Place de la biologie moléculaire dans la prise en charge des
hémopathies malignes
Alice Marceau-Renaut
Laboratoire d’hématologie
CHRU Lille
Hémopathies malignes
• Hémopathies myéloïdes– LAM (leucémies aiguës myéloïdes)– SMP (syndromes myéloprolifératifs)
• LMC (leucémie myéloïde chronique)• Autres : PV (polyglobulie de Vaquez), TE (thrombocythémie
essentielle), MFP (myélofibrose primitive) …
– SMD (syndromes myélodysplasiques)
• Hémopathies lymphoïdes– LAL (leucémies aiguës lymphoblastiques)– LLC (leucémie lymphoïde chronique)– lymphomes
Biologie moléculaire
• Étude de l’ADN (génome) et de l’ARN (transcriptome)
• Matériel biologique : sang, moelle osseuse, LCR, biopsies
• Aide au diagnostic
• Contribution à l’évaluation du pronostic
• Suivi thérapeutique (maladie résiduelle)
MRD : maladie résiduelle
Leucémie myéloïde chronique
• Prolifération maligne de la lignée granulocytaire sans blocage de maturation– Hyperleucocytose avec PNN et myélémie sur
hémogramme
• Anomalie cytogénétique associée– Chromosome Philadelphie au caryotype t(9;22)
LMC et biologie moléculaire
LMC et biologie moléculaire
Diagnostic
Dépistage des transcrits BCR-ABL
LMC : suivi MRD
Maladie résiduelle
LMC : suivi MRD
LMC et échec de traitement
Séquençage direct de Sanger
Autres SMP
1ère intention
La mutation JAK2 V617F (exon 14)
Dépistage et quantification de JAK2 V617F
Autres SMP
Séquençage direct 2ème intention
Autres SMP
Mastocytose
Mutation de c-KIT (exon17) dans + 50% des formes systémiques et 30-40% des formes
cutanées
Critère mineur de diagnostic
Mutation D816V � résistance à l’imatinib
Autres SMP
Syndrome d’hyperéosinophilieessentielle
Transcrit FIP1L1-PDGFRαprésent dans le variant myéloïde
RT-PCR nichée
Leucémie aiguë myéloïde et biologie moléculaire
Classification cytogénétique et moléculaire des LAM
Leucémie aiguë myéloïde et biologie moléculaire
LAM du groupe CBF
t(8;21) : transcrit AML1-ETO• Transcrit bien visible au
caryotype• Biologie moléculaire : suivi de
MRD• 8% des LAM• Pronostic favorable
inv(16) : transcrit CBF β-MYH11• Transcrit difficile à voir au
caryotype • Biologie moléculaire :
dépistage et suivi de MRD• 8% des LAM• Pronostic favorable
Leucémie aiguë myéloïde et biologie moléculaire
Mutations c-KIT
• Mutations activatrices localisées surtout dans les exons 8 et 17
• <2% de toutes les LAM• 10-20% des LAM t(8;21)• 20-30% des LAM inv(16)• Facteur pronostique défavorable
Mutations N-RAS et K-RAS
• Mutations activatrices
• Pas de valeur pronostique• 5% de toutes les LAM
• 20-30% des LAM-CBF
Leucémie aiguë myéloïde et biologie moléculaire
FLT3-ITD
• Duplication en tandem dans le domaine juxta-membranaire
• 20% de toutes les LAM
• 30% des LAM-CN et LAP• Facteur pronostic défavorable• Mutation instable à la rechute
FLT3-TKD
• Mutation ponctuelle dans le domaine tyrosine kinase (D835 et I836)
• Mauvais pronostic dans les LAM-CBF
Mutations de NPM1
• Mutations hétérozygotes (insertion de 4 bp)
• 30% de toutes les LAM
• 50% des LAM-CN (caryotype normal)
• Valeur pronostique favorable (en l’absence de FLT3-ITD)
• Mutation stable à la rechute � suivi MRD des mutations
A, B et D � détection précoce des rechutes
Mutations de CEBPA
• Mutations N-terminales : PP1• Mutations C-terminales : PP2• 10% de toutes les LAM• 15-20% des LAM-CN• Valeur pronostique favorable
Impact du génotype dans les LAM-CN
Recommandations ELN
Évaluer le statut mutationnel NPM1, FLT3-ITD et CEBPA dans les LAM-CN en pratique courante
Leucémie aiguë myéloïde et biologie moléculaire
Pronostic défavorable
Leucémie aiguë myéloïde et biologie moléculaire
Mutations au niveau des
exons 7 et 9
Pronostic ?
Leucémie aiguë myéloïde et biologie moléculaire
Suivi MRD sur expression WT1
• Surexpression de WT1 au diagnostic dans 80 à 90% des LAM
• Fait au diagnostic de toutes les LAM (hors CBF) traitées par chimiothérapie intensive
• Permet de suivre la maladie résiduelle
Leucémie aiguë lymphoblastique
LAL au diagnostic : marqueurs moléculaires
• ARN : transcrits chimériques dans 30% des cas– LAL-B : BCR-ABL, MLL-AF4, E2A-PBX1,
TEL-AML1
– LAL-T : HOX11, HOX11L2, SIL-TAL, NUP214-ABL
• ADN : clonalité– réarrangement VDJ des gènes codant pour
les Ig et TCR
– au moins un marqueur dans 90% des cas
LAL et transcrits chimériques
Diagnostic : impact pronostique
Suivi MRD
Suivi MRD : exemple AF4-MLL
GHILLEBAERT Jean-Marietranscrit e11e4
06/0
9/06
04/1
0/06
(sg
)
05/1
2/06
04
/04
/07
08/0
7/06
03
/05
/07
09/0
3/07
0,001
0,01
0,1
1
10
100
08/07 /06
08/10/06
08/01/07
08/04/07
Nom
bre
de
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AF
4-M
LL/A
BL)
x
100
/ pla
smid
e
LAL au diagnostic : étude de la clonalité
Réarrangement de l’ADN du lymphocyte = réarrangement génique TCR et Ig
PCR ciblant la zone de diversité jonctionnelle entre les domaines VDJ
= empreinte de chaque lymphocyte
LAL au diagnostic : exemple de résultats de la clonalité
Suivi MRD sur marqueur de clonalité
Design d’amorces spécifiques pour chaque patient
Biologie moléculaire et syndrome lymphoprolifératif
Biologie moléculaire et syndrome lymphoprolifératif
Lymphome du manteau et Bcl1
• Associé à t(11;14)(q13;q32) dans 80% des cas
• Hyperexpression de Bcl1
Lymphome folliculaire et Bcl2
• Associé à t(14;18) dans + 90% des cas• Fusion IgH et Bcl2
Conclusion
• Biologie moléculaire dans les hémopathies malignes– Aide au diagnostic
– Valeur pronostique– Suivi thérapeutique
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