REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE D’ORAN 1 Ahmed BEN BELLA
Année universitaire 2016/2017
FACULTE DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE
DEPARTEMENT DE BIOLOGIE
LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE APPLIQUEE
THESE DE DOCTORAT EN MICROBIOLOGIE
Intitulée
Présentée par:
Mr SI MOHAMMED Abdesselem
Devant les membres de jury :
Président : Mr KIHAL M. Professeur (Université d’Oran 1 Ahmed BEN BELLA)
Encadreur : Mme HAMINI N. Maître de conférences A (Université d’Oran 1 Ahmed BEN BELLA)
Examinateur : Mme SADKI K. Professeur (Université d’Oran 1 Ahmed BEN BELLA)
Examinateur : Mr BENALI M. Professeur (Université Djillali Liabes de Sidi Bel Abbès)
Examinateur : Mr YOUCEF BENKADA M. Professeur (Université Abdelhamid Ibn Badis de Mostaganem)
Examinateur : Mr BEKADA A.M.A. Professeur (Centre universitaire El Wancharissi de Tissemsilt)
Caractérisation et lutte biologique vis-à-vis de Fusarium oxysporum
SOLOTextboxTHESE DE DOCTORAT ES SCIENCES
OPTION : MICROBIOLOGIE
Résumé
Fusarium oxysporum est un champignon tellurique ayant une grande diversité
génétique, écologique et une pathogénicité vis-à-vis des espèces végétales cultivées à intérêt
économique. En effet certaines souches pathogènes de F. oxysporum sont responsables de
maladies telles que la flétrissure et la pourriture des racines et du collet chez des plantes hôtes.
Deux formes spéciales sont inféodées à la tomate : F. oxysporum f.sp. lycopersici (FOL)
responsable de la flétrissure fusarienne et F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici (FORL)
responsable de la pourriture des racines et du collet.
Cette étude concerne 27 souches isolées à partir des tiges, des racines et des collets de
plantes de tomate infectées. Les isolats ont été identifiés à l’aide de leurs caractères
morphologiques et du séquençage de leur facteur d’élongation 1-alpha (TEF) en se servant
des amorces ef1 et ef2 suivi d’une série de PCR pour déterminer la forme spéciale.
23 souches appartiennent à l’espèce Fusarium oxysporum, trois souches à l’espèce
Fusarium solani et une seule à l’espèce Fusarium redolens.
Des plantules de tomate ont été utilisées pour mettre en évidence la pathogénicité des
isolats. Le test du pouvoir pathogène a révélé que vingt deux isolats de F. oxysporum sont
pathogènes pour la tomate et ont causés des symptômes de pourriture des racines et du collet
typique de la forme spéciale F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici tandis qu’un isolat
initialement identifié comme étant un F. oxysporum n’a causé aucun symptôme et ainsi, il est
considéré comme non pathogène et par conséquent aucune forme spéciale ne peux lui
attribuée.
Enfin, le test in vitro de l’activité antifongique des huiles essentielles extraites à partir
des feuilles de Juniperus phoenicea avec un rendement de 0.21% a montré que tous les isolats
sont sensibles à ces huiles avec un taux d’inhibition proportionnel à la concentration.
Mots clés : Fusarium oxysporum, tomate, facteur d’élongation, PCR, pathogénicité, huiles
essentielles, Juniperus phoenicea.
Abstract
Fusarium oxysporum is an ubiquitous soil-borne fungus, having a high genetic and
ecological diversity with the potential to cause diseases of many crop species of economic
interest. Indeed, some strains of F. oxysporum known pathogens generate common diseases
such as wilting, root and crown rot on host plants. Two formae speciales are confined to the
tomato: F. oxysporum f.sp. lycopersici (FOL) causing Fusarium wilt, while F. oxysporum
f.sp. radicis-lycopersici (FORL) causes Fusarium crown and root rot.
The study included 27 strains isolated from the stems, crown and roots of infected
tomato plants; to confirm the identity of the fungus, the isolates were identified using analysis
based on morphological criteria and sequencing of the translation elongation factor 1-alpha
(TEF) gene using ef1 and ef2 primers followed by series of PCR to determine the forma
specialis. Twenty three strains belonged to F. oxysporum, three strains to F. solani, and one
strain to F. redolens.
Tomato seedlings were tested to confirm the pathogenicity of the isolates tested.
Pathogenicity test confirmed that twenty two Fusarium oxysporum isolates were pathogenic
on tomato and produced crown and root rot typical of F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici
forma specialis, while one strain initially identified as Fusarium oxysporum did not induce
disease symptoms and is considered as non-pathogenic. Additionally, no symptoms of
Fusarium wilt were observed at all; therefore no strains can be affiliated to F. oxysporum f.sp.
lycopersici forma specialis.
Finally, the in vitro test of the antifungal activity of essential oils extracted from the
leaves of Juniperus phoenicea with a yield of 0.21% showed that all isolates are sensitive to
these oils with an inhibition rate proportional to the concentration.
Keywords : Fusarium oxysporum, tomato, elongation factor, PCR, pathogenicity, essential
oils, Juniperus phoenicea.
الملخص
حىاجذا و انخً حخمٍض بخىىع وساثً و بٍئً كبٍشاألكثشمه انفطشٌبث انخشابٍت
. اقخصبدٌتأهمٍتقذسة عهى انخسبب فً أمشاض نهكثٍش مه انىببحبث انمضسوعت راث ببإلظبفت إنى ال
انجزوس عىذ انممشظت حسبب انزبىل و االظمحالل و حعفه بعط سالالث إن
.انىببحبث انخً حؤوٌهب
انخً حسبب : انطمبغم عشظت نشكهٍه مه هزي انسالنت
. انخً حسبب حعفه انجزوس انزبىل و االظمحالل و
حم ححذٌذ هىٌت حٍث مه سٍقبن و جزوس وببحبث غمبغم مصببتمسخخشجت سالنت 27هزي انذساست حخص
و انمششع انمششع بىاسطت أنفب- 1 انمىسفىنىجٍت و ححهٍم معبمم انخطبول انسالالث بىاسطت انخصبئص
. نهكشف عه شكم انسالالثحفبعم انبىنٍمٍشاص انمخسهسم ببإلظبفت إنى سهسهت مه
سالالث حىخمً نهىىع 3, نهىىع حبٍه أوهب حىخمً سالنت23
. بٍىمب سالنت واحذة حىخمً نهىىع
22 حبٍه مه خالل انىخبئج أنوببحبث انطمبغم اسخعمهج نهكشف عه انقذسة انممشظت نهسالالث حٍث
حسببج فً أعشاض حعف انجزوس انممٍضة نهشكم سالنت حىخمً نهىىع
انىىع نم حخسبب فً أي مه وفس بٍىمب حبٍه أن سالنت مه
.األعشاض و اعخبشث أوهب غٍش ممشظت
اخخببس انفعبنٍت انمعبدة نهفطشٌبث نهضٌج األسبسٍت نهعشعش انفٍىٍقً , أخٍشا
فعبنٍت انضٌج األسبسٍت عهى كم انسالالث ورنك بىسبت حثبٍػ مخضاٌذة مع صٌبدة ببنمئت بٍه0,21 بمشدود قذسي
. انخشكٍض
,حفبعم انبىنٍمٍشاص انمخسهسم ,معبمم انخطبول, انطمبغم , : الكلمات المفتاحية
.,انضٌج األسبسٍت, انقذسة انممشظت
Fusarium oxysporum
Fusarium oxysporum
F. oxysporum f.sp. lycopersici (FORL)
F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici (FORL)
EF1
EF2
Fusarium oxysporum Fusarium solani
Fusarium redolens
Fusarium oxysporum
F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici (FORL)
Juniperus phoenicea
Fusarium oxysporum
Juniperus phoenicea
Liste des abréviations
°C: degré Celsius
µL : microlitre
µm : micromètre
ADN : acide désoxyribonucléique
AFNOR : association française de normalisation
ANOVA : analyse de la variance
ATB : antibiotiques
BET : Bromure d'éthidium
bp : paire de bases
CLA : carnation leaf agar
cm : centimètre
EDS : eau distillée stérile
f.sp : forme spécial
FAO : Food and Agriculture Organization of the United Nations
FOL : Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici
FORL : Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici
g : gramme
HE : huile essentielle
MADR : Ministère de l'Agriculture et du Développement Rural
min : minute
mL : millilitre
MML : milieu minimum liquide
MEGA : Molecular Evolutionary Genetics Analysis
NCBI : National Center for Biotechnology Information
PCR : polymerase chain reaction( L'amplification en chaîne par polymérase)
PDA : Potato Dextrose Agar
PG1 : endo-polygalacturonase
PGX4 : exo-polygalacturonase
pH : potentiel Hydrogène
TE : Tris-EDTA
TEF : Translation elongation factor-1α
TI : taux d’inhibition
UV : ultra violet
https://fr.wikipedia.org/wiki/Bromure_d%27%C3%A9thidium
Liste des figures
Figure 01. Vue générale d’une plante de tomate arrivée à maturité ......................... p05
Figure 02. Les feuilles de tomate. ........................................................................... p06
Figure 03. La fleur de tomate .................................................................................. p06
Figure 04. Les fruits de tomate ............................................................................... p06
Figure 05. Les graines de tomate ............................................................................ p06
Figure 06. Jaunissement et flétrissement des feuilles basses .................................... p14
Figure 07. Coloration brun sombre visible en coupe longitudinale .......................... p14
Figure 08. Coloration brun sombre visible en coupe transversale ............................ p14
Figure 09. Chancre brun foncé du collet ................................................................. p15
Figure 10. Brunissement des vaisseaux des parties basses de la tige ........................ p15
Figure 11. Système racinaire réduit et pourri .......................................................... p15
Figure 12. Cycle de vie du Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici ........................... p24
Figure 13. La vue générale du Genévrier de Phénicie ............................................. p27
Figure 14. Les feuilles du Genévrier de Phénicie. ................................................... p27
Figure 15. Les fleurs du Genévrier de Phénicie ....................................................... p28
Figure 16. Les fruits du Genévrier de Phénicie ....................................................... p28
Figure 17. La localisation des régions d’échantillonnage sur carte .......................... p31
Figure 18. Isolement à partir des fragments de tige ................................................. p32
Figure 19. Isolement à partir des fragments de collets ............................................. p32
Figure 20. Isolement à partir des fragments de racines ............................................ p32
Figure 21. La technique des suspensions-dilutions .................................................. p34
Figure 22. La culture monospore ............................................................................ p36
Figure 23. La technique d'identification CLA ......................................................... p38
Figure 24. La carte de la région du TEF-1α amplifiée par les amorces EF1 et EF2. p40
Figure 25. La méthodologie choisie pour la caractérisation moléculaire des isolats p45
Figure 26. Les principales étapes du test du pouvoir pathogène. ............................. p48
Figure 27. Les feuilles séchées de Juniperus phoenicea ........................................... p50
Figure 28. L’hydrodistillateur de type Clevenger .................................................... p50
Figure 29. Les différentes concentrations testées .................................................... p52
Figure 30. Le dépôt du disque au centre de la boîte de Pétri. ................................... p52
Figure 31. La méthode de mesure des diamètres D1 et D2 ...................................... p52
Figure 32. Les monospores en germination ............................................................. p54
Figure 33. La culture pure à partir des monospores après incubation ....................... p54
Figure 34. La variabilité de la couleur du thalle ...................................................... p56
Figure 35. Les différentes structures produites par l’isolat IB1902 .......................... p57
Figure 36. Electrophorèse des produits de l’amplification du TEF .......................... p59
Figure 37. La séquence EF1 obtenue pour l’isolat IB19509 .................................... p60
Figure 38. L’assemblage des séquencee EF1 et EF2 pour l’isolat IB19509 ............. p61
Figure 39. Le résultat de la recherche sur la base de données Fusarium-ID ............. p64
Figure 40. Le résultat de la recherche sur la base de données NCBI ........................ p65
Figure 41. L’arbre phylogénétique montrant la relation entre les 27 isolats. ............ p66
Figure 42. Electrophorèse des produits de l’amplification des gènes pg1 et pgx4. ... p67
Figure 43. Electrophorèse des produits de l’amplification du gène SIX. .................. p67
Figure 44. Une plantule trempée dans du MML (plantule saine) ............................. p71
Figure 45. Les symptômes de pourriture des racines et du collet sur une plantule
inoculée avec l’isolat IB19502 ................................................................................ p72
Figure 46. Les symptômes de pourriture des racines et du collet ............................. p73
Figure 47. La pourriture totale du système racinaire et du collet d'une plantule
inoculée avec l'isolat IB19526 ................................................................................ p74
Figure 48. Les symptômes observés chez des plantules inoculées
avec les différents isolats ........................................................................................ p75
Figure 49. L'absence de symptômes chez la plantule inoculée par l'isolat IB19508 . p76
Figure 50. Le ré-isolement à partir des racines ........................................................ p77
Figure 51. Le ré-isolement à partir du collet ........................................................... p77
Figure 52. Le ré-isolement à partir des tiges ........................................................... p77
Figure 53. L’effet de l'HE de J. phoenica sur l'espèce F. redolens .......................... p82
Figure 54. L’effet de l'HE de J. phoenica sur l'espèce F. oxysporum ....................... p82
Figure 55. L’effet de l'HE de J. phoenica sur l'espèce F. solani .............................. p82
Liste des tableaux
Tableau 01. La valeur nutritionnelle moyenne pour 100 g de tomate crue ............... p07
Tableau 02. La production annuelle de tomate par pays en milliers de tonnes ......... p09
Tableau 03. Les principales maladies fongiques de la tomate .................................. p10
Tableau 04. La composition du master mix pour la PCR ......................................... p41
Tableau 05. La composition du master mix pour la PCR ......................................... p43
Tableau 06. La composition du master mix pour la PCR ......................................... p44
Tableau 07. Les différentes dilutions de l'huile essentielle ...................................... p51
Tableau 08. Les lieux, organes et années d’isolement ............................................. p55
Tableau 09. L’identité des isolats sur la base des séquences TEF ........................... p62
Tableau 10. Les résultats du test du pouvoir pathogène ........................................... p70
Tableau 11. Les différents taux d’inhibition de la croissance des isolats ................. p79
Tableau 12. Les moyennes des taux d’inhibition en fonction des concentrations ............ p80
Tableau 13. Les résultats du test ANOVA ............................................................. p80
TABLE DES MATIERES
Introduction ............................................................................................................ p01
CHAPITRE I : Etude Bibliographique
La plante hôte
1. L’origine de la tomate........................................................................................ p03
2. La description botanique .................................................................................... p03
2.1. Le feuillage ......................................................................................... p03
2.2. Les fleurs ............................................................................................ p03
2.3. Le fruit ................................................................................................ p04
2.4. La tige ................................................................................................. p04
2.5. La racine ............................................................................................. p04
2.6. Les graines .......................................................................................... p04
3. La position taxonomique ................................................................................... p04
4. La valeur nutritionnelle...................................................................................... p07
5. La culture de la tomate ...................................................................................... p08
5.1. La culture de la tomate dans le monde ................................................. p09
5.2. Les maladies de la tomate .................................................................... p09
La pathologie
1. La flétrissure fusarienne (Fusarium wilt) ........................................................... p11
1.1. Les symptômes externes de la maladie ................................................ p11
1.2. Les symptômes internes de la maladie ................................................. p12
2. La pourriture des racines et du collet (Fusarium crown and root rot) .................. p12
2.1. Les symptômes externes de la maladie ................................................ p12
2.2. Les symptômes internes de la maladie ................................................. p13
3. Les mécanismes de défense ............................................................................... p16
3.1. Les barrières mécaniques ..................................................................... p16
3.2. Les barrières biochimiques .................................................................. p16
3.2.1. Les polyphénoloxydases ....................................................... p16
3.2.2. Les phytoalexines.................................................................. p16
4. Les moyens de lutte ........................................................................................... p16
4.1. La lutte culturale ................................................................................. p16
4.2. La lutte physique ................................................................................. p17
4.3. La lutte chimique................................................................................. p17
4.4. La lutte intégrée .................................................................................. p18
4.5. La lutte biologique .............................................................................. p18
4.6. La lutte génétique ................................................................................ p19
Le pathogène
1. Généralités sur le genre Fusarium...................................................................... p20
2. Généralité sur l’espèce Fusarium oxysporum ..................................................... p21
3. Caractères culturaux de l’espèce F. oxysporum .................................................. p21
3.1. Caractères sur milieu CLA .................................................................. p21
3.2. Caractères sur milieu PDA ................................................................. p22
4. La pathogénicité, les formes spéciales et les races ............................................. p22
5. Le cycle de vie de F. oxysporum........................................................................ p23
6. La position taxonomique de l’espèce F. oxysporum .......................................... p25
La plante médicinale
1. L’origine du genévrier de Phénicie .................................................................... p26
2. La description botanique .................................................................................... p26
3. La position taxonomique ................................................................................... p26
4. La répartition du genévrier de Phénicie en Algérie ............................................. p29
5. L’intérêt économique et écologique ................................................................... p29
CHAPITRE II : Matériel et méthodes
1. L’isolement de l’agent pathogène ...................................................................... p30
1.1. L’isolement à partir des fragments de tiges .......................................... p30
I.2. L’isolement à partir des fragments de racines ....................................... p30
1.3. L’isolement à partir du sol ................................................................... p33
1.3.1. La technique directe .............................................................. p33
1.3.1.1. Les suspensions-dilutions (dilution plates) .............. p33
2. La purification ................................................................................................... p35
2.1. Le repiquage successif ......................................................................... p35
2.2. La culture monospore .......................................................................... p35
3. L’identification morphologique ......................................................................... p37
3.1. L’étude macroscopique ....................................................................... p37
3.2. L’étude microscopique ........................................................................ p37
4. L’identification moléculaire ............................................................................... p39
4.1. L’extraction de l’ADN ........................................................................ p39
4.2. L’identification de l’espèce F. oxysporum par le séquençage de la région
TEF-1α ..................................................................................................... p40
4.2.1. L’amplification par PCR de la région TEF-1α ....................... p40
4.2.1.1. Les séquences d’amorces utilisées........................... p40
4.2.1.2. Les conditions de la PCR ........................................ p41
4.2.1.3. Le programme d'amplification du thermocycleur .... p41
4.2.2. La vérification des produits de la PCR par électrophorèse sur gel
d’agarose ....................................................................................... p41
4.2.3. Le séquençage des produits de la PCR .................................. p41
4.3. L’identification de F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici .................. p42
4.3.1. L’amplification par PCR des séquences partielles des pg1 et
pgx4................................................................................................ p42
4.3.1.1. Les séquences d’amorces utilisées........................... p43
4.3.1.2. Les conditions de PCR ............................................ p43
4.3.1.3. Le programme d'amplification du thermocycleur .... p43
4.3.2. La vérification des produits de la PCR par électrophorèse sur gel
d’agarose ....................................................................................... p43
4.4. L’identification de F. oxysporum f. sp. lycopersici .............................. p44
4.4.1. L’amplification par PCR du gène de la protéine SIX ............ p44
4.4.1.1. Les séquences d’amorces utilisées........................... p44
4.4.1.2. Les conditions de PCR ............................................ p44
4.4.1.3. Le programme d'amplification du thermocycleur .... p44
4.4.2. La vérification des produits de la PCR par électrophorèse sur gel
d’agarose ....................................................................................... p45
5. Le test du pouvoir pathogène ............................................................................. p46
6. L’essai in vitro de la lutte biologique ................................................................. p49
6.1. La collecte de la plante médicinale ...................................................... p49
6.2. L’extraction des huiles essentielles ...................................................... p49
6.3. Le calcul du rendement ...................................................................... p49
6.4. Le test de l’activité antifongique ......................................................... p51
6.4.1. Préparation des témoins négatifs ........................................... p51
6.4.2 Test de l’activité antifongique ................................................ p51
CHAPITRE II : Résultats et discussion
1. L’identification morphologique des isolats ........................................................ p53
1.1. La culture monospore .......................................................................... p53
1.2. L’étude macroscopique ....................................................................... p53
1.3. L’étude microscopique ........................................................................ p53
1.1. La culture monospore .......................................................................... p53
2. L’identification moléculaire des isolats .............................................................. p58
2.1. L’amplification par PCR de la région TEF-1α ..................................... p58
2.2. Le séquençage des amplicons obtenus ................................................. p58
2.3. L’arbre phylogénétique des souches identifiées ................................... p63
2.4. L’identification de la forme spéciale .................................................... p63
2.4.1. L’identification de la forme spéciale radicis-lycopersici ........ p63
2.4.2. L’identification de la forme spéciale lycopersici .................... p63
3. Le test du pouvoir pathogène ............................................................................. p68
4. L’essai in vitro de la lutte biologique ................................................................. p78
4.1. L’extraction des huiles essentielles ...................................................... p78
4.2. Le test de l’activité antifongique .......................................................... p78
4.3. L’analyse statistique ........................................................................... p80
Conclusion et perspectives .................................................................................... p83
Références Bibliographiques
Annexe 01
Annexe 02
Introduction
1
Les micro-organismes sont des êtres vivants microscopiques capables de vivre dans
différents milieux tels que l’eau, l’air et le sol. Ils développent des interactions avec leur
environnement et forment de véritables écosystèmes.
Le sol est le milieu favorable ou prolifère la grande majorité des microorganismes
avec une concentration de 109
bactéries et 106
spores de champignons par gramme de sol.
Parmi ces microorganismes, pullulent des champignons telluriques où l’espèce
ubiquitaire Fusarium oxysporum est présente dans tous les types de sols et sous différents
climats (Burgess, 1981).
Ce type de champignon mène une vie saprophyte dans le sol. Il fait partie des
champignons filamenteux développant un mycélium aérien sur le milieu de culture potato-
dextrose-agar (PDA) où il prend différentes couleurs allant du blanc au violet (Snyder et
Hansen, 1940).
Cette espèce fongique renferme des souches phytopathogènes responsables de
fusarioses chez de nombreuses espèces végétales d’intérêt économique et des souches non-
pathogènes qui ne causent aucune maladie.
Les formes pathogènes montrent une très grande spécificité d’hôte et par conséquent
elles sont regroupées en formes spéciales (f.sp.) selon l’espèce végétale parasitée (Armstrong
et Armstrong, 1981) d’ou, les souches appartenant à la forme spéciale lycopersici qui sont
pathogènes pour la tomate alors que les souches appartenant à la forme spéciale albedinis sont
pathogènes pour le palmier dattier.
Ces souches sont dites pathogènes car elles sont capables d’envahir les tissus internes
de la plante formant ainsi une association endophyte contrairement aux souches de F.
oxysporum non-pathogènes qui sont incapables de pénétrer les tissus vasculaires de la plante.
Dans certain cas la plante localise l’infection et met en place un mécanisme d’auto
défense tels que les thylloses qui empêchent l’intrusion du parasite en obstruant les tissus
conducteurs (Gao et al., 1995).
Deux formes spéciales différentes sont inféodées à la tomate : F. oxysporum f.sp.
lycopersici (FOL) qui provoque des trachéomycoses vasculaires et F. oxysporum f.sp. radicis-
lycopersici (FORL) qui engendre des pourritures au niveau des racines et du collet. Dans les
deux cas, la fusariose se traduit par un flétrissement de la plante pouvant aller jusqu’au
dessèchement des feuilles et la mort de la plante (Laterrot et al., 1988).
En Algérie, la culture de la tomate occupe une place privilégiée dans le secteur socio-
économique et elle considérée comme l’une des cultures prioritaires avec une superficie totale
avoisinant les 22646 hectares (FAO, 2014). Bien qu’estimée à 1065609 tonnes et 47.05 t/ha,
Introduction
2
la production reste inferieure comparée aux autres pays du pourtour méditerranéen, cela est dû
en partie à des maladies cryptogamiques telles que la telle que la fusariose.
Jadis, le seul moyen de lutte contre la fusariose était d’arroser les cultures avec du
bénomyl ou encore du bromure de méthyle, mais ces produits se sont avérés dangereux et peu
efficaces et ont été interdits par la suite.
Parallèlement à cette lutte chimique, les producteurs ont eu recours à des variétés de
tomates résistantes, essentiellement à la forme spéciale lycopersici, mais l’évolution génétique
de ce champignon à donner naissance à de nouvelles races capables de contourner les
résistances de ces variétés.
Pour mieux connaître ce parasite et son développement dans le but de le contrôler,
nous avons procédé en premier lieu à son isolement à partir de plantes de tomate atteintes de
fusariose et à sa purification en vue de l’identifier en utilisant à la fois ses caractéristiques
morphologiques et génétiques. Ces dernières ont été mises en évidence par le séquençage du
gène du facteur d’élongation 1-alpha (TEF) qui semble être toujours en simple copie chez le
genre Fusarium et montre un niveau élevé de polymorphisme chez les espèces étroitement
apparentées. Pour ces raisons le facteur d’élongation (TEF) reste un marqueur de choix et un
outil d’identification des espèces du genre Fusarium et par des series de réactions en chaîne
par polymérase (PCR) pour déterminer les deux types de formes spéciales F. oxysporum f.sp.
radicis-lycopersici (FORL) et F. oxysporum f.sp. lycopersici (FOL).
Pour mettre en évidence le pouvoir pathogène des souches isolées, il est nécessaire
d’effectuer des tests biologiques sur des plantes de tomates. En effet, ces types de tests vont
permettre de distinguer les souches pathogènes des souches non-pathogènes par observation
de symptômes sur des plantes de tomate préalablement inoculées par le pathogène. Ces tests
sont généralement réalisés sur plantes entières sous serres et sont lourds à mettre en œuvre,
pour cela nous avons opté pour un test miniaturisé et plus rapides.
Enfin, le patrimoine végétal de notre pays est caractérisé par sa richesse et sa diversité
dans les régions côtières, les massifs montagneux, les hauts plateaux, la steppe et les oasis
sahariennes où on y trouve plus de 3000 espèces végétales.
Ce patrimoine végétal est une source inépuisable de métabolites secondaires ayant des
propriétés biologiques très variées telles que l’activité antifongique qui pourrait constituer un
moyen de lutte biologique contre les champignons phytopathogènes.
Pour ces raisons, nous avons choisi le genévrier de Phénicie qui fait partie des plantes
médicinales et aromatiques pour extraire des huiles essentielles et tester in vitro leur pouvoir
inhibiteur sur la croissance des isolats de notre collection.
Etude Bibliographique La Plante hôte
3
1. L’origine de la tomate
La tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) est l’un des légumes les plus consommés
dans le monde. Originaire des Andes d’Amérique du sud, elle fut tout d’abord domestiquée au
Mexique, puis introduite en Europe en 1544. De là, sa culture s’est propagée en Asie du sud et
de l’est, en Afrique et au Moyen orient.
Parmi les noms communs utilisés pour désigner la tomate : tomate (Français et
espagnol), jitomate (Espagnol Mexicain), pomodoro (Italien), tomati (Afrique de l’ouest),
tomat (Indonésien), faan ke’e (Chinois).
Etymologiquement, le mot tomate est une déformation du mot inca Tomalt et le mot
Lycopersicum qui signifie en latin "Pêche de loup", appellation peu alléchante à laquelle on a
ajouté au XVIIIe siècle l'adjectif « esculentum » à cause des propriétés gustatives de ce
légume-fruit (Naika et al., 2005).
2. La description botanique
La tomate (figure 01) est une plante herbacée appartenant à la famille des Solanacées,
cette famille regroupe d’autres espèces qui sont également bien connues, telle que : la pomme
de terre, le tabac, le poivron, l’aubergine et de nombreuses plantes ornementales. La tomate
est généralement cultivée comme plante annuelle, elle peut atteindre une hauteur de plus de
deux mètres (Chaux et Foury, 1994).
2.1. Le feuillage
Les feuilles (figure 02) sont disposées en spirale de 15 à 50 mm de long et de 10 à 30
mm de large avec un pétiole mesurant entre 3 et 6 cm de long. Les folioles sont ovées à
oblongues, couvertes de poils glandulaires. Les grandes folioles sont parfois pennatifides à la
base.
2.2. Les fleurs
Les fleurs (figure 03) sont bisexuées, régulières de 1,5 et 2 cm de diamètre. Elles
poussent opposées aux feuilles ou entre elles. Le tube du calice est court et velu, les sépales
sont parfois persistants.
La corolle est constituée en général de six pétales qui peuvent atteindre une longueur
de 1 cm de couleur jaunes et courbées lorsqu’elles sont mûres.
L’androcée est formé de quatre étamines, les anthères ont une couleur jaune vif et
entourent le style qui a une extrémité stérile allongée.
Etude Bibliographique La Plante hôte
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Le gynécée dont l’ovaire est supère est formé de deux à neuf carpelles. En général la
plante est autogame, mais la fécondation croisée peut avoir lieu grâce aux abeilles et aux
bourdons qui sont les principaux pollinisateurs.
2.3. Le fruit
Le fruit de la tomate (figure 04) est une baie charnue, de forme globulaire ou aplatie
avec un diamètre de 2 à 15cm. Lorsqu’il n’est pas encore mûr, le fruit est vert et poilu. La
couleur des fruits mûrs varie du jaune au rouge en passant par l’orange. En général les fruits
sont ronds et réguliers ou côtelés.
2.4. La tige
La tige (figure 05) pousse jusqu'à une longueur de 2 m, elle est pleine et fortement
poilue et glandulaire. Le port de croissance varie entre érigé et prostré.
2.5. La racine
La plante de tomate possède une forte racine pivotante qui pousse jusqu'à une
profondeur de 50 cm ou plus, la racine principale produit une densité de racines latérales et
adventices (figure 06).
2.6. Les graines
Les graines (figue 07) sont nombreuses : en forme de rein ou de poire, elles sont
poilues, beiges, de 3 à 5 mm de long et de 2 à 4 mm de large. L’embryon est enroulé dans
l’albumen. Mille graines environ pèsent approximativement 2,5 à 3,5 g (Naika et al., 2005).
3. La position taxonomique (Rick et al., 1990)
Embranchement : Phanérogames
Ordre : Angiospermes
Classe : Dicotylédones
Sous-classe : Gamopétales
Famille : Solanacées
Genre : Lycopersicon
Espèce : esculuntum, pimpinellifolum, cheesmanii, hirsutum, perviflarum,
chmielewskii, peruviarum, pennelli
Etude Bibliographique La Plante hôte
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Figure 01. Vue générale d’une plante de tomate arrivée à maturité.
Etude Bibliographique La Plante hôte
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Figure 02. Les feuilles de tomate.
Figure 03. La fleur de tomate.
Figure 04. Les fruits de tomate.
Figure 05. Les graines de tomate.
Etude Bibliographique La Plante hôte
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4. La valeur nutritionnelle
La consommation des fruits de la tomate contribue à un régime sain et équilibré, ils
sont riches en minéraux, en vitamines, en acides aminés, en sucre ainsi qu’en fibres
alimentaires (tableau 01).
Les tomates rouges contiennent du lycopène, un anti-oxydant qui contribue
possiblement à la protection vis-à-vis des substances carcinogènes et que l'on retrouve à
raison de 30 mg dans 200 mL de sauce tomate.
Les tomates se consomment fraîches en salade, cuites dans des sauces, dans des
soupes ou dans des plats de viande ou de poisson. Il est possible aussi de les transformer en
purée, en jus et en ketchup (Naika et al., 2005).
Tableau 01. La valeur nutritionnelle moyenne pour 100 g de tomate crue (Bernardin, 1985).
Eléments Teneur
Eau 93 g
Matières organiques
Protéines 1 g
Glucides 4 g
Lipides 0,3 g
Fibres 1,2 g
Cellulose 0,6 g
Vitamines
Vitamine B1 0,09 mg
Vitamine B3 0,5 mg
Vitamine C 38 mg
Sels minéraux
Calcium 11 mg
Chlore 40 mg
Fer 0,6 mg
Potassium 280 mg
Magnésium 10 mg
Sodium 3 mg
Phosphore 27 mg
Soufre 11g
Etude Bibliographique La Plante hôte
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En outre, la tomate possède aussi quelques propriétés médicinales par exemple :
Un antibiotique (Feuilles) : chez les Incas d’Amérique du Sud et chez certaines tribus
en Nouvelle-Guinée, on utilise les feuilles fraîches pour guérir les plaies infectées.
Un anti-fatigue (Fruits) : la tomate fraîche ou le jus de tomate accélère la formation du
sucre dans le sang et apporte un regain d'énergie naturelle.
Elle est excellente pour la santé du foie (Fruits) : la tomate contient des traces
d'éléments anti-toxiques appelés chlorine qui permet de mieux filtrer les déchets de
l'organisme et le sulfure protège le foie contre certains engorgements.
La tomate est excellente pour contrecarrer les effets négatifs lorsqu'on a tendance à
manger trop gras en aidant le foie à dissoudre les graisses et à les éliminer plus
facilement.
Elle diminue l'hypertension (Fruits) : la tomate étant riche en potassium, des études
cliniques ont démontré qu'elle agit positivement sur les reins dans plusieurs cas : un
bon fonctionnement rénal permet de diminuer l'hypertension.
Elle soulage les coups de soleil (Fruits) : un remède miracle: une tranche de tomate
posée sur un coup de soleil pendant 15 minutes enlève l'effet de la brûlure, évite que la
peau pèle ou cloque (Naika et al., 2005).
5. La culture de la tomate
La culture de la tomate a plusieurs exigences écologiques :
La température : la tomate demande un climat relativement frais et sec pour fournir
une récolte abondante et de qualité. Cependant, la plante s’est adaptée à une grande
diversité de conditions climatiques, allant du climat tempéré vers le climat tropical
chaud et humide. La température optimale pour la plupart des variétés se situe entre 21
et 24°C. Les plantes peuvent surmonter un certain intervalle de températures, mais en-
dessous de 10°C et au-dessus de 38°C les tissus des plantes seront endommagés.
La lumière : l’intensité de la lumière affecte la couleur des feuilles, la mise à fruits et
la couleur des fruits.
L’eau et l’humidité : la tomate exige un arrosage abondant, le stress causé par une
carence en eau et les longues périodes arides font tomber les bourgeons et les fleurs et
provoquent le fendillement des fruits. Par contre, les averses très intenses et l’humidité
très élevée favorisent la croissance des moisissures et la pourriture des fruits.
Etude Bibliographique La Plante hôte
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Le sol : la tomate pousse bien sur la plupart des sols minéraux qui ont une bonne
capacité de rétention d’eau et une bonne aération. La tomate tolère modérément un
large intervalle de pH, mais pousse le mieux dans des sols dont la valeur du pH varie
entre 5,5 et 6,8 et où l’approvisionnement en éléments nutritifs est adéquat et suffisant.
Le choix des variétés est également une exigence pour la culture de la tomate, les
critères de sélection sont basés sur des caractéristiques telles que le type de fruit, la
forme de la plante, la vitalité, la résistance aux ravageurs et aux maladies, mais
également sur des facteurs liés au climat et à la gestion (Naika et al., 2005).
5.1. La culture de la tomate dans le monde
La tomate est la culture la plus répandue dans le monde après la pomme de terre
(Arbaoui, 1984). Selon les statistiques de l'organisation des Nations Unies pour l'alimentation
et l'agriculture (FAO), la production mondiale de tomates s'élevait en 2014 à 170,75 millions
de tonnes pour une superficie de 5,02 millions d'hectares, soit un rendement moyen de 33,98
tonnes à l'hectare. En Algérie, la production s’élevait en 2014 à 1065609 tonnes pour une
superficie de 22646 hectares, soit un rendement de 47.05 t/ha (tableau 02).
Tableau 02. La production annuelle de tomate par pays en milliers de tonnes (FAO, 2014).
Pays Production annuelle (x1000T)
Chine 50 664
Etats-Unis 12 574
Espagne 3 683
Tunisie 1 200
Algérie 1065
5.2. Les maladies de la tomate
De la levée et pratiquement jusqu'à la récolte, les cultures de la tomate sont sujettes à
de nombreuses maladies causées par divers agents pathogènes tels que : les virus, les
bactéries, les champignons, les nématodes et les insectes (Causse, 2000).
Les maladies dite fongiques (causées par les champignons) sont les plus fréquentes
(tableau 03), une infection fongique est souvent causée par des spores qui y ont germé puis
ont pénétré les tissus de la plante par le biais des stomates, des blessures ou parfois même
directement à travers la peau de la plante. Les filaments mycéliens se développent dans les
tissus, en tirent les éléments nutritifs et ils y exsudent des substances toxiques pour la plantes.
Etude Bibliographique La Plante hôte
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Les effets nocifs des moisissures se limitent à la zone contaminée mais il existe des
sortes de moisissures qui peuvent envahir les tissus vasculaires des plantes et peuvent se
propager à partir de là dans toute la plante c’est le cas du Fusarium oxysporum (Naika et al.,
2005).
Tableau 03. Les principales maladies fongiques de la tomate (Causse, 2000; Naika et al.,
2005).
Maladies Symptômes Pathogène responsable
Anthracnose Tâches plus ou moins circulaires de 1 cm
avec un centre noirâtre sur les fruits mûrs
Colletotrichum
coccodes
Mildiou
Légères tâches foncées avec un point
jaune en leur centre sont visibles sur les
feuilles ayant parfois un développement
centrifuge et centripète. Sur la face
inferieure des feuilles les tâches sont
blanches. Les fruits se couvrent de tâches
brunes et les feuilles flétrissent.
Phytophtora infestans
Verticilliose
Jaunissement en forme de V des feuilles
de bas en haut suivi d’un flétrissement
avec un léger brunissement des vaisseaux
après une coupe.
Verticillium albo-atrum
Alternariose
Tâches rondes et brunes avec des cercles
concentriques apparaissant sur les feuilles
avec un diamètre de 1,5 cm. Des
grosseurs peuvent apparaitre sur les tiges
et les feuilles. Les fleurs et les jeunes
fruits tombent.
Alternaria solani
Flétrissure fusarienne
Jaunissement des feuilles de bas en haut
avec apparition de racines avortées au bas
de la tige. Décoloration de la tige
commençant par un léger jaunissement
longitudinal évoluant en une bande jaune
plus marquée puis en une nécrose beige à
marron clair. Les vaisseaux à l’intérieur
de la tige brunissent.
F. oxysporum f.sp.
lycopersici
Pourriture des racines
et du collet
Brunissement des racines, de leur
cylindre central et des vaisseaux situés au
niveau du pivot et du collet et
flétrissement juste avant la cueillette.
Les feuilles hautes fanent avant les
feuilles basses avec une décoloration
jaune ou dorée. Les fruits n'ont pas leur
brillance normale.
F. oxysporum f.sp.
radicis-lycopersici
Etude Bibliographique La pathologie
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Du semis jusqu'à la récolte, la tomate peut être sujette à plusieurs maladies dont deux
maladies fusariennes différentes : la flétrissure fusarienne (Fusarium wilt) ou fusariose
vasculaire causée par la forme spéciale Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL) et la
pourriture des racines et du collet (Fusarium crown and root rot) causée par la forme spéciale
Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (FORL) (Armstrong et Armstrong 1981;
Steinkellner et al., 2005).
1. La flétrissure fusarienne (Fusarium wilt)
La flétrissure fusarienne (figure 06, 07, 08) est une maladie dévastatrice pour les
cultures de tomate partout dans le monde, elle est causée par F. oxysporum f.sp. lycopersici
(Walker, 1971).
Apparue pour la première fois dans les îles de la Manche vers 1895, la fusariose
vasculaire de la tomate sévit depuis de nombreuses années aux U.S.A, en Europe, au sud de
l’Italie et en Afrique du Nord (Walker, 1971 ; Latterot et al., 1988).
Ce champignon terricole qui pénètre dans la plante par les racines envahit les tissus
ligneux et provoque le jaunissement, la flétrissure puis la mort de la plante (Blancard, 1997).
Néanmoins, dans la mesure où il existe aujourd’hui de nombreuses variétés résistantes
au F. oxysporum f.sp. lycopersici, ce pathogène ne représente plus un grand danger pour la
culture de la tomate.
1.1. Les symptômes externes de la maladie
La flétrissure fusarienne évolue très rapidement, les parties des limbes touchés flétrissent
comme par manque d’eau, c’est le flétrissement rapide (Quick wilt). Les feuilles asséchées
gardent leur chlorophylle et apparaissent avec un aspect gris verdâtre (Laterrot et al., 1978).
Il s’ensuit un jaunissement puis une nécrose d’une partie ou de la totalité du limbe avec
des éclaircissements au niveau des nervures. L’atteinte des feuilles se fait progressivement de
bas en haut ce qui fait que le feuilles se trouvant à la base de la plante sont déjà mortes
(Messiaen, 1981 ; Gindrat, 1975).
Au niveau de la tige de la plante atteinte, apparait une dépression longitudinale qui part du
collet puis remonte unilatéralement. Les tissus au niveau de la dépression sont de couleur
brune (Bouhot, 1972).
D’autres symptômes peuvent parfois apparaitre tels que l’inclinaison et la courbure
progressive vers le sol des pétioles et des limbes (épinastie), le ralentissement de la croissance
et la formation de bourrelets adventives sur la tige (Laterrot et al., 1978).
Etude Bibliographique La pathologie
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1.2. Les symptômes internes externes de la maladie
Une coupe longitudinale au niveau de la tige des plantes atteintes, présente dans la
partie ligneuse et adjacente au cortex vert, montre une coloration brune sombre des tissus
conducteurs. Des coupes transversales laissent apparaitre également des tissus bruns foncés
contenant souvent des fragments mycéliens.
2. La pourriture des racines et du collet (Fusarium crown and root rot)
Elle est causée par le F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici, cette maladie
dévastatrice de la tomate (figure 09, 10, 11) a été détectée pour la première fois au Japon en
1969 (Sato et Araki, 1974 ; Yamamoto et al., 1974), elle fut aussi observée au nord de
l’Amérique (Leary et Endo, 1971 ; Jarvis, 1988), en Californie en 1971 (Jarvis, 1988), en
Turquie en 1998 (Can et al., 2004), la maladie fut aussi signalée en Italie à Albugo en 1984
(Tamietti et Lento, 1986), en Sicile en 1986 (Cartia et Asero,1994), à Malte en 2004 (Porta-
Puglia et Mifsud, 2005), elle fut également signalée en Tunisie en 2001 (Hajlaoui et al.,
2001), et en Moyen orient (Krikun et al.,1982) et au sud de l’Afrique (Sonada, 1976).
Lorsque la maladie a été découverte dans les serres du sud du Japon, Yamamoto et al.
(1974) décrivent l’agent responsable comme une nouvelle race de F. oxysporum f.sp
lycopersici. Sato et Araki (1974) confirment la présence de cette maladie dans le nord du pays
et approuvent cette hypothèse.
Cependant, cette désignation a connue un désagrément puisque les symptômes
observés n’étaient pas typiques de la flétrissure vasculaire mais ceux de la pourriture des
racines et du collet (Jarvis et al., 1977 ; Rowe et al., 1977 ; Nutter et al., 1978).
Jarvis et Shoemaker (1978) considèrent l’agent responsable de cette maladie comme
une nouvelle forme spéciale en se basant sur les travaux de Weimer (1944) qui a décrit la
pourriture des racines du lupin causée par le F. oxysporum f.sp radicis-lupini dont les
symptômes sont différents de ceux causés par le F. oxysporum f.sp lupini qui provoque la
flétrissure vasculaire du lupin.
Aucune race n’a été reportée par Katan et al. (1999) tandis que 09 groupes de
compatibilité végétative (VCG) ont été identifiés montrant une grande variabilité génétique
au sein de la forme spéciale F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Balmas et al., 2005).
2.1. Les symptômes externes
Contrairement à la flétrissure vasculaire, cette maladie se caractérise par une longue
période d’incubation. En effet, lorsque l’infection se produit après la plantation, les
symptômes externes apparaissent au moment de la récolte.
Etude Bibliographique La pathologie
13
Cependant, si l’infection se produit durant la production des plantules, la maladie se
manifeste pendant la floraison (Ślusarski, 2000).
Cette maladie est favorisée par une température des sols qui avoisine les 18°C (Sato et
Araki 1974; Yamamoto et al., 1974; Jarvis et Thorpe, 1976; Sonoda 1976; Kim et al., 2001)
produisant des flétrissements plus ou moins importants sur les folioles du sommet de la tige
où la tige est fortement amincie. En fonction des plantes, ces flétrissements peuvent être dans
un premier temps réversibles durant la nuit, et leur incidence peut varier en fonctions des
conditions climatiques.
Les flétrissements peuvent être soudains, peuvent également évoluer très rapidement
vers la nécrose, le desséchement des feuilles et des folioles et peuvent aussi conduire à la mort
des plantes.
Certains auteurs signalent aussi l’apparition de jaunissements foliaires situés à la
périphérie du limbe des vieilles feuilles. Ceux-ci sont suivis de la nécrose des pétioles et de la
chute des feuilles. Certaines plantes affectées précocement voient leur croissance réduite.
Quelle que soit la gravité des flétrissements, les symptômes primaires sont à
rechercher sur les racines et le collet des plantes. Sur les racines apparaissent de nombreuses
lésions brun rougeâtres, humides, évoluant rapidement en pourriture. Plus le diamètre des
racines est faible, plus celles-ci pourrissent et se décomposent rapidement (Blancard, 2009).
2.2. Les symptômes internes de la maladie
Concernant la pourriture des racines et du collet, il convient de noter que le système
vasculaire présente aussi quelques symptômes, bien que nous n’ayons pas à faire à une
maladie uniquement vasculaire.
D’une manière générale, le cylindre central des grosses racines révèle des
brunissements assez marqués. Il en est de même pour les tissus vasculaires du pivot et ceux
situés de part et d’autre de ces derniers.
Le brunissement peut s’étendre jusqu’à la tige sur plusieurs dizaines de centimètres
au-dessus du collet (Jarvis et Shoemaker, 1978).
Des racines adventives se développent parfois sur la tige pour faire face à l’attaque du
champignon (Blancard, 1997). Du point de vue pertes économiques et malgré la présence de
certains variétés résistantes, cette maladie est toujours redoutée et affecte à la fois les cultures
sous serre et les cultures en plein champs (Jones et al., 1991 ; Kamilova et al., 2006).
Les plantes gravement atteintes peuvent mourir ou produisent peu de fruits et de
qualité médiocre, elles peuvent être également la cible de pathogènes secondaires
(Steinkellner et al., 2005).
Etude Bibliographique La pathologie
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Figure 06. Jaunissement et flétrissement des feuilles basses (Blancard, 2009).
Figure 07. Coloration brun sombre visible en coupe longitudinale (Agrios, 2005).
Figure 08. Coloration brun sombre visible en coupe transversale (Blancard, 2009).
Etude Bibliographique La pathologie
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Figure 09. Chancre brun foncé du collet (Blancard, 2009).
Figure 11. Système racinaire réduit et pourri (Blancard, 2009).
Figure 10. Brunissement des vaisseaux des parties basses de la tige (Blancard, 2009).
Etude Bibliographique La pathologie
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3. Les mécanismes de défense
La plante atteinte développe une série de barrières mécaniques et biochimiques pour
lutter contre le parasite (Beckman, 1988).
3.1. Les barrières mécaniques
Quand le parasite pénètre par les racines, un brunissement de quelques cellules du
parenchyme ligneux voisin de la partie du vaisseau infecté apparait. Cette réaction est suivie
par la formation de thylles, sécrétion gommeuse permettant à la plante d’isoler l’agent
pathogène en obstruant le vaisseau envahi avant que le filament mycélien ne produise des
conidies.
Si cette réaction tarde à venir, l’infection par les conidies se généralise et se propage à
plusieurs vaisseaux entrainant la mort de la plante par gommose, thyllose, et hyperauxinie
générale. Les symptômes externes de la maladie reflètent le degré de l’invasion des vaisseaux
vasculaires par les filaments mycéliens (El Mahjoub, 1984).
3.2. Les barrières biochimiques
Deux substances biochimiques sont élaborées par la plante une fois que l’attaque du
parasite a eu lieu (Henni, 1998).
3.2.1. Les polyphénoloxydases
Ce sont des enzymes à base de cuivre, elles sont activées en cas de blessures et
interviennent dans l’oxydation des composés phénoliques de la plante et contribuent avec les
cellules du parenchyme à la formation des thylles (Messiaen, 1981).
3.2.2. Les phytoalexines
Ces substances sont considérées comme des antibiotiques, leur rôle est de freiner la
progression du parasite à l’intérieur des vaisseaux. Ride et Drysdale (1971) indique que dans
le cas d’infection d’une plante de tomate, une relation s’établit dés les premiers jours de
l’agression entre la concentration de tomatine (substance inhibitrice) et le blocage de l’agent
pathogène (Henni, 1998).
4. Les moyens de lutte
4.1. La lutte culturale
La rotation des cultures demeure une bonne prévention contre certaines maladies des
racines. Le déchaumage, les dates optimales de semis, les conditions de labour ainsi que
l’élimination des mauvaises herbes, permettent de lutter contre certains champignons
nuisibles. (Semal, 1989 ; Minaud et Pelossier, 1979 ; Bovey, 1972).
Etude Bibliographique La pathologie
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Le maintien du sol nu par labours successifs, durant les trois premières années de
plantations est un facteur qui diminue l’incidence de la fusariose (Renard et Ravisé, 1986).
Berna et al. (1983) soulignent l’importance de garder une fertilisation azotée élevée
sous forme de nitrate pour stimuler la production de jeunes pousses. La méthode de
prévention la plus courante est le chaulage afin de garder le pH entre 6,4 et 7,0 (Scott, 1923).
Corden (1965) démontre que la sévérité de la flétrissure fusarienne causée par F.
oxysporum f.sp. lycopersici augmente lors d’une déficience ou carence en calcium après
infection et diminue lorsque la déficience survient avant l’infection, le calcium réduirait la
fusariose en inhibant l’activité de la polygalacturonase du pathogène, d’où l’importance d’un
bon maintien du niveau de calcium dans le sol.
4.2. La lutte physique
Anchisi et al. (1985) ont développé un traitement à l’eau chaude pour protéger les
plants dans un sol où la maladie s’est déjà manifestée. La méthode consiste à traiter les
racines avec de l’eau à 48-49°C pendant 30 secondes avant de les transplanter au moins 48
heures après, cela stimule la croissance des racines et les renforce.
4.3. La lutte chimique
L’usage des sels de cuivre a marqué les étapes de la lutte vis-à-vis de nombreux
parasites des végétaux (Cook, 1992). La toxicité des sels de cuivre, en solution dans l’eau, à
l’égard des spores de champignons, paraît avoir été démontré par l’allemand Scultess en
1761. Le sulfate de cuivre, considéré à l’époque comme un poison violent, est cependant
préconisé en 1807 par Prévost pour ralentir la germination des spores des caries du blé. Ce sel
fut employé longtemps seul, malgré sa phytotoxicité à l’égard du feuillage soumis au
traitement.
En 1800, Proust fut le premier à envisager de neutraliser l’acidité du sulfate de cuivre
par de la chaux. A partir de 1842, les viticulteurs du sud-ouest de la France utilisent un
mélange compact de sulfate de cuivre et de chaux fraîchement éteinte pour « vitrioler » les
raisins et ainsi dissuader les parasites.
Kühn (1868) puis Driesch (1873) en Allemagne, recommandaient l’utilisation des
combinaisons cupriques à l’égard des maladies des grains. Cet usage intervient en grande
culture et en 1876, Bary les recommandait pour lutter contre le mildiou de la pomme de terre
(Agnihotri, 1989).
L’emploi de cette technique a été considérablement perfectionné et généralisé lorsqu’
en 1878, Millardet et Gayon, tous les deux professeurs à la faculté des sciences de Bordeaux
ont démontré l’efficacité de la « bouillie bordelaise » contre le mildiou de la vigne.
Etude Bibliographique La pathologie
18
Le XXe siècle a connu une extension mondiale de la lutte chimique avec une grande
gamme de produits phytopharmaceutiques (Semal, 1989) tels que les fongicides chimiques
dont les plus utilisés sont les triazoles et leurs dérivés qui sont des composés très actifs grâce
à un noyau qui possède une activité pharmacologique, antibactérienne, antifongique et
hypoglycémique (Hamoir et al., 2001).
4.4. La lutte intégrée
La lutte intégrée consiste à l’emploi combiné et raisonné de toutes les méthodes
pouvant exercer une action régulatrice sur divers ravageurs d’une culture, de façon à
maintenir à un niveau assez bas leur population, pour que les dégâts occasionnés soient
économiquement tolérables.
Une définition quasi officielle à été donnée par l’Organisation Internationale de Lutte
Biologique en 1977: «Procédé de lutte contre les organismes nuisibles qui utilise un ensemble
de méthodes satisfaisant les exigences à la fois économiques, écologiques et toxicologiques,
en réservant la priorité à la mise en œuvre des éléments naturels de limitation et en respectant
les seuils de tolérance» (Corbaz, 1990).
4.5. La lutte biologique
La lutte biologique consiste à utiliser contre un organisme pathogène d’autres
organismes saprophytes afin de diminuer la population pathogène au-dessous d’un seuil
critique (ou économique) à long terme (Jones, 1981 ; Gendrier, 1999 ; Henni, 1982).
La lutte biologique contre F. oxysporum f.sp. lycopersici met en œuvre plusieurs
antagonistes (Alabouvette et al., 1993). En effet Rouxel et al. (1980) ont démontré qu’il
suffisait d’introduire des populations de F. oxysporum et F. solani non pathogènes
saprophytes dans le sol pour induire un bon niveau de résistance. Une intense colonisation du
rhizoplan par des Fusarium non pathogènes bloquerait l’accès de l’agent pathogène, pourtant
présent dans le sol.
Ces travaux ont été repris par Alabouvette et al. (1984) puis par Fravel et al. (2003)
qui ont confirmé qu’au niveau de la rhizosphère, se déroulent des phénomènes de compétition
qui délimitent l’activité de l’agent pathogène (Alabouvette et al., 1996 ; Edel et al., 1997 ;
Larkin et al., 1998 ; Steinberg et al., 1999). Larkin et Fravel (1998) démontrèrent que les
Fusarium non pathogènes sont plus efficaces quant à la réduction de l’incidence de la
fusariose vasculaire.
Couteaudier et Alabouvette (1985) ont démontré que l’incorporation des Trichoderma
spp. aux sols maraîchers infestés de F. oxysporum f.sp. lycopersici a aboutit à une protection
Etude Bibliographique La pathologie
19
durable des plantes cultivées. L’inoculation des semences avec Trichoderma harzianum
permet également d’accroître les rendements de 26% dans des sols infectés (Sivan, 1987).
Les bactéries à leur tour tiennent une place importante dans la lutte biologique,
Pseudomas fluorescens à fait l’objet de plusieurs travaux à savoir: Guessas (1993), Gamiel et
Katan (1992), Lemanceau et al. (1993), Larkin et Fravel (1998), Duijff et al. (1998) et
Benchabane et al. (2000).
Des recherches se sont orientées vers des méthodes alternatives de lutte biologique
notamment vers l’usage des métabolites secondaires des plantes tels que les huiles essentielles
qui ont donné des résultats interessants sur les mycoses (Adam et al., 1998; Camara et al.,
2007; Guede-Guina et al., 1995; Hamini et al., 2014 ; Mandango et al., 2003; Zirihi et al.,
2003). Les extraits de ces plantes auraient ainsi des propriétés antifongiques et
antibactériennes (Oxenham et al., 2005).
Cette source semble inépuisable puisque seule une petite partie des 400.000 espèces
végétales connues ont été investiguées sur les plans phytochimique et pharmacologique, et
que chaque espèce peut contenir jusqu’à plusieurs milliers de constituants (Hostettmann et al.,
1998).
4.6. La lutte génétique
La résistance vis-à-vis des agents pathogènes représente une solution qui reste une
préoccupation constante des sélectionneurs car il est souvent difficile d’associer la haute
productivité à la résistance sans compter que certaines résistances se montrent très stables
alors que d’autres le sont moins (Latterot, 1972).
L’obtention régulière de variétés améliorées et résistantes est une opération de longue
haleine qui nécessite des moyens de recherches importants. (Semal, 1989). L’inconvénient
des méthodes de sélections, c’est qu’à côté des variétés améliorées et résistantes obtenues,
surgissent de nouvelles races de parasites plus virulentes (Messiaen, 1981), mais il faut aussi
que les variétés résistantes soient aussi productrices de récoltes abondantes et de bonne
qualité. Une dizaine d’agents pathogènes sont maintenant contrôlés par des résistances
génétiques. Ce sont surtout les variétés destinées aux cultures abritées qui ont logiquement
retenu l’attention des sélectionneurs. Les épidémies y sont plus fréquentes et souvent plus
intenses (Maraitre et al., 1973).
Les variétés cultivées sous abri sont généralement résistantes à deux champignons :
Verticillium dahliae et Fusarium oxysporum (Latterot, 1996). Ainsi, l’obtention de plantes
transgéniques ouvre actuellement de nouvelles perspectives pour lutter contre les
phytopathogènes (Ozenda, 2000).
Etude Bibliographique Le Pathogène
20
1. Généralités sur le genre Fusarium
Le genre Fusarium a été introduit par Link en 1809, ce dernier traverse son troisième
siècle comme l’un des genres comprenant de nombreux champignons qui peuvent causer
directement des maladies chez les plantes, chez les humains ou bien chez les animaux
domestiques (Boonpasart et al., 2002 ; Goldschmied et al., 1993 ; Krcmery et al., 1997 ;
Martino et al., 1994 ; Rabodonirina et al., 1994 ; Rebell, 1981 ; Vismer et al., 2002).
Le taux de mortalité chez les humains à cause des infections systémiques à Fusarium
est inferieur à 70% (Krcmery et al., 1997) et les patients séropositifs sont plus exposés à de
telles infections (Eljaschewitsch et al., 1996 ; Guarro et al., 2000).
En outre, les espèces de Fusarium produisent de métabolites secondaires qui sont
associés à des maladies de plantes, à des cancers et à des problèmes de croissance chez les
humains et chez les animaux domestiques. Certains de ces métabolites secondaires sont
utilisés soit directement, soit comme produit de départ dans l'industrie chimique pour la
synthèse des promoteurs de croissance chez les végétaux et chez les animaux (Hidy et al.,
1977 ; Shukla et al., 2003, Tomasini et al., 1997).
Des allégations de l'utilisation des mycotoxines produites par certains de ces
champignons comme armes biologiques ont été également faites (Heyndrickx et al., 1989 ;
Mirocha et al., 1983 ; Rosen et al., 1983).
En effet, des épidémies de toxicoses à Fusarium touchant directement les humains se
sont produites à Athènes au Veme
siècle av JC et en union soviétique pendant la deuxième
guerre mondiale. Ainsi, Fusarium a toujours été visible par ses espèces et ses métabolites dont
l’importance transcende à la fois la science et l’agriculture.
Une enquête menée par l’American phytopathological society a révélé que sur les 101
plantes à intérêt économique, 81 d’entre elles sont attaquées par un ou plusieurs champignons
appartenant au genre Fusarium, ces derniers provoquent des pourritures de racines ou de
tiges, des chancres, des flétrissements, des pourritures de fruits ou de semences ou bien des
maladies foliaires. Ainsi, l'identification de la souche présente dans un échantillon de plante
malade, au niveau de l’espèce et parfois plus loin, reste une tâche importante dans de
nombreux diagnostics de laboratoires.
Depuis les années 1980, le nombre d’espèces identifiées a augmenté progressivement
pour atteindre les 80 espèces et avec l’évolution des techniques de la biologie moléculaire, ce
nombre risque d’augmenter de façon considérable au cours des années à venir (Leslie et
Summerell, 2006).
Etude Bibliographique Le Pathogène
21
2. Généralité sur l’espèce Fusarium oxysporum
Dans le genre Fusarium, l’espèce Fusarium oxysporum est la plus répandue dans le
monde, elle peut être retrouvée dans la plupart des sols : arctiques (Kommedahl, et al., 1988),
tropicales, désertiques (Mandeel et al., 1995), cultivés ou non (Mc Mullen et Stack, 1984).
Elle peut également être dispersée par les insectes (Gillespie et Menzies, 1993) et récupérée à
partir d'algues marines (Granchinho et al., 2002).
F. oxysporum est également l'une des espèces les plus importantes du point de vue
économique compte tenu de ses nombreux hôtes et du niveau des dégâts qu’elle peut
entraîner. En effet, les formes spéciales de F. oxysporum sont des agents pathogènes
vasculaires provoquant souvent le flétrissement vasculaire, la fonte de semis et les pourritures
racinaires (Nelson et al., 1983).
Ce champignon survit dans le sol en forme de chlamydospores dormantes et
immobiles jusqu'à la stimulation de la germination par des substrats organiques ou par des
exsudats racinaires. Suite à la germination, il y a formation d'un mycélium et si les conditions
sont favorables, le thalle produit des conidies (Agrios, 2005).
Les caractéristiques morphologiques typiques de F. oxysporum mettent en évidence :
la production de microconidies en fausses têtes sur des monophialides courts portés par les
hyphes, la production de chlamydospores, la forme des macroconidies et des microconidies.
Le nombre et la morphologie des macro- et microconidies formés peuvent être
modifiés par des mutations sur un seul gène (Ohara et al., 2004 ; Ohara et Tsuge, 2004).
Les isolats de F. oxysporum sont difficiles à distinguer de ceux de F. solani et F.
subglutinans. F. solani produit des microconidies en fausses têtes sur de très longs
monophialides formée sur les hyphes tandis que F. subglutinans se distingue de F. oxysporum
par l'absence de chlamydospores et par la production de microconidies sur des polyphialides.
Cependant, les polyphialides sont difficiles à rencontrer chez certains isolats de F.
subglutinans, et les chlamydospores sont parfois produites lentement chez certains isolats de
F. oxysporum (Leslie et Summerell, 2006).
3. Caractères culturaux de l’espèce F. oxysporum
3.1. Caractères sur milieu CLA
F. oxysporum produit habituellement des macroconidies abondantes, courtes à
moyennes, falciformes à droite, à paroi mince et habituellement avec 3 cloisons. La cellule
apicale est courte et légèrement accrochée dans certains isolats, la cellule basale est entaillée
ou en forme de pied.
Etude Bibliographique Le Pathogène
22
Les macroconidies sont formées sur des monophialides portés par des conidiophores
ramifiés en sporodochies ou sur des monophialides portés sur les hyphes.
Les microconidies sont d’habitude non cloisonnées, peuvent être ovales, elliptiques ou
réniformes, formées en abondance sur des monophialides courts en fausses têtes.
Les chlamydospores sont formées en abondance dans les hyphes pour la plupart des
isolats et en particulier chez les saprophytes (Leslie et Summerell, 2006).
3.2. Caractères sur milieu PDA
La morphologie des colonies sur PDA varie largement, le mycélium peut être
floconneux, clairsemée et avec une couleur allant du blanc au violet pâle. Certains isolats de
F. oxysporum produisent habituellement une pigmentation violette foncée ou magenta foncée,
d’autres isolats de F. oxysporum mutent facilement au pionnotal forme de mycélium
"humide" plat avec une apparence jaune ou orange sur PDA (Leslie et Summerell, 2006).
4. La pathogénicité, les formes spéciales et les races
Plusieurs isolats de F. oxysporum sont pathogènes pour les plantes causant souvent des
maladies telles que la fusariose vasculaire (Beckman, 1987 ; Nelson, 1981 ; Summerell et
Rugg, 1992), la fente des semis (Nelson et al., 1981) ou encore la pourriture des racines et du
collet (Jarvis et Shoemaker 1978).
Les isolats de F. oxysporum montrent une grande spécificité d’hôtes, il en résulte une
subdivision de l’espèce en formes spéciales et en races. Plus de 100 formes spéciales et races
de F. oxysporum ont été décrites à ce jour (Booth, 1971).
Les formes spéciales de F. oxysporum s’attaquent à la plupart des plantes cultivées
mono et dicotylédones (El Modafar, 1994), certaines d’entre elles ne présentent plus de réel
problème agronomique, c’est le cas de la forme spéciale F. oxysporum f.sp. lycopersici, pour
laquelle la plupart des variétés de tomate cultivées sont résistantes.
Par contre, il existe toujours des problèmes causés par F. oxysporum f.sp. radicis-
lycopersici, responsable de pourriture racinaire et du collet chez la tomate dans de nombreux
pays du bassin méditerranéen vu qu’aucune variété résistante à cette forme spéciale n’a été
commercialisée (Can, 2004; Utkhede, 2006).
Cependant, trois races de F. oxysporum f.sp. lycopersici ont été répertoriées. Elles se
distinguent entre elles par leur degré de virulence vis-à-vis des différents cultivars de tomate.
La race 1 a été initialement décrite en 1886 (Booth, 1971), la découverte d’un gène de
résistance par Bohn et Tucker en 1939 (Elocy, 1972 ; Beckman et al., 1988) et son
Etude Bibliographique Le Pathogène
23
introduction dans de nombreuses variétés de tomates a permis de limiter l’incidence de cette
première race dite 1.
La race 2 est apparue pour la première fois en 1945 à l’Ohio aux U.S.A (Alexander et
Tucker, 1945 ; Randall, 1980), puis au Maroc (Pecault et Laterrot, 1966), en Tunisie (Davet,
1967), au Moyen orient (Walker, 1971), aux Pays Bas (Hubbeling et Dimond, 1972), en
Grande Bretagne (Gabe et Kright, 1973), en République Sud Africaine (Holtz, 1976) et aussi
en Italie en 1999 (Stravato,1999).
La race 3 a été observée en Australie en 1978 (Grattidge et O’Brien, 1982) et a été
successivement rapportée aux Etats unis : en Californie (Davis et al., 1988), Floride (Volin et
Jones, 1982), Géorgie (Chellemi, 1992), Arkansas et Nord Carolina (Marlatt et al., 1996) et
au Tennessee (Bost, 2001). Elle a également été retrouvée au Mexique (Valenzuela-Ureta et
al., 1996) et au Brésil (Reis, 2005).
5. Le cycle de vie de F. oxysporum
Les F. oxysporum ne sont pas des parasites obligatoires, en absence de la plante hôte,
ils mènent une vie de saprophyte sur des débris végétaux et des matières organiques. Les
isolements effectués indiquent qu’un gramme de sol peut renfermer prés de 100.000
propagules ou les F. oxysporum représentent 80 à 90% de la population fusarienne totale de la
rhizosphère (Correll et al., 1986).
Ces champignons persistent dans le sol principalement sous forme de spores de
résistance (chlamydospores) en état de dormance (Booth, 1971). En contact de l’hôte et une
fois les conditions favorables le cycle se déroule comme suit (figure 12) :
Les chlamydospores germent et les jeunes filaments pénètrent les racines au niveau
des blessures ou des ouvertures naturelles ;
Après pénétration dans la cellule épidermique, le mycélium se ramifie et colonise
toutes les cellules avoisinantes ;
Les hyphes mycéliens progressent à l’intérieur des cellules puis colonisent le
cortex, arrivé au niveau du cylindre central, le parasite s’installe dans les vaisseaux
du xylème d’où il se propagera dans la tige par l’intermédiaire des microconidies
aisément véhiculées par la sève dans toutes les parties de la plante ;
A la surface des feuilles, se forment des organes fructifères appelés sporodochies
qui produisent des macroconidies qui vont à leur tour contaminer d’autres plantes
lorsqu’elles sont transportées par le vent, par l’eau ou bien par l’intermédiaire des
insectes (El Mahjoub, 1979).
Etude Bibliographique Le Pathogène
24
Figure 12. Cycle de vie du Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici (Agrios, 2005).
1- Conidies, chlamydospores ou mycélium vivant dans le sol ;
2- Germination des spores ;
3- Pénétration du tube germinatif à l’intérieur des racines ;
4- Invasion des vaisseaux par les conidies et/ou mycélium ;
5- Production de gomme à l’intérieur des vaisseaux ;
6- Flétrissement et mort de la plante ;
7- Sporodochies ou mycélium produisant des conidies.
2
1
3
4
5
6 7
Etude Bibliographique Le Pathogène
25
6. La position taxonomique de l’espèce F. oxysporum
La taxonomie au sein du genre Fusarium a connue énormément de changement
pendant les 100 dernières années. Les bases de la systématique moderne on été mises au point
par Wollenweber et Reinking (1935) grâce à un système à 65 espèces, 55 variétés et 22
formes, rassemblées en 16 sections et 06 sous-sections.
Synder et Hansen (1940, 1954) ont simplifié la classification au sein du genre
Fusarium pour ne retenir que 09 espèces à savoir : F. oxysporum, F. solani, F. moniliforme,
F. roseum, F. lateritium, F. tricinctum, F. nivale, F. rigidiuscula, et F. episphaeria.
Gordon (1944, 1960) en examinant des espèces de Fusarium isolées à partir de
plusieurs substrats et environnements a développé une approche taxonomique basée sur les
travaux de Wollenweber et Reinking et les études de Snyder et Hansen avec la description de
la forme téléomorphe.
Les chercheurs Français Messiaen et Cassini (1959, 1968) ont à leur tour développé un
système en s’appuyant sur les travaux de Snyder et Hansen et en utilisant beaucoup plus les
cultivars pour désigner la spécificité des espèces vis-à-vis des plantes hôtes.
D’autres systèmes taxonomiques basé sur les travaux de Wollenweber et Reinking ont
été suggérés, notamment ceux de Raillo (1935), Bilai (1955, 1977), Gordon (1952, 1960,
1965), Booth (1971, 1975, 1981), Joffe (1974) et Gerlach (1970, 1977, 1981).
Toussoun et Marasas (1983) ont élaboré le premier manuel d’identification pour le
genre Fusarium, ce guide est devenu très populaire grâce à sa simplicité et aux informations
utiles qu’il a fourni sur l’isolement et la culture des espèces de Fusarium avec d’excellentes
figures en couleur qui permettent la distinction des variations de la pigmentation.
Leslie et Summerell (2006) ont traité 152 espèces de Fusarium dans un manuel
d’identification contenant des techniques de caractérisation plus modernes et plus précises.
De nos jours, plusieurs espèces de Fusarium, longtemps classées dans
l’embranchement des Deutéromycètes (champignons imparfaits), classe des Hyphomycètes,
ordre des Hyphales et famille des Tuberculariacées, sont actuellement considérées comme les
formes asexuées (anamorphes) de plusieurs genres d'Ascomycètes.
C’est le cas de l’espèce Fusarium oxysporum qui est la forme anamorphe du genre
Gibberella, classé dans l’embranchement des Ascomycètes, classe des Sodariomycètes, ordre des
Hypocréales et famille des Nectariacées, cette dernière renferme d’autres genres tels que :
Haematonectria, Ilyonectria, Nectria et Neonectria (Di Pietro et al., 2003 ; Michielse et Rep,
2009).
Etude Bibliographique La plante médicinale
26
1. L’origine du genévrier de Phénicie
D'origine américaine, asiatique, africaine et européenne, cet arbre tire son nom du mot
celtique «Juneperus» qui signifie un buisson âpre, à cause de la saveur des fruits (Garnier et
al., 1961 ; Bonnier, 1990) ; ou encore de «junio» et «pario», l’arbre possédant à la fois des
fruits jeunes et des fruits prêts à tomber (Garnier et al., 1961).
Le nom vernaculaire de cet arabe est :
En Français : Genévrier rouge, Genévrier de Phénicie.
En Arabe : عرعر (Quezel et Santa, 1962).
Appelé également Zimba en Chaoui, le Juniperus phoenicea constitue, au côté du
cèdre, la principale couverture végétale dans les montagnes des Aurès, notamment dans le sud
de ce massif (Abdessamed, 1981).
2. La description botanique
J. phoenicea est un arbuste pouvant atteindre 06 m de haut avec une couronne dense et
conique (figure 13) et une écorce brune foncée, très mince d'environ 01 mm de diamètre.
Les feuilles (figure 14) sont squamiformes et nombreuses, petites et charnues, d'un
vert foncé, ovales, convexes et obturées, imbriquées et appliquées contre les rameaux,
semblables à de petites écailles et possèdent de très petites glandes à résine (Valet, 1992).
Les branches forment une corbeille très compacte de rejets, dont certaines ont 5 mètres
de diamètre et 03 mètres de hauteur mais cette faculté de rejet de la tige n'a lieu, sans doute,
que pour des sujets jeunes, de moins de 50 à 60 ans (Boudy, 1950). Les fleurs (figure 15) sont
monoïques, c'est à dire, que c'est une plante à fleurs unisexués mâles et femelles séparées,
portés par le même pied (Ageste, 1960). Les fruits (figure 16) sont globuleux, d'environ 1 cm
de diamètre, brillant, jaunâtre ou brun rougeâtre, légèrement prune, portés sur une tige
d'environ 5 mm de long et lors de la deuxième année ils sont composées de 06 à 08 écailles
avec 03 à 09 graines (Vidakovic, 1991).
3. La position taxonomique
Embranchement : Spermaphytes
Sous-embranchement : Gymnospermes
Classe : Conifères
Ordre : Coniférales
Famille : Cupressacées
Genre : Juniperus
Espèce : Juniperus phoenicea (Quezel et Santa, 1962).
Etude Bibliographique La plante médicinale
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Figure 13. La vue générale du Genévrier de Phénicie.
Figure 14. Les feuilles du Genévrier de Phénicie.
Etude Bibliographique La plante médicinale
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Figure 15. Les fleurs du Genévrier de Phénicie.
Figure 16. Les fruits du Genévrier de Phén
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