INSERM US012 CNRS UMS 3367 Aix Marseille Université 2012/10h-01-S1-2012_FIORE_CIPHE... · Bilan...
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Inserm Instituts thématiques
Institut national de la santé et de la recherche médicale
Frederic FIORE, PhD [email protected]
INSERM US012 CNRS UMS 3367
Aix Marseille Université
Archivage Distribution
Phénotypage Zootechnie
Validation de cibles Évaluation des risques
Mutagénèse
Éthique Bien être animal
R&D
Éducation Formation
Services à la recherche et l’industrie
KO-KI Booster Plate-forme IBISA d’exploration
des fonctions du système immunitaire de la souris
1 Module
de KO/KI Trangénèse
Cryopréservation Archivage
Décontamination par transfert d’embryons
Module de stabulation
EOPS (10 000 cages)
Exploration fonctionnelle du
système immunitaire de la
souris en conditions
A3/L3
2 3 4 5
Exploration fonctionnelle du
système immunitaire de la
souris Cytométrie et tri multi-
paramétrique
CIML Implémentation en continue
des panels d’anticorps
CIMTECH Anticorps
monoclonaux
Zone Laboratoire banalisé
Zone Animalerie EOPS
Zone Animalerie A3/L3
Zone Laverie
Zone Bureaux - Stockage
Zone Laboratoire banalisé
Zone Animalerie A3/L3
Zone Animalerie EOPS
Zone Laverie
Zone Bureaux - Stockage
Micro-injection
Biologie cellulaire
Chimères matures
Transmission + Géno-typage
F1
Contrôles sanitaires
3-5 mois 3 mois ~ 6-9 mois
2 w 7 w 5+2 w 4 w 4w ~ 6-9 mois
F1 matures Bio-mol Etude Projet
+ Stratégie
1 mois 1w
Livraison
Certification Iso 2001 de ce périmètre décembre 2012
Knock-out Knock-out conditionnel Knock-in
d’une mutation ponctuelle d’une étiquette Tag à des fins d’analyses biochimiques Tag de protéines fluorescentes Du récepteur humain à la toxine diphtérique
Knock-in entraînant la constitution d’un allèle complexe et multi-analytique Combinatoire entre : protéines fluorescentes + récepteur humain à la toxine
diphtérique Tag à des fins d’analyses biochimiques + protéines fluorescentes
+ récepteur humain à la toxine diphtérique (à venir)
R415
1 2 3
Start Stop
R415A
1 2 3
Start Stop
N
R415X
1 2 3
Start Stop
N
Stop
1 2 3
Start Stop
1 2 3
Start Stop
TdT IRES2
Stop
1 2 3
Start Stop Stop
+ N N
N
N
N
TEAL YPET
Neptune
TdT EGFP
(à venir)
TEAL YPET
Neptune
EGFP
(à venir)
N
N
eYFP eYFP
3’UTR
3’UTR 3’UTR
1 2 3
Sart Stop
1 2 3
Start Stop
hDTR IRES2
Stop
+ N N
+ DT-A
Mort cellulaire
3’UTR
3’UTR
1 2 3
Stop
1 2 3
Start Stop
FP IRES2
+ N
C
+ N
+ DT-A
Mort cellulaire Suivi cellulaire
Stop
hDTR 2A Linker
3’UTR
3’UTR
1 2 3
Stop
1 2 3
Start Stop
3’UTR
3’UTR Stop
Tag
N Tag de très haute affinité qui permet l’analyse de l’intéractome protéique en condition stœchiométrique via la spectrométrie de masse
Purification des complexes
Start
P1 P2
P3
1 2 3
Stop
1 2 3
Start
FP IRES2
Stop
3’UTR
3’UTR Stop
Tag
Suivi de l’expression par émission de fluorescence + signalosome en condition stœchiométrique via spectrométrie de masse
Purification des complexes
Start
N
P1 P2
P3
1 2 3
Stop
1 2 3
Start
FP IRES2
Stop
hDTR 2A Linker
3’UTR
3’UTR Stop
Tag
+ DT-A
Mort cellulaire
N
P1 P2
P3
Plus de 103 projets pris en charge depuis 2008
Module confiné BSL3
Module Immunophenotypage
Module « Cryo-préservation, Cohortes, Intégration
PHENOMIN» [email protected]
Micro-injection
Biologie cellulaire
Chimères matures
Transmission + Géno-typage
F1
Contrôles sanitaires
3-5 mois 3 mois ~ 6-9 mois
2 w 7 w 5+2 w 4 w 4w ~ 6-9 mois
F1 matures Bio-mol Etude Projet
+ Stratégie
1 mois 1w
Livraison
Module KOKI : [email protected]
Spécialisation en Cytométrie multi-paramétrique et
Développement de la Cytométrie de masse
Bilan hématologique complet Immunophenotypage exhaustif- analyse multiparamétrique Réponse immunitaire – standard et inflammatoire L'activité génique par l'expression d'un gène rapporteur Tri des différents populations des cellules immunitaires Cytometrie de masse R&D Réponse immunitaire –conditions infectieuse (BSL3) Virus, bactérie Tri des cellules infectées Bio-imaging –ex vivo, in vivo Imagerie 3D à haute résolution de tissus vivants Imagerie dynamique en temps réel de cellules vivantes normales ou infectées Microdissection- sélection d’une population ou d’une région cellulaire d’intérêt R&D
CYTO
BSL3
CELPHEDIA French national technological network for
integrative and syntetic biology
INFRAFRONTIER European infrastructure
for phenotyping, archiving and
distribution of mouse models
INTERNATIONAL MOUSE PHENOTYPING
CONSORTIUM 6 countries, 15 research
institutes
PHENOMIN French nationale infrastructure for
phenogenomics
Boissonnas, A., Scholer-Dahirel, A., Simon-Blancal, V., Pace, L., Valet, F. Kissenpfennig, A., Sparwasser, T., Malissen, B., Fetler, L. and Amigorena, S., Foxp3+ T cells induce perforin-dependent dendritic cell death in tumor-draining lymph nodes. Immunity. 32: 266-278.
Guilliams, M., Crozat, K., Henri, S., Tamoutounour, S., Grenot, P., Devilard, E., de Bovis, B., Alexopoulou, L., Dalod, M. and Malissen, B., Skin-draining lymph nodes contain dermis-derived CD103(-) dendritic cells that constitutively produce retinoic acid and induce Foxp3(+) regulatory T cells. Blood. 115: 1958-1968.
Henri, S., Poulin, L. F., Tamoutounour, S., Ardouin, L., Guilliams, M., de Bovis, B., Devilard, E., Viret, C., Azukizawa, H., Kissenpfennig, A. and Malissen, B., CD207+ CD103+ dermal dendritic cells cross-present keratinocyte-derived antigens irrespective of the presence of Langerhans cells. J Exp Med. 207: 189-206.
Komatsu, N., Mariotti-Ferrandiz, M.E., Wang, Y., Malissen, B., Waldmann, H., and Hori, S. (2009). Heterogeneity of natural Foxp3+ T cells: a committed regulatory T-cell lineage and an uncommitted minor population retaining plasticity. Proc Natl Acad Sci U S A 106, 1903-1908.
Kissenpfennig, A., and Malissen, B. (2006). Langerhans cells--revisiting the paradigm using genetically engineered mice. Trends Immunol 27, 132-139.
Prinz, I., Sansoni, A., Kissenpfennig, A., Ardouin, L., Malissen, M., and Malissen, B. (2006). Visualization of the earliest steps of gammadelta T cell development in the adult thymus. Nat Immunol 7, 995-1003.
Près de 50 publications réalisées par les utilisateurs de la plate-fome IBISA « KI/KO booster » (l'embryon de CIPHE)
Inserm Instituts thématiques
Institut national de la santé et de la recherche médicale
Partenariats, collaborations et soutiens
Dr Bernard Malissen –Directeur du CIPHE [email protected] Dr Ana Zarubica – Directrice des opérations du CIPHE, COO [email protected] Dr Frederic Fiore - Responsable du module KO/KI « Création de
lignées de souris génétiquement modifiées » [email protected] Dr Marie Malissen – Responsable des modules
« Immunophenotypage » « Cryo-préservation, Cohortes, Intégration PHENOMIN » [email protected] Dr Jean-Pierre Gorvel – Responsable du module « Infectiologie BSL3 » [email protected]