1.5.3.- Hépatite fulminante
On observe la disparition très rapide de l'Ag HBs et l'apparition des Ac anti-HBs à titre
élevé ; parfois Ag et Ac cohabitent.
1.5.5. -Hépatite chronique
L'Ag HBs est présent ainsi que l'Ac anti-HBc mais la recherche d'IgM anti-HBc est
négative. L'Ag HBe est le témoin d'une agression virale signant l'hépatite chronique active.
Dans certains cas d'hépatite chronique, l'Ag HBs n'est pas détecté; en l'absence d'Ac anti-HBs,
qui témoignerait d'une hépatite ancienne guérie, il importe de rechercher l'Ac anti-HBc et l'Ag
HBe dont la présence signe l'hépatite chronique (FEVERY, 1998).
1.5.6. - Convalescents, guéris ou vaccinés
Le stigmate de guérison est la disparition de l'Ag HBs remplacé par l'Ac anti-HBs qui
persiste souvent associé à l'Ac anti-HBc. La présence d'un Ac anti-HBe conforte ce pronostic
favorable. Les sujets vaccinés n'ont que des Ac anti-HBs puisque l'antigène vaccinal est l'Ag
HBs (FEVERY, 1998).
1.5.7. – Marqueurs de la réplication virale
Outre la recherche de l'Ag HBe dans le sérum, il existe plusieurs témoins de la
réplication virale. La recherche de l'Ag HBc dans le foie par immunomarquage et celle de
l'ADN viral imposent une biopsie hépatique et peuvent difficilement être répétés. Par contre
la mise en évidence dans le sérum de l'ADN viral par technique radioimmunologique ou par
hybridation ainsi que la mise en évidence d'une activité ADN polymérase, sans être de
pratique courante, sont utiles pour confirmer une redoutable évolution chronique ou pour
surveiller l'efficacité d'un traitement antiviral (FEVERY, 1998).
ChapitreI: Hépatites Virales
13
1.6.- Diagnostic
Le diagnostic précis est sérologique.
1.6.1. - Hépatite aiguë
* IgM anti Hbc: Ces anticorps apparaissent 2 à 4 semaines avant l'ictère (s'il survient) et
disparaissent en 3 mois (ils persistent quelquefois plus longtemps).
* AgHbs: Ils sont détectables 2 à 4 semaines avant l'ictère et disparaissent en 6 mois si le
sujet contaminé fait partie des 90% des individus qui guérissent.
* Anti Hbs: Ils surviennent quand AgHbs décroit, puis disparaît. Ils protègent d'une
réinfection par HBV. Ils persistent à vie le plus souvent mais peuvent s'estomper avec le
temps.
* IgG anti Hbc: Ils apparaissent quand les IgM décroissent et d'ordinaire persistent le plus
souvent. Ils ne sont pas protecteurs (FEVERY, 1998).
1.6.2. - Hépatite chronique
Par définition, AgHbs persiste au-delà de 6 mois.
* Phase réplicative: AgHbs +, AgHbe +, DNA HBV + (chez les virus B dits "mutants de
core"; AgHbe -, antiHbe +, DNA HBV +), IgG anti Hbc +.
* Phase de séroconversion: AgHbs +, passage de AgHbe + à AgHbe -, apparition de anti
Hbe, disparition du DNA HBV.
* Phase non réplicative: AgHbs +, AgHbe -, anti Hbe +, DNA HBV -, IgG anti Hbc +. Le
passage de AgHbs à anti Hbs est possible pendant les 2 dernières phases (spontanément, cette
évolution se produit dans 1% des cas par an). Le "porteur sain" a des transaminases normales,
Aghbs +, AgHbe -, DNA HBV-. Il est contagieux. Il n'a pas toujours un foie normal à la
biopsie.
1.7. – Traitement
L'hépatite aiguë "simple" ne se traite pas. L'hépatite fulminante requiert la
transplantation. Le but du traitement de l'hépatite chronique B est la suppression de la
réplication virale, si possible avant que le stade de cirrhose ne soit atteint. Seule la phase
ChapitreI: Hépatites Virales
14
réplicative mérite donc une thérapie particulière. Actuellement, l'interphéron alpha est le seul
traitement reconnu de l'hépatite chronique B. Il permet la séroconversion AgHbe vers anti
Hbe chez 40% des sujets traités pendant 6 mois. D'autres médicaments (famciclovir,
lamivudine) dont l'efficacité est en cours d'évaluation, seuls ou associés, promettent des
résultats meilleurs. La vidarabine est moins utile que l'interféron (FEVERY, 1998).
1.7.1. - Prévention
L'administration de gammaglobulines anti Hbs protège 6 semaines. 90% des sujets
vaccinés (par le vaccin recombinant ou celui dérivé du plasma) gardent un taux protecteur
d'anti Hbs (>10mUI/ml) pendant 5 ans au moins. 3% des sujets immunocompétents ne
répondent pas au vaccin maintenant disponible mais tireront sans doute bénéfice de ceux qui
sont à l'étude. Les enfants nés de mères porteuses de AgHbs reçoivent à la naissance à la fois
les immunoglobulines et le vaccin (FEVERY, 1998).
1.7.2. – Vaccination
Depuis 1972, on sait que la présence d'anticorps sériques anti-HBs a un effet
protecteur. En 1975, ont mis au point un vaccin (HEVAC B® de l'Institut Pasteur) dont
l'antigène vaccinant n'était ni un virus tué, ni un virus atténué, mais une fraction de virus
correspondant à l’enveloppe porteuse de l’antigène HBs, dénuée de pouvoir infectieux mais
très immunogène. Ce vaccin était préparé à partir de plasmas de porteurs sains de particules
purifiées d'antigène HBs de 22 nm. Les vaccins de "seconde génération" font aujourd'hui
appel aux techniques du génie génétique. La partie du génome du virus qui code pour les
protéines de surface du virus est sélectionnée puis transplantée dans une cellule hôte (levure
ou cellule animale). La cellule hôte en se répliquant produire alors les protéines d'enveloppe S
et pré-S suivant les gènes utilisés. Cet antigène est ensuite purifié à partir des cultures
cellulaires. Il existe actuellement trois vaccins produits par génie génétique (ENGERIX B®,
RECOMBIVAX®, GENHEVAC®). On pratique deux injections par voie intramusculaire à
trois semaines ou un mois d'intervalle avec rappel après 6 mois. La protection serait assurée
pendant dix ans (FEVERY, 1998).
La vaccination est indiquée chez toute personne soumise au risque d'hépatite B:
ChapitreI: Hépatites Virales
15
personnel hospitalier soignant, malades hémodialysés, personnel des centres de transfusion,
techniciens de laboratoire, nouveau-nés de mère HBs positives, populations résidant dans les
contrées à haute endémicité ou voyageurs s'y rendant. On considère comme protecteur un taux
d'anticorps anti-HBs supérieur à 10 µl/ml (FEVERY, 1998).
Chapitre II: Transaminases
17
2.1. - Classification des enzymes
Pour rationaliser les appellations des enzymes,un système de nomenclature des
enzymes a été adapté par un accord international. Ce système classe toutes les enzymes dans
une des six catégories principales basées sur le type de réaction catalysée (tableau 3). Chaque
enzyme n'est alors identifiée que par un code numérique de classification à quatre nombres
(HAMES et al, 2000)
Tableau 3: Classification internationale des enzymes (HAMES et al., 2000)
Classes Nom Type de réaction catalysée Exemple
1 Oxydoréductases Transfert des éléctrons
A+B � A+B Alcool Déshydrogénase
2 Transférases Transfert de groupements
Fonctionnels A-B+C � A+B-C
Hexokinase Transaminase
3 Hydrolases Réactions d'hydrolyse
A-B+H2O � A-H+B-OH Trypsine
4
Lyases Clivages C-C,C-O,C-N et d'autres liaisons formant souvent une double liaison A-B � A=B+x-y II Xy
Pyruvate décarboxylase
5
Isomérases Transfert de groupes à l'intérieur d'une molécule A-B � A-B II II Xy Xy
Malate isomerase
6 Ligases Ligases couplée à l'hydrolyse de
l'ATP A+B�A-B
Pyruvate carboxylase
2.2. -Transamination
2.2.1. -Découverte
En 1927 MOYLE-NEEDHAM avait déjà signalé que dans le muscle,les acides
aspartique glutamique pouvaient donner naissance a des diacides non azotés, sans formation
d'ammoniaque, ni d'urée, ni d'azote amidé ou purique,et sans variation de la teneur totale en
azote aminé (BISERTE et al., 1981). Il ne pouvait donc s'agir que d'un transport du groupe
Chapitre II: Transaminases
18
aminé. BRAUNSTIEN et KRISTGMANN (1973) ont étudie systématiquement cette réaction
de transfert de la fonction NH2 dans le muscle et ont décrit ce nouveau processus métabolique
des aminoacides sous le nom de transamination (BISERTE et al., 1981).
2.2.2. - Définition
La transamination catalysée par une aminotransférase à coenzyme phosphate de
pyridoxal(PLP), est une réaction de transfert réversible du groupement aminé entre un acide
aminé et un acide α-cétonique: l'acide aminé donneur du groupement aminé est transformé en
acide α-cétonique, l'acide α-cétonique accepteur du groupement aminé est transformé en acide
aminé. L'acide α-cétonique, accepteur est presque toujours l'α-cétoglutarate qui est transformé
en glutamate (MOUSSARD, 1999). Les transaminases (ou aminotransférases) sont des
enzymes qui catalysent le transfert de radicaux NH2 sur un acide cétonique. Il existe dans le
sérum une transaminase glutamo-oxaloacétique (GOT) ou aspartate aminotransférases et une
transaminase glutamo-pyruvique (GPT) ou alanine aminotransférases . Les concentrations
plasmatiques de la GOT et de la GPT sont habituellement inférieures à 40 Ul/l chez le sujet
normal. Ces enzymes sont contenus en abondance dans différents tissus: le foie, les muscles
(en particulier le myocarde) et les reins (BENHAMON et al., 1981).
• La L-aspartate aminotransférase (E.C.2.3.1.1., GOT) : Elle est une enzyme qui existe
sous deux formes moléculaires localisées différement à l'intérieur de la cellule, l'une dans le
cytoplasme, l'autre dans la matrice mitochondriale. Elle catalyse la synthèse et la dégradation
de l'acide aspartique et de l'acide glutamique par l'intermédiaire des 2 oxoacides
correspondants, l'acide oxaloacétique et l'acide 2-oxoglutarique. Le fonctionnement de la
GOT nécessite la présence d'un cofacteur, le phosphate de pyridoxal, dérivé de la vitamine B6.
Cette enzyme est présente dans le foie, mais aussi dans de nombreux autres organes, en
particulier dans le myocarde, les muscles squelettiques et les reins. La demi-vie plasmatique
de l'enzyme est de 17±heures en moyenne. Elle diffère pour chaque forme moléculaire de la
GOT; la vitesse de disparition de la GOT plasmatique après injection est de 6 heures pour
l'isoenzyme mitochondriale contre 4 à 5 jours pour l'isoenzyme cytoplasmique (AGNERAY
et al., 1988).
• La L-alanine aminotransférase (E.C.2.6.1.2.; GPT+
): C’est une enzyme spécialement localisée dans le foie, mais en la trouve aussi dans les reins
Chapitre II: Transaminases
19
et d'autre organes. Elle catalyse le transfert réversible du groupement aminé de la L-alanine
sur le 2-oxoglutarate avec formation de pyruvate et de glutamate et utilise le phosphate de
pyridoxal comme cofacteur. La demi-vie plasmatique de l'enzyme est de 47±10 heures en
moyenne (AGNERAY et al., 1988).
2.3. - Mécanisme d'action de transaminase
Les transaminases travaillent avec un coenzyme important à connaître, qui est le
phosphate de pyridoxal.
A- Phosphate de pyridoxal
En 1944, SNELL a établi que le coenzyme (ou groupement prosthétique) de toute les
aminotransférases est le phosphate de pyridoxal (PLP) qui provient de la pyridoxine
(vitamineB6).
Figure 1- Phosphate de pyridoxal (BISERTE, 1977)
Le phosphate de pyridoxal existe sous deux formes, le pyridoxal-5-phosphate (PLP), et la
pyridoxamine-5-phosphate (PMP).
Chapitre II: Transaminases
20
Figure 2- Deux formes du phosphate de pyridol (PELMONT, 1993)
Le PLP possède une fonction aldéhydique, le PMP une fonction amine. Le PLP est
représente sous deux formes: une forme libre et une forme liée à l'enzyme sur une chaîne
latérale de lysine par une liaison classique en chimie (base de schiff) (PELMONT, 1993).
B- Mécanisme de transamination
Les enzymes à PLP (comme les aminotransférases) forment, avec leurs substrats, des
intermédiaires covalents qui sont des bases de schiff. En l'absence de substrat,le groupement
aldéhydique du PLP est sous forme de base de schiff, lié au groupement ε-amine d'un résidu
particulier de lysine du site actif. Une nouvelle liaison par base de schiff est formée par
addition d'un acide aminé substrat. Le groupement α-aminé du substrat acide aminé déplace le
groupement ε-aminé de la lysine du site actif. La base de schiff acide aminé PLP qui est
formée reste étroitement liée à l'enzyme par des interactions multiples, non covalentes.
Chapitre II: Transaminases
21
Base de schiff formé entre Base de schiff formé entre
le phosphate de pyridoxal Le phosphate de pyridoxal
et l'enzyme. et l'acide aminé substrat.
Figure 3- Mécanisme de transamination (BISERT, 1977)
SNELL et BRAUNSTEIN ont proposé, il y a déjà plus de quarante ans, un mécanisme de
réaction pour la transamination (figure 3) dont il a été montré qu'il était généralement valide.
La base de schiff, entre le substrat acide aminé et le PLP, appelée aldimine, perd un proton à
partir de son carbone α et forme un intermédiaire quinonoϊde. La reprotonation fournit une
cétimine qui contient une double liaison entre N et Cα du substrat, alors que l'aldimine
contient une double liaison entre N et C du carbonyle de PLP (STRYER, 1992).
Figure 4- Mécanisme d'action proposé pour les réactions de transamination
(STRYER, 1993)
La cétimine est ensuite hydrolysées en un acide α-cétonique et phosphate de
pyridoxamine. Ces étapes constituent la moitié de la réaction de transamination.
Chapitre II: Transaminases
22
Acide aminé + E-PLP <====> Acide α-cétonique + E-PMP
La seconde moitié se produit par la réversibilité de la voie indiquée ci-dessus.
Un second acide α-cétonique réagit avec le complexe enzyme-phosphate de
pyridoxamine (E-PMP) pour fournir un second acide aminé et régénérer le complexe enzyme-
phosphate de pyridoxal (E-PLP) (STRYER, 1992).
Acide α-cétonique 2 + E-PMP <====> Acide aminé2 + E-PLP
La somme de ces réactions partielles est:
Acide aminé +acide α-cétonique2 <====>Acide aminé2 +acide α-cétonique
Exemple: Donc dans le cas d' aspartate aminotransférase on aura selon (PELMONT 1993) le
schéma suivant:
Aspartate + enzyme – PLP <====> Oxaloacétate + enzyme ,PMP
2-oxoglutarate + enzyme,PMP <====> Glutamate + enzyme -PLP
Aspartate + 2-oxoglutarate <====> Oxaloacétate + Glutamate
Acide aminé + acide α-cétonique2 <===> Acide α-cétonique + acide aminé2
Examinons le mécanisme d'action de l'aminotransférase. On a représenté de façon
simplifiée une seule demi-réaction en 5 schémas.
Figure 5- Schéma d'une demi-réaction de transamination (Action de l'aspartate
aminotransférase) (PELMONT, 1993)
Chapitre II: Transaminases
23
Figure 6- La réaction globale d'une transamination (HAMES et al, 2000).
2.4. - Intérés semiologique des transaminases (BENHAMON, 1981)
2.4.1. - Atteints hépatiques
Pratiquement toutes les affections hépatiques imposent un dosage des transaminases.
Les plus importantes sont:
• Les hépatites aigues: l'élévation des de GOT et de GPT est toujours très importante comme
le montre la figure 6. Les caractéristiques de cette élévation sont les suivantes. Elle est déjà
très nette avant l'apparition de l'ictère. Elle atteint environ 600 Ul/l pour la GPT et 400 Ul/l
pour la GOT en pleine phase ictérique. Elle permet de suivre d'une manière très précise
l'évolution de la maladie et constitue un excellent signe précoce d'une rechute éventuelle.
L'élévation du taux des transaminases est le seul signe permettant le diagnostic des hépatites
anictériques.
• Les hépatites chroniques: l'augmentation du taux des transaminases est un signe constant,
mais les valeurs obtenues demeurent inférieures à celles observées dans les hépatites aigues,
Chapitre II: Transaminases
24
elle traduit cependant l'atteinte parenchymateuse par nécrose cellulaire.
2.4.2. -Obstructions biliaires
Le taux des transaminases augmente nettement et se situe aux environs de 100 Ul/l, le
retour à la valeur normale est cependant rapide, plus rapide que dans le cas des hépatites
aigues (Fig. 6).
0 1 2 3 4 5 semaines
Figure 7- Evolution des taux sériques de GOT et GPT au cours de l'hépatite aigue
(BENHAMON, 1981)
2.5. - Différent cas d'apparition de la transaminase dans le sang
La GPT est libérée dans la circulation sanguine en grande quantité en cas de nécrose
cellulaire: c'est avant tout une enzyme de cytolyse. Les augmentations très importantes de la
GPT (plus de 15 fois la limite supérieure) s'observent:
- Dans les hépatites toxiques: il n'est pas rare d'observer des activités 100 fois supérieures à la
normale, mais la GPT se normalise rapidement lorsque le sujet est soustrait à l'agression.
- Dans les hépatites virales: l'activité de la GPT peut être multipliée par 10 ou 100 fois.
L'augmentation de la GPT est présente dés la phase prés ictérique et persiste pendant toute la
durée de la maladie (deux à six semaines).
- Dans une hépatite virale commune,la GPT augmente progressivement, atteint un pic, puis
Chapitre II: Transaminases
25
retourne à la normale pendant la phase de guérison (KAMOUN et FREJAVILLE, 1977).
L'augmentation très importante des transaminases à une très grande valeur diagnostique pour:
- Une hépatite cytolytique lors d'un ictère.
- Les hépatites anictèriques.
- L'hépatite virale à la phase préictérique lors d'une épidémie.
L'absence de parallélisme entre l'élévation de la GPT et l'étendue de la nécrose
hépatique ne permet en aucun cas de formuler un pronostic sur la seule courbe de la GPT. En
effet, certaines hépatites graves, rapidement mortelles, n'ont pas d'augmentation notable des
transaminases, et les formes avec fortes élévations initiales de la GPT présentent souvent des
évolutions bénignes.
Une activité plus élevée des transaminases sériques s'observe avec une relative
fréquence dans les hépatites à évolution prolongée. Des élévations persistantes de la GPT a la
sixième semaine doivent faire redouter l'hépatite chronique, et une réascension tardive indique
une rechute.
- Dans les anoxies hépatiques (secondaires à une défaillance cardiorespiratoire aigue, à un
collapsus cardiovasculaire, à une embolie ou une ligature de l'artère hépatique propre).
- Dans certains poussées de l'hépatite chronique agressive.
- Dans certains hépatites mononucléosiques (rarement).
Dans toutes ces étiologues, la transaminase oxaloacétique est également élevée mais à
des taux plus modestes. Les augmentations modérées de la GPT (inférieures à 10 fois la limite
supérieure de la normale) sont observées dans:
- Les cirrhoses éthyliques et biliaire primitives (valeurs multipliées par 5 au 10),
- Les hépatites chroniques actives,
- Les cancers secondaires ou primitifs du foie.
- La cholestase, surtout lorsqu'elle est prolongée (mais des valeurs de la GPT supérieure à 10
fois la limite supérieure de la normale sont tout à fait exceptionnelles).
Des augmentations de la GPT peuvent être observées en dehors des maladies
hépatobiliaires comme le cas d'une pancréatite aigue ou un infarctus du myocarde (KAMOUN
et FREJAVILLE, 1977). La GOT est augmentée dans toutes les circonstances ou la GPT est
augmentée et dans certaines circonstances particulières ou la GPT est au contraire en général
Chapitre II: Transaminases
26
normal.
En dehors des affections hépatobiliaires la GPT augmente:
- Dans l'infarctus du myocarde.
- Après chirurgie cardiaque et traumatisme du myocarde.
- Après traumatisme des muscles squelettique.
- Dans certaines maladies musculaires.
- Dans la pancréatite aigue (KAMOUN et FREJAVILLE, 1977).
2.6.- Méthode de dosage des transaminases
2.6.1.- Mesure de l’activité des enzymes
Dans l’état actuel des techniques d’analyse enzymatique‚ il n’est pas courant de doser
une enzyme en tant que substance définie. Les méthodes immunologiques permettront peut-
être dans l’avenir d’effectuer le dosage direct de l’enzyme en tant que protéine (AUDIGIE,
1992�. En général‚ le dosage des enzymes se fait de manière indirecte‚ en évaluant une
propriété proportionnelle à la concentration d’enzyme:
- Soit une propriété physique: C’est la méthode calorimétrique‚qui consiste à mesurer la
quantité de chaleur dégagée lorsque l’on ajoute du substrat en excès à un milieu adéquat
contenant l’échantillon d’enzyme à doser. Cette technique est très rarement utilisée
(AUDIGIE, 1992�.
- Soit une propriété cinétique: C’est la mesure de l’activité‚la mesure est faite dans les
conditions où cette dernière est proportionnelle à la concentration d’enzyme (AUDIGIE,
1992�.
Le cas classique ou la détection de l’activité enzymatique se fait par
spectrophotomètre. Cette activité peut-être détectée et mesurée en déterminant la vitesse de
réaction en présence de concentration saturante du substrat (DURAND, 1982�.
2.6.1.1.- Détermination directe
A un volume donné de mélange réactionnel comprenant le ou les substrats et cofacteur
de l’enzyme en milieu tamponné et thermo staté‚ est ajouté un aliquote de l’échantillon à
Chapitre II: Transaminases
27
doser. Dans le cas le plus simple‚ la variation de concentration en fonction du temps d’un des
réactifs est directement calculée à partir de la variation d’absorbance due à ce réactif. La
variation de concentration du composé en fonction du temps dépend de l’activité enzymatique
présente dans l’échantillon et donc permet la mesure de celle-ci (DURAND 1982�.
2.6.1.2.- Cas des réactions couplées
Lorsque le produit d’une réaction enzymatique est difficilement accessible à la
mesure‚ on utilise une ou plusieurs réactions enzymatiques complémentaires‚couplées les
unes aux autres. La dernière doit faire intervenir un produit final facilement mesurable. Les
systèmes couplés sont généralement conçus pour aboutir à des réactions indicatrices bien
connues et optimisées. Dans ce domaine‚ l’utilisation des coenzymes pyridiniques et des
peroxydases est très générale:
• Coenzymes nicotiniques : L’intérêt de ces coenzymes provient du fait que les spectres
dans l’ultra violet des formes oxydées et réduites sont très différent. En suivant la variation de
densité optique à 340 nm en mesure l’apparition ou la disparition de la forme réduite
(MARTIN 1995�.
• Les peroxydases : Ces enzymes sont surtout utilisées dans les réactions indicatrices des
dosage de substrat, à l’inverse des réactions enzymatiques ou l’on utilise des déshydrogénases
à NAD (MARTIN, 1995�.
2.6.2.- Technique
2.6.2.1.- Méthodes de mesure de la vitesse moyenne dite méthode "2 points"
C’est le procédé classiquement utilisé en méthodes manuelles. Il consiste à laisser
l’enzyme catalyser la réaction pendant une durée fixe‚ à arrêter son action‚ puis à évaluer la
quantité de substrat transformé ou de produit apparu (MARTIN, 1995�.
2.6.2.2.- Méthodes de mesure de la vitesse instantanée dite méthode cinétique
Ce procédé, qui s’adapte parfaitement à l’analyse automatique, consiste à suivre
l’évolution de la réaction en fonction du temps. La substance dont on mesure la vitesse de
disparition ou l’apparition doit posséder une propriété spectrale spécifique dans l’ultra-violet
ou le visible ; l’enregistrement des variations d’absorbance en fonction du temps est la
Chapitre II: Transaminases
28
technique la plus simple, la plus rapide, la plus spécifique. Le couple NAD+/NADH ou
NADP+/NADPH est usuellement employé (MARTIN, 1995�.
2.6.3.- Standardisation des méthodes, les méthodes optimisées
Les résultats de la mesure de l’activité d’une enzyme ne peuvent être comparés que si
les conditions opératoires sont identiques. Des efforts sont donc faits en en vue de
standardiser les techniques de dosage. Les conditions des méthodes conventionnelles sont
choisies optimales. Concentration des substrats, des coenzymes, concentration et constitution
du tampon, pH, utilisation d’effecteurs, à fin d’obtenir des activités plus élevées. Les
méthodes standardisées sont dites alors optimisées (MARTIN, 1995�. Actuellement des
recommandations sont disponibles pour la détermination d’activités: GOT, GPT, LDH, GLD,
CK, PAL, GGT (AGNERAY et al., 1990�.
2.6.4.- Quelques schémas des méthodes recommandées de détermination de l’activité
transaminasique (AGNERAY et al., 1990d
Les méthodes de détermination de l’activité transaminasique connues de nos jours se
regroupent comme suit:
• Alanine aminotransférase (GPT) (Méthode recommandée par l’I.F.C.C; 1986).
Méthode cinétique U.V 30 °C –Tampon Tris-(hydroxyméthyl)-aminométhane
100mmol/l ; pH = 7.30 ; L-Alanine 500 mmol/l ; Pyridoxal 5’phosphate 0.1 mmol/l ;
NADH.H+ 0.18mmol/l; Lactate déshydrogénase 20µkat/l; 2-Oxoglutarate 15mmol/l.
• Alanine aminotransférase (GPT)(Méthode recommandée par la S.F.B.C.1982).
Méthode cinétique U.V 30 °C –Tampon Tris-(Hydroxyméthyl)-aminométhane
100mmol/l ; PH = 7.50; Pyridoxal 5’phosphate 0.1mmol/l; NADH.H+ 0.18 mmol/l; Lactate
déshydrogénase 20 µkat/l; L-Alanine 500 mmol/l; 2-Oxoglutarate 15mmol/l.
• Alanine aminotransférase (GPT )(Méthode recommandée par la D.G.K.C.,1972).
Méthode cinétique U.V 25 °C –Tampon phosphate 80 mmol/l ; pH = 7.40; L-Alanine 800
mmol/l ; NADH.H+ 0.18 mmol/l; Lactate déshydrogénase 20 µkat/l; 2-Oxoglutarate
15mmol/l.
• Aspartate aminotransférase (GOT) (Méthode recommandée par l’I.F.C.C., 1986).
Méthode cinétique U.V 30 °C -Tampon Tris-(hydroxyméthyl)-aminométhane 80mmol/l;
Chapitre II: Transaminases
29
pH = 7.80; L-Aspartate 200 mmol/l; NADH.H+ 0.18mmol/l; Pyridoxal 5’phosphate
0.1mmol/l; Malate déshydrogénase 7 µkat/l; Lactate déshydrogénase 10µKat/l; 2-
Oxoglutarate 12mmol/l.
• Aspartate aminotransférase (GOT)(Méthode recommandée par la S.F.B.C.,1982).
Méthode cinétique U.V 30 °C -Tampon Tris-(hydroxyméthyl)-aminométhane 80
mmol/l; pH = 7.80; L-Aspartate 200 mmol/l; NADH.H+ 0.18 mmol/l; Pyridoxal 5’phosphate
0.1mmol/l; Malate déshydrogénase 10 µkat/l; Lactate déshydrogénase 15 µkat/l; 2-
Oxoglutarate 12 mmol/l.
• Aspartate aminotransférase (GOT) (Méthode recommandée par la D.G.K.C., 1972).
Méthode cinétique U.V 25 °C -Tampon phosphate 80 mmol/l; pH = 7.40; L-Aspartate
200 mmol/l; NADH.H+ 0.18 mmol/l; Malate déhydrogénase 10 µkat/l .Lactate
déshydrogénase 20 µkat/l; 2-Oxoglutarate 12 mmol/l.
Chapitre III: Matériels et méthodes
31
3.1.- Présentation de la zone d'étude
La zone d’étude pour le présent travail est la cuvette de Ouargla. Elle est situé à une
altitude de 157 mètres par rapport au niveau de la mer. Elle comprend actuellement 21
communes regroupées en dix daïra. Chaque commune est constituée de quartiers certaines
sont composées de populations urbaines et d’autres nomades sédentarisés (ANONYME,
1995).
3.2.- Choix du site et enquête
L'étude se veut un recensement de l’hépatite. Dans l’ensemble, cette enquête au sein
du service d’hématologie de l’hôpital MOHAMED BOUDIAF, se divise en deux parties, la
première est un travail pratique dans le laboratoire qui consiste au dosage des transaminases,
et en seconde étape une étude rétrospective. Elle permet de rechercher l’intérêt du dosage des
transaminases au cours des atteintes de l’hépatite B. Elle se complète par une consultation des
listes des sujets atteints auprès du service d’hématologie du centre. Cette étude s’est déroulée
de mars à août 2006.
L’approche méthodologique choisie, permet de caractériser la situation de la maladie
dans la cuvette de Ouargla. Elle permet de rechercher, de déterminer la fréquence et
l'évolution de cette maladie dans le temps. Il faut noter que la cuvette de Ouargla n’a qu'un
seul hôpital pourvu des dossiers des malades de l’hépatite.
3.3.- Matériels
3.3.1.- Matériel biologique
Il est constitué par du sang. Le plasma non hémolysé est recueilli des patents dans des
tubes héparine en vu de leur étude. A cet effet le patient doit se présenter le matin à jeun.
Chapitre III: Matériels et méthodes
32
3.3.2.- Appareillage
Il se compose de:
• Spectrophotomètre semi automatique de type EKMA INC AE600,
• Centrifugeuse de type JOUAN,
• Micropipettes fixes de 500µL et de 50 µL,
• Portoirs.
A cet ensemble il faut ajouter
• Embouts bleus, et embouts jaunes,
• Tubes héparines en plastique,
• Tubes à hémolyse en verre,
• Eau distillée,
• Gants.
3.2.3.- Réactifs
a/- Réactifs utilisés pour le dosage de GPT
- 2-Oxoglutarate 12 m mol/l.
- L-Aspartate 200 m mol/l.
- MDH 545 Ul/l.
- LDH 909 Ul/l.
- NADH ≥ 0.18 m mol/l.
- Tampon Tris (7.80) 80 m mol/l.
b/- Réactifs utilisés pour le dosage de GOT
- α- cétoglutarate 176 m mol/l.
- L- Aspartate 660 m mol/l.
- LDH ≥ 1650 U/l.
- NADH 2.64 m mol/l.
- Tampon Tris (7.80) 121 m mol/l.
Chapitre III: Matériels et méthodes
33
3.4.- Mode opératoire
3.4.1.-Prélèvement : Il a lieu chez les patients qui se présentent au service d’hématologie. Il
est effectué à jeun dans des tubes héparines.
3.4.2.- Enregistrement: Tout tube de prélèvement arrivant au laboratoire est accompagné
d’une demande d’analyse où sont précisés les tests à pratiquer. Le nom et le prénom du
patient, le service et la date sont notés sur le tube. Ces informations sont consignées sur un
registre de laboratoire comme archive.
3.4.3.- Centrifugation: Une centrifugation de l’échantillon à 4000 tours par minute pendant
10 minutes est effectuée.
3.4.4.- Dosage: Méthode enzymatique cinétique recommandée par l’I.F.C.C. est réalisée.
a/- Dosage de GOT
- Principe: Comme ni le substrat, ni le produit de l’ASAT dont on mesure l’activité ne
possèdent des propriétés spectrale particulières, la réaction principale catalysée par cette
enzyme, est couplée à une 2ème réaction appelée indicatrice, cette dernière est catalysée par
une déshydrogénase, dont le substrat est le produit de la 1èreenzyme.
• Réaction principale
ASAT
1
L-Aspartate + 2-Oxoglutarate Oxaloacétate +L-Glutamate.
2
Le dosage consiste à utiliser le sens (1) de la réaction et évaluer la quantité
d’oxaloacétate formée. On utilise pour cela la réaction enzymatique suivante comme réaction
indicatrice.
• Réaction indicatrice
MDH
Oxaloacétate + NADH+H+ L-Malate + NAD+
Chapitre III: Matériels et méthodes
34
L‘enzyme est la malicodéshydrogénase qui fonctionne en présence de NAD réduit, la
quantité de NAD oxydé (NAD+) est proportionnelle à la quantité d’acide oxaloacétique
présent, donc à l’intensité de l’activité transaminasique GOT recherchée. La transformation
de la forme réduite du coenzyme en sa forme oxydée, est très facile à mesurer, puisque ce
coenzyme dans l’ultra violet, un spectre caractéristique qui dépend de son état d’oxydation
spécialement intéressant à la longueur d’onde de 340 nm.
• Réaction principale
COOH COOH COOH COOH
׀ ׀ ׀ ׀
CH2 CH2 GOT CH2 CH2
׀ ׀ ׀ ׀
CH-NH 2 + CH2 C=O + CH2
׀ ׀ ׀ ׀
COOH C=O COOH COOH
׀
COOH
Aspartate α-Cétoglutarate Oxaloacétate Glutamate
• Réaction indicatrice
COOH
MDH ׀
CH2
׀
C=O
+NADH,H+ NAD ׀
COOH
Oxaloacétate
COOH
│ CH2
│
CHOH │ COOH
Malate
Chapitre III: Matériels et méthodes
35
- Préparation des réactifs
Ajouter au contenu du flacon la quantité d’eau distillée indiquée sur l’étiquette.
Mélanger doucement et laisser incuber pendent 20 minutes à température ambiante. La
conservation se fait à + 4°C, jusqu’à la date de péromption du coffret, après reconstitution, 30
jours de +2 à +8 °C.
- Mode opératoire
• Programmation de l’appareil :
- Volume d’aspiration 500 µl
- Trajet optique 1 cm
- Longueur d’onde 340 nm
- Température 37°C
Introduire dans un tube à hémolyse 500µl du réactif (par la micropipette de 500µl), et
50µl du plasma héparine (par la micropipette de 50µl).
• Mélanger, et lire au spectrophotomètre.
• Le résultat (concentration de GOT en Ul/l s’affiche sur l’écran de l’appareil).
• Le résultat imprimé parallèlement à l’affichage.
b/- Dosage de GPT
- Principe: Comme la GOT, le dosage de la GPT (ALAT), nécessite deux réactions, la
première est la réaction principale, catalysée par la GPT, la deuxième est la réaction
indicatrice catalysée par une déshydrogénase qui fonctionne en présence de NAD réduit.
• Réaction principale
ALAT
1
L-Alanine + α-Cétoglutarate Pyruvate + L-Glutamate
2
Le dosage consiste à utiliser le sens (1) de la réaction et à évaluer la quantité du
pyruvate formé en utilisant la réaction enzymatique suivante.
Chapitre III: Matériels et méthodes
36
• Réaction indicatrice
LDH
Pyrivate + NADH+H+ Pyruvate + Lactate + NAD+
L’enzyme est le lactate déshydrogénase.
• Réaction principale
• Réaction indicatrice
- Préparation des réactifs: Ajouter au contenu du flacon la quantité d’eau distillée indiquée
sur l’étiquette. Mélanger doucement et laisser pendant 20 minutes à température ambiante. La
conservation a lieu à + 4 °C, jusqu’à la date de péremption du coffret ; après reconstitution 30
jours de + 2 à + 8 °C.
- Mode opératoire : Le mode opératoire est le même que celui utilisé pour le dosage de
GOT.
CH3 COOH CH COOH ׀ ׀ ׀ ׀
CH-NH2 CH2 GPT C=O CH2
׀ ׀ ׀ ׀ COOH + CH2 COOH + CH2
׀ ׀ C=O CH-NH2
׀ ׀ COOH COOH
L-Alanine α-cétoglutarate pyruvate L-glutamate
CH3 CH3
׀ LDH ׀ C=O CHOH
׀ ׀ COOH COOH NADH+H+ NAD+
Pyruvate Lactate
Chapitre IV: Résultat et déscution
39
4.1.- Résultats
L’étude statistique comprend plusieurs répartition, selon le sexe, selon l’âge et les
concentrations de GOT et GPT. Ceci permet de déceler si elles existent les différences entre
les résultats obtenus selon le facteur sexe, le facteur âge et l’enzyme dosée (GOT ou GPT).
Elle porte aussi sur une recherche étiologique qui montre l’intérêt du dosage des
transaminases comme moyen de diagnostic des atteintes hépatiques et un cas particulier, voir
l’intérêt de cet examen dans le suivi de ces atteintes.
Les résultats du tableau 4 laissent remarquer que dans les échantillons examinés, sur
les 120 patients, il se retrouve 40% ayant une concentration de GOT supérieure à la normale,
et 60% dont la concentration de GOT demeure normale. Parmi les patients présentant un de
GOT élevé sur les 48 cas enregistrés, on note 32 hommes et 16 femmes. Durant cette étude les
hommes semblent plus disposés à présenter GOT élevé par rapport aux femmes.
Tableau 4: Répartition des patients selon le taux de GOT
Paramètres Concentration normale Concentration élevée
Nombre de patients Pourcentage Nombre de patients Pourcentage
Hommes 32 26.67 32 26.67
femmes 40 33.33 16 13.33
Total 72 60 48 40
Parallèlement les résultats du tableau 5 montrent que sur les échantillons des 120
patients, 36.67% ont une concentration de GPT supérieure à la normale, et 63.33% qui on une
concentration de GPT normale. Sur un total de 44 patients présentant un GTP élevé on note de
même 31 hommes et 13 femmes.
Tableau 5: Répartition des patients selon leur taux de GPT
Paramètres
Concentration normale Concentration élevée
Nombre des patients Pourcentage Nombre des patients Pourcentage
Hommes 33 27.5 31 25.83
Femmes 43 35.83 13 10.84
Total 76 63.33 44 36.67
Chapitre IV: Résultat et déscution
40
Toutefois la répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT, la figure 8
montre que 60% des patients ont des taux de GOT inférieurs ou égaux à 40 µl/l, 17.5% des
patients ont des taux de GOT allant de plus de 40 à 100 µl/l, donc de plus d’une foie la
normale à 2.5 la normale, ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse modéré ; 15.83%
des patients ont des taux de GOT allant de plus de 40 à 100 µl/l, donc de 2.5 à 5 fois la
normale. Ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse peu important et seulement
6.67% des patients ont des taux de GOT supérieurs à 200µl/l, donc plus de 5 fois la normale.
Ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse important.
0
10
20
30
40
50
60
concentration deGOT(Ul/l)
Figure 8- Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT.
Pour la répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT, la figure 9
montre de même que 63.33% des patients ont des taux de GPT inférieurs ou égaux à 45 µl/l,
19.17% des patients ont des taux de GPT allant de plus de 45 à 112.5Ul/l donc de plus d’une
foie la normale à 2.5 la normale. Ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse modéré,
10.83% des patients ont des taux de GPT allant de 112.5 à 225 Ul/l, donc de 2.5 la normale;
ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse peu important ; mais 6.67% des patients ont
des taux de GPT supérieurs 225 µl/, donc plus de 5 fois la normale, ce qui signifie qu’ils ont
un syndrome de cytolyse important.
Pourcentage
concentration
Chapitre IV: Résultat et déscution
41
0
10
20
30
40
50
60
70
45 45-112,5
112,5-225
225
concentration deGPT
Figure 9- Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT.
Au des résultats du tableau 6(voir l’annexe), il n’existe pas une différence significative
entre les valeurs de GOT selon le sexe ; donc le taux de GOT ne diffère pas selon le sexe.
Tableau 10: Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon le
sexe
Femmes Hommes
Nombre 13 31
Moyenne 178.05 186.09
Il en est de même au vu des résultats du tablea10, qu’il n’existe pas une différence
significative entre les valeurs de GPT selon le sexe, d’où le taux de GPT ne diffère pas selon
le sexe. Toutefois la répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GOT selon
l’age, la figure 10 montre des patients appartenant à la tranche d’âge de 5 à 15 ans présentent
6.25 % des malades ayant des valeurs pathologiques de GOT avec une moyenne de
47.33Ul/l ; des patients appartenant à la tranche d’age de 15 à 25 ans représentent 25% avec
une moyenne de 180.17Ul/l, des patients appartenant à la tranche d’âge de 25 35 ans
représentent 27.08% avec un moyenne de 110.76Ul/l et des patients appartenant à la tranche
d’âge de 35 à 45 ans représentent 20.83% avec un moyenne de178.72Ul/l. Toutefois les
patients appartenant à la tranche d’age de 45 à 65 ans représentent 16.66% avec un moyenne
de 231 Ul/l. Donc le taux de GOT augmente avec l’age.
Pourcentage
concentration
Chapitre IV: Résultat et déscution
42
0
50
100
150
200
250
5 -15 ans
15 -25ans
25 -35ans
35 -45ans
45 -65ans
concentration deGOT
Figure 10- Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GOT selon l’age.
Pour la répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon l’âge, la
figure 11 montre des patients appartenant à la tranche d’âge de 5 à 15 ans représentent un
pourcentage de 4.34% des malades ayant des valeurs pathologiques de GPT avec une
moyenne de 73.5Ul/l, des patients appartenant à la tranche d’âge de 15 à 25 ans représentent
28.26% avec une moyenne de 189.28Ul/l, des patients appartenant à la tranche d’âge de 25 à
35 ans représentent 28.26% avec un moyenne de 129.08Ul/l et des patients appartenant à la
tranche d’âge de 35 à 45 ans représentent 19.56% avec un moyenne de 219.54Ul/l. Les
patients appartenant à la tranche d’âge de 45 à 65 ans représentent 16.66% avec un moyenne
de 222.12 µl/l. De même le taux de GPT augmente avec l’âge.
pourcentage
age
Chapitre IV: Résultat et déscution
43
0
50
100
150
200
250
5-15ans
25-35ans
45-65ans
concentratin deGPT(Ul/l)
Figure 11- Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon l’âge
Pour la recherche étiologique, la sérologie virale l’hépatite B est diagnostiquée par des
tests sérologiques spécifiques de l’infection à HBV. Mais l’hépatite C est diagnostiquée par
exclusion puisqu’il n’ y a pas de marqueurs sérologiques spécifiques pour l’hépatite non-A,
non-B (AGNERAY 1988). En cas d’hémochromatose le taux de fer sérique est élevé,
l’hyperferritinémie (>1000g/l) traduit ne surcharge importante en fer et la saturation de la
transferrine est alors toujours franchement élevé (souvent supérieure à 80%) (WILLE ,1994).
La Biopsie du foie est utilisé pour identifier la cause ou le stade d’une maladie du foie.
La fibrose s’exprime par des scores (KNODELL ou METAVIAL). Le stade le plus grave
étant la cirrhose. Toutefois pour BOUVINOT et al (1995), les médicaments métabolisés par le
foie, ou leur métabolite intermédiaire, peuvent être à l’origine de lésions hépatiques (donc
élévation des transaminases).
Le tableau 10 (voir l’annexe) montre les résultats de la recherche étiologique chez les
48 patients ayant des concentrations de GOT sériques supérieurs à la normale. L’enquête
étiologique a permis de constater que 56.25% (27 patients) ont l’hépatite B. Cette forme
d’hépatite gagne de plus en plus les malades présentant cette pathologie.
pourcentage
age
Chapitre IV: Résultat et déscution
44
Tableau 11: Répartition des patients selon les résultats de la recherche étiologique
Nombre de patients Pourcentage
Hépatite C et hémochromatose. 4 8.33
Hépatite C, hémochromatose
et L.B et/ou c.v.o
1 2.08
Hépatite B 27 56.25
Hémochromatose et prise
médicamenteuse
1 2.08
L.B et/ou c.v.o et prise
médicamenteuse
2 4.17
Prise médicamenteuse 3 6.25
Causes non déterminées 10 20.83
La figure 12 laisse apparaître selon l’âge les résultats de l’enquête. Plus de 77% des
malades ont un age entre 20 et 40 ans. Les patients concernés par la présente étude viennent
des localités du Ksar, de Bamendil, Sokra, Beni Thour.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Ksar Bamendil Sokra BeniThour
≤20 ans
20- 40ans
≥40 ans
Figure 12- Répartition des malades d’hépatite B selon l’age et les zones
zones
pourcentage
Chapitre IV: Résultat et déscution
45
Les résultats de la figure 13 montre que la majorité des malades de l’hépatite (surtout
l’hépatite B) sont des hommes avec un pourcentage de 88.89 %. Ce constat est presque
identique dans toutes les zones.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
ksar Ruissat Hdeb Sokra ex-ITAS Ifri
Hommes
Femmes
Figure 13- Répartition des malades d’hépatite B selon le sexe et les zones
4.2.- Discussion
Il est connu que le foie représente un organe cible au cours de la maladie hépatique,
son atteinte peut être multifactorielle, par fois intriquée avec même un effet potentialisation,
qui aggrave la dégradation de la fonction hépatique et aboutit à une insuffisance
hépatocellulaire grave, voire fatale. La présente étude recherche une méthode pour surveiller
d’une manière continue la fonction hépatique par le dosage des transaminases sérique, ce
marqueur peut renseigner sur l’importance de cette atteinte et orienter dans la recherche
étiologique.
Sur les 120 patients, 40% donc un tiers présente un taux élevé de GOT, ce qui
représente une proportion importante parmi les malades suivis. La comparaison des résultats
de dosage de la GOT sérique selon le sexe a montré qu’il n y a pas une différence
significative entre l’élévation des transaminases sériques entre les deux sexes ce qui est
pourcentage
zones
Chapitre IV: Résultat et déscution
46
confirmé par ARNAL et GIROT (2000). La répartition des taux sériques de la GOT selon
l’âge des patients a montré que plus l’âge avance plus le taux sérique et la GOT est élevé.
Ceci s’expliqué par le fait que le patient hépatique reçoit d’autant plus de transfusion
sanguines qu’il avance dans l’âge, et ces transfusions répétées peuvent être sources de
complications hépatiques à savoir hépatite B et C et hémochromatose responsable de
l’augmentation des transaminases en particulier lorsqu’il y a association des deux (BACHIR
et BEAUVAIS, 1992).
La recherche étiologique effectuée pour les patients ayants des valeurs pathologiques
élevées de GOT sérique a montré qu’effectivement ces patients souffrent de différentes
atteintes hépatiques, il y a 56.25% qui ont une hépatite B, 10.41% qui on une hépatite C,
4.16% qui on une hémochromatose. 12.49% ont une toxicité hépatique due aux médicaments.
Il y a 6.24% qui présente une lithiase biliaire ou c.v.o.
Il a été montré que la consommation de médicaments hépatotoxiques (antalgiques,
anti-inflammatoires non stéroïdiens, morphine, hyréa …) entraîne une augmentation variable
des transaminases et qu’il existe certainement une relation dose-dépendante. Néanmoins la
recherche étiologique a été négative chez 10 patients des taux de GOT modérément élevés.
Cette situation semble en rapport avec des crises hépatiques transitoires ou un syndrome de
bile épaisse, ou une prise médicamenteuse non précisée.
Conclusion Générale
48
Les transaminases sont des marqueurs biologiques, dont le dosage est simple,
reproductible et facile à interpréter. Elles peuvent être un paramètre qui oriente vers une
atteinte hépatique ; mais également le suivi de ces malades. Toute fois leur augmentation peut
être transitoire, lors d’une crise vaso-cclusive ou une hépatite virale aigue, ou céder à l’arrêt
d’un médicament toxique.
La constatation d’un taux constamment élevé doit amener à une recherche étiologique
notamment une hémochromatose ou une hépatite virale post-transfusionnelle ; mais
également la recherche d’une cause en rapport avec la maladie notamment une hépatite B.
Le dosage régulier des transaminases au centre d’hématologique de l’hôpital
MOHAMED BOUDIAF à Ouargla a permis de dépister un certain nombre d’étiologie. Cette
étude statistique et analytique montre la possibilité d’une surveillance itérative et régulière de
la fonction hépatique par le dosage des transaminases. La vulgarisation de la technique
méconnue auprès du public de la localité de Ouargla est recommandée pour ce type
pathologie. Ceci permet d’éviter un problème de cette santé publique demeurant endémique
pour la région.
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Annexe
Annexe 1 : Répartition de l’hépatite B dans le monde :( www.chu-rouen.fr)
Annexe 2 : Virus de l’hépatite B : (fr.encarta.msn.com)
Annexe 3: La structure du virus de l’hépatite B : (www.hepnet.com)
Annexe
Annexe 4: Recueil des résultats.
Mois Patients Sexe Age GOT GPT Mars 1 H 28 12 8 2 F 20 10 7 3 H 51 80 125 4 H 46 20.1 32.5 5 F 18 30.2 20.01 6 H 35 108.1 57.7 7 H 45 98.2 68.9 8 F 30 15 20 9 H 53 30 21 10 H 40 92 115 11 F 8 4 16 12 F 25 134 109 13 F 45 170 103 14 H 17 7 06 15 H 24 199 123 16 H 22 109 74 17 H 28 273 181 18 H 27 656 540 19 H 40 703 1158 20 H 25 99 240 Avril 21 F 11 42 28 22 F 39 40 17 23 H 18 24 18 24 F 54 854 871 25 H 24 51 34 26 H 45 40 38 27 F 15 7 18 28 F 60 60 70 29 H 23 121 170 30 F 36 12 8 31 H 43 28 14 32 F 17 17 30 33 H 40 211 141 34 F 42 19 23 35 F 43 20 17 36 H 47 06 23 37 F 20 127 136.1 38 H 43 28 37 39 H 57 182 103 40 F 18 57 80 Mai 41 F 12 16 20 42 H 43 23 28 43 H 15 32 38 44 F 7 31 36 45 F 19 27 30 46 F 30 26 32
Annexe
47 H 47 19 24 48 H 14 53 84 49 F 60 30 40 50 F 37 10 28 51 H 25 12 22 52 F 23 30 40 53 H 65 12 27 54 F 44 134 118 55 F 10 36 27 56 H 26 172 132 57 F 24 130 142 58 F 15 47 63 59 H 21 525 293 60 H 45 37 26 Juin 61 H 25 27 31 62 H 55 10 17 63 H 14 16 20 64 F 23 20 24 65 H 23 10 12 66 F 12 10 14 67 F 7 13 18 68 F 28 22 24 69 F 48 107 89 70 H 16 36 39 71 F 20 12 15 72 F 21 20 22 73 F 5 10 12 74 F 13 20 25 75 F 22 10 11 76 F 35 16 13 77 F 14 14 11 78 H 26 15 20 79 H 28 19 23 80 F 18 150 175 Juillet 81 H 13 8 12 82 H 6 9 14 83 F 22 14 20 84 H 36 118 116 85 F 10 10 16 86 H 5 8 12 87 H 24 77 75 88 H 5 10 14 89 H 55 59 82 90 F 13 7 10 91 F 10 8 12 92 H 29 288 696 93 F 38 23 33 94 H 32 56 73
Annexe
95 H 45 138 93 96 F 17 31 32 97 H 52 10 5 98 H 30 54 85 99 H 27 5 33 100 F 7 5 18 Août 101 F 53 327 300 102 H 33 172 132 103 F 53 179 137 104 F 13 11 15 105 H 21 61 61 106 F 22 124 25 107 H 22 19 21 108 F 28 163 83 109 H 36 185 110 110 F 31 34 65 111 H 19 20 33 112 F 45 76 20 113 H 27 85 76 114 H 44 47 63 115 H 10 27 30 116 H 38 21 24 117 H 29 87 290 118 F 16 18 20 119 F 27 17 19 120 H 28 48 50
Annexe
Tableau 6: répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT :
≤40 (Ul/l) 40-100 (Ul/l) 100-200 (Ul/l) >200 (Ul/l)
Nombre 72 21 19 8
Pourcentage (%) 60 17.5 15.83 6.67
Tableau 7: Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT :
≤45 45-112.5 (Ul/l) 112.5-225Ul/l >225
Nombre 76 23 13 8
Pourcentage (%) 63.33 19.17 10.83 6.67
Tableau 8: Répartition des patients ayant les valeurs pathologiques de GOT selon l’age :
5-15 ans 15-25 ans 25-35 ans 35-45 ans 45-65 ans
Nombre 3 12 13 10 8
Pourcentage
(%)
6.25 25 27.08 20.83 16.66
Moyenne
(Ul/l)
47.33 180.17 110.76 178.72 231
Tableau 9: Répartition des patients ayant les valeurs pathologiques de GPT selon l'age:
5-15 ans 15-25 ans 25-35 ans 35-45 ans 45-65 ans
Nombre 2 13 13 9 8
Pourcentage
(%)
4.34 28.26 28.26 19.56 16.66
Moyenne
(Ul/l)
73.5 189.28 129.08 219.54 22.12