Comment obtenir une tomate résistante à

l’écrasement?

Avant de répondre à la question, sache que l’enzyme polygalacturonase (PG) joue un rôle dans la sensibilité des tomates à l’écrasement.

Si on diminue la quantité de cette enzyme dans les cellules de tomates, celles-ci seraient plus résistantes.

Mais comment faire?

Nous allons voir plus loin toutes les étapes qui mènent à la production des tomates résistantes à l’écrasement.

Il faut diminuer la quantité de PG dans les cellules en inhibant son gène par son ARN anti-sens. =

ARN PG

anti-sens

Étape 1Cloner l’ARN anti-sens de la PG dans le MSC.

Vecteur binaire

Sais-tu comment transférer le vecteur binaire dans les cellules de tomates?

L’introduire directement dans Agrobacterium?

En fait, non! Il faut passer par la bactérie E.coli qui nous sert d’intermédiaire.

Sais-tu comment s’appelle la technique utilisée pour ça?

???

???

Étape 2On transfert le vecteur binaire dans la bactérie E.coli par trans- formation.

Transformation

Bactérie E.coli

Sais-tu comment on fait la sélection des bactéries E.coli transformées?

Pousser les bactéries sur un milieu avec un antibiotique?

Et oui! Le vecteur binaire possède un gène de résistance à un antibiotique et seulement les bactéries transformées seront résistantes.

Sélectionner

le gène par

PCR?

Étape 3Transfert du vecteur binaire de E.coli vers Agrobacterium par la conjugaison entre les deux bactéries.

Et c’est la bactérie Agrobacterium qui transfert le vecteur dans les cellules de plantes…

Étape 4Découper une feuille d’un plant de tomate et déposer les morceaux dans un pétri d’agar nutritif.

Étape 5

Ensuite, on infecte ces

cellules avec une

solution contenant

Agrobacterium.

Les cellules brisées par le découpage se

dédifférencient et redeviennent des cellules

embryonnaires.Merci!!!

Mais comment fonctionne le

gène anti-sens?

Gène PG anti-sens

Gène PG normal

ARN PG anti-sens

ARN PG normal

L’ARN PG anti-sens

s’hybride avec l’ARN PG

naturel pour ainsi

bloquer la traduction et

donc empêcher la

synthèse des protéines

PG.

Et comme il n’y a plus de protéine PG, les tomates transgéniques sont maintenant résistante à l’écrasement!

???

???

Malheureusement, les tomates transgéniques ne sont pas plus résistantes à

l’écrasement.

Et vous, savez vous pourquoi???

Sais-tu pourquoi?

???

??????

???

Toutefois, les cellules expriment bien l’ARN anti-sens et il y a moins de protéines PG

formées.

Mais la PG n’est sans

doute pas la seule

enzyme impliquée dans

le processus de

mûrissement.

Vous saviez qu’Agrobacterium est grandement utilisée en biotechnologie?

Résistance

aux

insectes

Résistance aux virus

Manipulation génétique

des pigments

Résistance aux herbicides

Autres…

Stéphanie Roy

Cours EDU 7492

UQAM18 octobre 2003