Soutenance de Thèse

Cédric BADOWSKI

le 20 Novembre 2007 à 14h30

à l’Amphithéâtre Boucherle (Faculté de Médecine-Pharmacie, La Tronche)

Rôle de la paxilline dans la dynamique des invadopodia, la dégradation de la matrice extracellulaire et la

transmigration des cellules BHK transformées avec l’oncogène v-Src

IINSTITUTNSTITUT AALBERTLBERT BBONNIOTONNIOTONTOGENESE ET ONCOGENESE MOLECULAIRESONTOGENESE ET ONCOGENESE MOLECULAIRES

Thèse préparée au sein de l’Equipe- Dynamique des Systèmes d’Adhérence et Différenciation- Institut Albert Bonniot INSERM/UJF 823-GRENOBLE I

RésuméLes cellules BHK transformées par l’oncogène v-Src forment des invadopodia qui s’organisent successivement sous forme de paquets, puis d’anneaux et enfin de ceintures d’invadopodia à la périphérie cellulaire. L’expansion des anneaux d’invadopodia est due à la néoformation d’invadopodia à la périphérie de l’anneau et au désassemblage simultané des invadopodia situés au centre de l’anneau. L’orthovanadate, inhibiteur de tyrosine phosphatases, facilite ce processus et génère des expansions très rapides indiquant une implication de phénomènes de phosphorylation sur tyrosine à la fois dans la formation des invadopodia à la périphérie et leur désassemblage au centre. La paxilline, une protéine hautement phosphorylée, responsable du désassemblage des adhérences focales, est également présente dans les invadopodia. Elle se localise préférentiellement au centre des anneaux au niveau des invadopodia en cours de désassemblage. Cette localisation particulière est due au contact privilégié des invadopodia du centre de l’anneau avec la matrice extracellulaire. Le recrutement de la paxilline au centre de l’anneau est suivi de sa phosphorylation sur les tyrosines 31 et 118. L’utilisation d’un mutant Y31F/Y118F non phosphorylable de la paxilline ralentit la dynamique des invadopodia, empêche la formation des anneaux et diminue la dégradation de la matrice extracellulaire et la transmigration cellulaire. En présence d’orthovanadate qui favorise l’expansion des anneaux, le mutant de la paxilline génère des anneaux très épais indiquant un défaut du désassemblage des invadopodia au centre de l’anneau. L’expression de la paxilline mutante Y31F/Y118F inhibe la phosphorylation de la MAP kinase Erk induite par l’orthovanadate et la rend donc inactive. L’utilisation d’un inhibiteur spécifique de Erk, le U0126, inhibe la protéase calpaine, stabilise la cortactine, substrat de la calpaine et génère des anneaux très épais en présence d’orthovanadate. Ainsi, le désassemblage des invadopodia au centre de l’anneau, processus indispensable à la formation et à l’expansion des anneaux, est médié par la phosphorylation de la paxilline sur les tyrosines 31 et 118, qui en retour active la MAP kinase Erk et la calpaine, responsable du clivage protéique des composants des invadopodia.