Franois MICHEL PhD
Rev : 22-05-2013
La microscopie pour dbutants (ou pas) Partie 1
Microscopie en transmission (Plein champs)
et lments doptique
Quelques images de microscopie
1 mm
0.5 mm
0.1 mm
F. Michel 22.05.13
Quelques images de microscopie
Contraste de phase
Contraste interfrentiel diffrentiel
Illumination standard
Bright field
Phase contrast
Nomarski contrast - DIC
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Quelques images de microscopie
D.A.B
Cresyl
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Gnralits
Illumination
Dtection
Aberrations et dtrioration de limage
Rsolution et acquisition dimage
Amlioration des contrastes
Ce qui vous attend F. Michel 22.05.13
Gnralits
Buts multiples de la microscopie :
rendre les dtails visibles l'il humain ou par camra
sparer les dtails dans l'image, Mesurer/dtecter un signal lumineux, produire une image agrandie de
l'objet observ.
Souvent, lobservation seffectue en fin de chane aprs lexprience et la prparation des chantillons : Il faut tenir compte du type dobservation prvu ds le dbut du protocole.
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Gnralits Un objet nest observable que par la lumire qui en mane. Cette lumire est gnre :
Par transmission, elle traverse lchantillon Par mission (source secondaire : fluorescence) aprs
excitation (par une source lumineuse primaire ou autres sources dnergie).
Un microscope se dcompose donc en deux parties : Lillumination La dtection
Illumination Dtection
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Gnralits
Camra
Illumination
Dtection
Microscopes droits
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Gnralits
Illumination Diascopique
= transmission
Oculaires
Objectifs
Condenseur
Microscope invers
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Super-rsolution
Gnralits Ordres de grandeur
1 km 10 m 10 cm 1 mm 10 m 100 nm 1 nm 10 pm 100 m 1 m 1 cm 100 m 1 m 10 nm 1
102 103 10 1 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10
Vision directe Loupe binoculaire
Microscopie photonique Microscope lectronique
10-11
AFM
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Gnralits Nature de la lumire et optique
Loptique est la branche de la physique qui traite de la lumire, de ses relations avec la matire et avec la vision.
Discipline ancienne datant de lantiquit (Grce, Egypte...)
Dans un premier temps base sur loptique gomtrique : propagation rectiligne des rayons lumineux, elle explique rflexions et rfractions (Al-Hazem - Kepler - Snell - Descartes).
Fin XVIIme, dbut des hostilits sur la nature de la lumire entre : La vision corpusculaire qui aboutira loptique quantique au XXme
sicle (Aristote - Euclide - Newton Planck Einstein ; couleur, nergie) Loptique ondulatoire partir du XVIIIme (Huygens - Young - Fresnel
Maxwell ; diffraction, interfrence, polarit) . La dualit onde/corpuscule est reconnue en 1927 par N. Bohr et clos le
dbat donnant naissance llectrodynamique quantique.
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=
Gnralits Nature de la lumire et optique
La lumire est donc compose de photons : qui se propagent de faon rectiligne comme une onde lectromagntique (Maxwell,1870) .
Quantique
Electromagntique
Ondulatoire
Gomtrique
La longueur donde donnant la couleur du rayonnement. Longueur donde (en nm)
400 500 600 700
X UV IR radio
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Physiologie visuelle (rappels ?!?)
Gnralits
Rtine +/- 300 m
La limite de rsolution de lil est due la structure de la rtine : Les images de deux points doivent se former sur deux rcepteurs distincts pour ne pas tre confondues. L'cartement minimal de deux rcepteurs tant de 2,2 m, la limite de rsolution dpend dun grand nombre de facteurs, en conditions normales, elle est denviron 3.10-4 radian = 1' darc soit
Trajet optique : lentille (convergente)
f
Les rayons passant par le centre ne sont pas dvis.
Les rayons parallles laxe optique passent par le foyer image.
Gnralits
Conditions de Gauss : Les rayons traversent le systme, sont peu inclins sur l'axe du systme (rayons paraxiaux)
et proche du centre optique.
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A
B
Gnralits
f f O
Optique gomtrique (rappels ?!?)
Lumire A
B
Plus lobjet est proche du foyer plus limage est grande.
Si lobjet est avant le foyer, limage est inverse
Grandissement de la lentille :
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Gnralits
f f O
Optique gomtrique (rappels ?!?)
Image inverse linfinie
A
B
Lumire
Objet au foyer
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Gnralits
f f O
Optique gomtrique (rappels ?!?)
B
A
Image virtuelle dans le sens AB
A
B
Lumire
Objet entre le foyer et la lentille
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Gnralits
Microscope simple (loupe) : image perue par l'il comme si elle tait une distance de 25 centimtres Limage apparat du mme ct de l'objectif que lobjet, et ne peut pas tre projete sur un cran : image virtuelle (droite, non inverse). La lumire transmise travers la tranche entre dans la lentille pour tre rfracte et focalise et produire limage perue par la rtine.
Objet rel
Image virtuelle
Lentille simple (loupe)
25 c
m
Combinaison lentille & il
f
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Gnralits
1 2
n1 n2
n1 > n2
3
n3
n1 < n3
1 n1
n1 sin1 = n2 sin2
Loi de Snell-Descartes
Interfaces et rfraction
Nature 455 p 299 : Farewell to Flatland by Ortwin Hess
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sin1 = n2/n1 (sin2)
Exemple : 1 = 30 nair/nverre =1/1,52 2 = 19,2
1
2
nair nverre
Air Verre
Gnralits
Interfaces et rfraction Valeurs approches de n, lindice optique, pour quelques substances
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c : vitesse de la lumire dans le vide : la vitesse de propagation de l'onde dans le milieu travers
vide = c= 299 792 458 ms-1 Air= 299 704 764 ms-1 Donc nvide=1 et nair=1.0002926
Eau= 224841533 ms-1 donc neau=1.33335 2 = 22.02 Verre= 197603687 ms-1 donc nverre=1.51714 2 = 19,24
n = c/ donc n1
= f(, ) = f(, P, T) 2 = 1
: permittivit dilectrique : permabilit magntique
Gnralits Interfaces et rfraction n : indice optique
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Gnralits Principe du microscope optique
L'objectif (L1) donne de l'objet AB observ une image relle AB renverse et trs agrandie qui joue pour l'oculaire (L2) le rle d'objet rel. L'oculaire donne de cet objet une image virtuelle agrandie, vue par l'observateur linfinie car AB est au foyer F2 de loculaire.
Plan image intermdiaire
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Gnralits
Statif Condenseur Objectifs Oculaires /camra
Concepts importants Ouverture numrique Rsolution Aberrations
Composants du microscope
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Gnralits
Illumination
Dtection
Aberrations et dtrioration de limage
Rsolution et acquisition dimage
Amlioration des contrastes
Ce qui vous attend F. Michel 22.05.13
Illumination Sources de lumire
La source de lumire en microscopie de transmission a longtemps t le soleil ou une bougie. Elle est maintenant constitu dune lampe halogne filament de tungstne 12 V. Lillumination par LED blanches devient de plus en plus courante.
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Illumination
La fonction du condenseur est de concentrer la lumire sur lobjet.
Les microscopes d'initiation sont le plus souvent dpourvus de condenseur, auquel est substitu un miroir concave ou des LEDs blanches.
Le champ clair par le condenseur doit tre uniforme.
L'ouverture numrique du condenseur joue sur la qualit de l'illumination de l'objet.
Idalement, elle devrait correspondre celle de l'objectif (il existe des condenseurs immersion pour les objectifs d'ON >1)
Condenseur
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Illumination
Objectif Plan objet Source lumineuse
Lentille collectrice (Miroir concave)
Illumination critique Echantillon
Image de la source
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Illumination
Cest la mthode la plus simple. Elle consiste focaliser la lumire de la source sur lobjet. Linconvnient majeur est que la source nest gnralement pas
homogne et par consquent, lchantillon ne sera pas clair uniformment ce qui induit des aberrations tels que des effets de bords (bords sombres).
Cest la mthode de choix pour les faibles clairements (flamme, soleil, lampe).
Illumination critique
Objectif Diaphragme douverture
Condenseur
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Illumination
Mauvais rglages du diaphragme douverture du condenseur : A) la pupille dentre de lobjectif nest pas entirement couverte (perte de
rsolution) ou B) toute la lumire nentre pas (perte de luminosit et de contraste).
Illumination critique
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A
B
Illumination
Diaphragme douverture Objectif
Diaphragme de champs Illumination de Khler
Condenseur Rglage essentiel:
- assure un clairage homogne de la prparation - contribue lobtention de la meilleure
rsolution latrale - intervient sur la profondeur de champ et le
contraste de limage August Khler
(1866-1948)
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Illumination
Condenseur
Diaphragme douverture
Filtres gris (densits
neutres) et/ou colors
Diaphragme de champ
Botier lumire transmise
lampe halogne
Vis de centrage du condenseur
Mise au point axiale du
condenseur
Disposition des diaphragmes
Microscope invers
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1) Mettre au point sur une prparation faible grossissement, les deux diaphragmes grands ouverts.
2) En dehors de lchantillon, fermer le diaphragme de champ pour visualiser une tache lumineuse polygonale, floue et non centre.
Illumination Rglages de Khler ( faire pour chaque objectif)
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3) Rendre nette cette tche en jouant sur la hauteur du condenseur (bords polygonaux)
4) Centrer ce polygone dans le champ laide des vis de centrage du condenseur
Illumination Rglages de Khler
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5) Ouvrir le diaphragme de champ jusqu la limite de perception dans loculaire (tangentiel) pour vrifier le centrage puis louvrir un peu plus.
6) Fermer lgrement le diaphragme douverture si
besoin est, pour contraster.
ferm mdian ouvert
Illumination Rglages de Khler
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Rglage optimal de lampe + collecteur diaphragmes condenseur objectif oculaires
illum
inat
ion
dte
ctio
n Illumination
Trajet optique
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Gnralits
Illumination
Dtection
Aberrations et dtrioration de limage
Rsolution et acquisition dimage
Amlioration des contrastes
Ce qui vous attend F. Michel 22.05.13
Dtection
Objet
Lamelle
Huile
Lame
60x 1.4 NA
Objectifs
Milieu de montage
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Dtection Objectifs
Objet complexe, fragile et couteux (de 500 plus de 20 000 ), central dans la chane optique, sa qualit (sa propret) et ses caractristiques influent
directement sur limage obtenue.
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Dtection Caractristiques techniques des objectifs
Marques : incompatibles entre elles (vissage, optiques, corrections)
Grandissement : de 2.5 150X fates votre choix (code couleur, zoom)
Ouverture numrique : rsolution, luminosit
Milieu(x) dimmersion : sec, eau, huile (ONmax respective : 0.95 1.2 1.47)
Type (corrections des aberrations) : planit, chromaticit
Proprits optiques spciales : contraste de phase, DIC
paisseur de lamelle : normalement 170 m (rglable quelquefois, attention
aux microscopes inverss (ptri = plastique pais))
Distance de travail : de la lentille dentre de lobjectif au point focal
(de 150 m plusieurs millimtres) *
Profondeur de champs : paisseur de la "coupe optique", dpend de lON*
* Non indiqu sur lobjectif
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LOuverture Numrique : ON=n.sin() o n est lindice optique et le demi-angle du cne de dtection (Numerical Aperture : NA).
LON nest pas lie au grandissement, il y a des ON fortes faible grandissement comme le 20X sec Zeiss de 0,8 ou des 20X immersion eau Olympus 0,95 et plus rcemment Zeiss et Leica de 1,05 dON.
Plus lON est grande, meilleure est la rsolution (Res(nm) = 0.61 /ON) Une mauvaise illumination induit une ON dgrade.
Dtection Ouverture numrique
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Objectif
n=1.52
n = 1.52
n = 1.52
Objet
Lamelle
Huile
n=1.33
n = 1.52
n = 1.0
n = 1.52
n=1.52
Air
Eau
L'inhomognit des indices rduit le pouvoir rsolutif du microscope et peu induire des aberrations chromatiques ou autres (n=f(..))
Dtection Milieux dimmersions : n dans la pratique
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Profondeur de Champ
Dtection
Distance entre le point le plus haut et le point le plus bas de la prparation qui donne une image nette (paisseur de la tranche optique).
Ex. 488 nm : 5,4 m pour un objectif sec x10 (ON 0,3) 0,378 m lobjectif x63 immersion huile (ON 1,4)
Dpend de louverture numrique : la profondeur de champ diminue lorsque louverture numrique augmente.
2ONnPdC =
LON dun microscope en transmission dpend des ON de lobjectif mais aussi du condenseur : le diaphragme douverture limite le cne dillumination et donc lON.
Ferm (fort contraste) Ouvert (forte rsolution)
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Gnralits
Illumination
Dtection
Aberrations et dtrioration de limage
Rsolution et acquisition dimage
Amlioration des contrastes
Ce qui vous attend F. Michel 22.05.13
Aberrations monochromatiques Sphrique Coma Astigmatisme Courbure de champs Distorsion
Aberrations chromatique Longitudinale Latrale
Aberrations et dtrioration de limage Les aberrations optiques sont des carts aux conditions de Gauss
Limage dun point nest pas un point ! On y reviendra plus tard
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Sphriques
Les rayons lumineux qui passent la priphrie ne convergent pas au mme endroit que les rayons qui passent au voisinage de laxe.
Aberrations et dtrioration de limage F. Michel 22.05.13
Coma
Limage dun point lorsque la lentille nest pas perpendiculaire laxe optique (tilt) apparat comme une comte.
Aberrations et dtrioration de limage F. Michel 22.05.13
Astigmatisme
Limage dun point hors axe apparat comme un btonnet; Il y a deux foyers dus lasymtrie du montage.
Aberrations et dtrioration de limage F. Michel 22.05.13
Gomtriques / courbure de champs
Limage dun plan nest pas un plan, mais une surface sphrique concave (lentille convergente)
ou convexe (lentille divergente).
Aberrations et dtrioration de limage F. Michel 22.05.13
Chromatiques (axiales et latrales)
La distance focale dune lentille dpend lindice optique n et donc de .
Aberrations et dtrioration de limage F. Michel 22.05.13
Correction des aberrations : limitation des bords des lentilles (diaphragme de champs, Gauss) lentilles non sphriques (difficiles usiner, optique adaptative) association de lentilles de courbures diffrentes (doublet, triplet).
Toutes ces aberrations peuvent tre corriges par associations de lentilles et/ou traitement des surfaces :
Les objectifs de microscope sont compliqus, fragiles et coteux.
Type dobjectifs
Aberrations Sphriques
Aberrations Chromatique
Courbure de champs
Achromat 1 Couleur 2 Couleurs Non Plan Achromat 1 Couleur 2 Couleurs Oui
Fluorite 2-3 Couleurs 2-3 Couleurs Non Plan Fluorite 3-4 Couleurs 2-4 Couleurs Oui
Plan Apochromat 3-4 Couleurs 4-5 Couleurs Oui
Aberrations et dtrioration de limage F. Michel 22.05.13
Gnralits
Illumination
Dtection
Aberrations et dtrioration de limage
Rsolution et acquisition dimage
Amlioration des contrastes
Ce qui vous attend F. Michel 22.05.13
Quantique
Electromagntique
Ondulatoire
Gomtrique
Interfrences
Chaque onde est caractrise par une phase et une amplitude. Deux ondes peuvent se superposer si elles ont la mme direction de
propagation et le mme plan de vibration, elles vont crer des interfrences.
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
Diffraction La lumire est diffracte quand elle rencontre un obstacle sa propagation
(exemple une ouverture), cela va changer sa phase et/ou son amplitude.
La diffraction de la lumire est variable en fonction de la taille de louverture et de la longueur donde.
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
Limage dun point nest pas un point !
Tout systme optique dgrade limage source travers une Fonction de Dispersion dun Point (PSF)
Systme
Optique
Plan focal
source
Tche dAiry
X
Z
X
Y
Rsolution et acquisition dimage
2 1 0 1 2
PSF
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La rsolution optique est la capacit dobtenir limage de deux points distincts en deux objets (PSF) individualisables.
)()(22,1
condONobjONd
+
Les deux tches de Airy apparatront comme spares uniquement si la
diffrence de niveau entre leurs courbes d'nergie est suffisamment
grande pour tre discerne par le dtecteur (il, camra) donc
spars d'une distance au moins gale au rayon du disque d'Airy :
Critres de Rayleigh
ONONR fluo 61,0
222,1
==
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
ON =0,12 ON =0,34 ON =0,87
La PSF et la rsolution sont fonction de lON
A 488nm 5X sec ON= 0.15 10X sec ON= 0.3
20X sec ON=0.8
40X huile ON=1.3
60X eau ON=1.2
60X huile ON=1.4
Rsolution XY en m 1.984 0.992 0.372 0.229 0.248 0.212
La rsolution dpend de lON et non du grandissement
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
Construction de limage
1 point
2 points
5 points
Source PSF
N points
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
Rsolution axiale (thorique)
Pour 488 nm
5X sec ON= 0.15
10X sec ON= 0.3
20X sec ON=0.8
40X huile ON=1.3
60X eau ON=1.2
60X huile ON=1.4
Rsolution XZ en m 43.378 10.844 1.525 0.878 0.901 0.757
8.6 17.5 53.1 58.8 64.5 67.1
2
2sin
2ONn
ONRxz
==
Pour mmoire
=
nON1sin
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
Dtection
Dans un microscope limage que lon observe est un agrandissement de limage virtuelle issue de lobjectif (2 tapes).
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
Essentiellement une fonction de lentille de projection avec un grossissement de
5x 20x.
On ajuste la distance inter-pupillaire sa morphologie, de mme chaque oculaire
doit tre rgl sa propre vue.
L'image est nette +/- 1 cm de la lentille de sortie (les illetons en caoutchoucs
servent crer cet espace et viter de
salir la lentille).
On peut ajouter dans le trajet optique des filtres ou des grilles de
positionnement ou de comptage.
Oculaires Rsolution et acquisition dimage
F. Michel 22.05.13
Camras CCD (Charged Coupled Device)
Caractristiques dune camra La rsolution spatiale La rsolution temporelle : Sensibilit, architecture du transfert, binning Le rendement quantique (q
Echantillonnage spatial
Lum
Exemple pour un 100X 1.4 dON 488 nm Rsolution 212 nm
taille du pixel optimum 92 nm Taille relle 6.45 m /100 donc 64.5 nm
Taille du pixel optimal (Nyquist-Shannon) = rsolution/2,3 : Cela permet davoir un minima entre les maximas quelque soit la position des pixels (cadre de lecture).
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
Ratio S/B et Dynamique Bruits de fond :
Bruit de Photon: d aux caractristiques de la lumire incidente
Bruit dobscurit : gnration de- par effet thermique
Bruit de lecture : gnr par llectronique de la camra
La dynamique : lie au bruit de fond et la capacit des puits de potentiels (binning) (ex : 5 105 e-/10 e- soit 5000:1 adapte une image 12 bits 4096 niveaux de gris)
Rsolution et acquisition dimage F. Michel 22.05.13
Gnralits
Illumination
Dtection
Aberrations et dtrioration de limage
Rsolution et acquisition dimage
Amlioration des contrastes
Ce qui vous attend F. Michel 22.05.13
Fond noir Contraste de phase
Contraste Interfrentiel Diffrentiel (DIC)
Autres mode dIllumination F. Michel 22.05.13
Fond noir Autres mode dIllumination
Surfaces rflchissantes Filtres
occultants
Combinaison dimages en fond noir et d illumination polarise Avec lautorisation du Dr Steve Edgley
http://www.pdn.cam.ac.uk/groups/edgleylab/index.html
Seul les photons diffracts/diffuss par lchantillon sont transmis et capts par lobjectif
du fait de lillumination structure.
Condenseur spcial
Photons diffuss
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Contraste de phase
Fritz Zernicke, Prix Nobel (1953).
Inventeur du contraste de phase
- Lil humain est uniquement capable de voir des diffrences dintensit (amplitude) ou de couleur ().
- Les objets biologiques microscopiques sont souvent trs transparents et donc peu contrasts car le flux lumineux transmis par les diffrentes parties des cellules est similaire.
- Par contre, lindice optique des diffrents compartiments cellulaires est trs variable ce qui induit des diffrences de vitesse des ondes donc des retards de phase des ondes.
- But : transformer des diffrences de phase en diffrences dintensit
Autres mode dIllumination F. Michel 22.05.13
Longueur donde ()
+ =
Dphasage de /4
Echantillon
Interfrences
Contraste de phase
En moyenne un chantillon biologique entraine un dphasage de /4 (/2 en cosinus).
les interfrences sont trop faibles pour induire un contraste dcelable.
Lumire directe
Lumire diffracte /2
3/4
0-2
Autres mode dIllumination F. Michel 22.05.13
Echantillon Lame de phase
Dphasage de /4 supplmentaire =
Contraste de phase
Ondes en opposition de
phase (/2)
Pour obtenir un contraste maximal, il faut crer linterfrence en dphasant la lumire diffracte uniquement de /2.
/2
3/4
0-2
Autres mode dIllumination F. Michel 22.05.13
Contraste de phase Condenseur
Anneau de phase Lame de phase
Objectif
Lumire diffracte Lumire
directe transmise
La lumire directe transmise (annulaire - jaune) est fortement attnue par le cercle de la lame de phase et va interfre avec la lumire diffracte (grise sur le
schma) par lchantillon pour former un contraste en noir et blanc (interfrences destructive (+/4) ou constructive (-/4) ).
On obtient donc un dphasage diffrentiel de /2.
Autres mode dIllumination F. Michel 22.05.13
Contraste interfrentiel diffrentiel :DIC (Nomarski) Les prismes de Wollaston sparent la lumire en deux faisceaux de polarisations
perpendiculaires (birfringence). Lorsquils sont recombins par le deuxime Wollaston, il y a des interfrences entre les deux rayons en fonction de la diffrence de leurs chemins
optiques. Il en rsulte une lumire grise si le trajet optique a t le mme, et blanche ou noire sil a t diffrent, donnant lillusion dun clairage rasant. Ce type de contraste donne un
effet de relief sur des prparations paisses (idal pour le patch-clamp).
Polariseur (45) Prpare la lumire
pour le premier Wollaston.
Prismes de Wollaston Spare la lumire incidente
en deux faisceaux de polarisation croise
Prismes de Wollaston Recombine les deux faisceaux de polarisation croise en un seul polarisation unique crant des interfrences et du contraste.
la position latrale du prisme influx sur lamplitude du contraste.
Condenseur Objectif Echantillon
Analyseur (135) Bloque la lumires transmise directe
Autres mode dIllumination F. Michel 22.05.13
Phase Compatible avec lutilisation de boite
plastique Sensible au chemin optique parcouru Halos (contraste noir/blanc) autour
des objets Insensible lorientation des
structures (contraste isotrope)
DIC Limit au verre
Sensible des variations dindice Pas de halos autour des objets Utilisation optimale de louverture numrique donc meilleure rsolution Sensible lorientation des
structures (effet pseudo-ombrage) Plus cher
Comparaison contraste de phase /DIC
Autres mode dIllumination F. Michel 22.05.13
Fin du premier round
Merci davoir tenu jusque l, Prochaine tape : la microscopie de fluorescence
Commentaires, remarques, amliorations : [email protected]
Quantique
Electromagntique
Ondulatoire
Gomtrique
F. Michel 22.05.13
WEB divers Molecular expressions http://micro.magnet.fsu.edu/index.html
Microscopy U (Nikon) : http://www.microscopyu.com Microscopy resource system (Olympus): http://www.olympusmicro.com/index.html
A whole world of microscopy knowledge (Zeiss): http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/index.html Wikipdia
Plate-formes dimagerie
PICSL http://www.picsl.univ-mrs.fr/ : MICROSCOPIE OPTIQUE (PDF indisponible) BIC http://www.bic.u-bordeaux2.fr/ : Microscopie pi-fluorescence et microscopie confocale (PDF) Membres du GDR2588 CNRS (microscopie fonctionnelle des systmes vivants) et
du RTmfm (Rseau technique de microscopie de fluorescence multidimensionnelle).
Cours Arnaud Serg (universit de la Mditerrane Marseille II) Yves Husson (Universit Joseph Fourrier Grenoble) Serge Monneret (Institut Fresnel, Marseille)
Maxime Dahan (Laboratoire Kastler Brossel, ENS) Franois Waharte (institut Curie, UMR144)
Handbooks
Fondamentaux doptique et dimagerie numrique lusage des microscopistes (C Cibert, ed. Cpadus) Handbook of biological confocal microscopy, third edition (JB. Pawley ed. Springer) Fundamentals of light microscopy and electronic imaging (DB. Murphy, ed Wiley-liss)
Sources et Ressources F. Michel 22.05.13
http://micro.magnet.fsu.edu/index.htmlhttp://www.microscopyu.com/http://www.olympusmicro.com/index.htmlhttp://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/index.htmlhttp://www.picsl.univ-mrs.fr/http://www.bic.u-bordeaux2.fr/http://www.gdr2588.cnrs.fr/http://rtmfm.ibl.fr/
Microscopie en transmission(Plein champs)et lments doptiqueDiapositive numro 2Diapositive numro 3Diapositive numro 4Diapositive numro 5GnralitsGnralitsGnralitsGnralitsGnralitsGnralitsGnralitsPhysiologie visuelle (rappels ?!?)Trajet optique : lentille (convergente)Diapositive numro 15Diapositive numro 16Diapositive numro 17GnralitsDiapositive numro 19Diapositive numro 20Diapositive numro 21Diapositive numro 22GnralitsDiapositive numro 24Diapositive numro 25IlluminationDiapositive numro 27Diapositive numro 28Diapositive numro 29Diapositive numro 30IlluminationIlluminationIlluminationIllumination IlluminationDiapositive numro 36DtectionDtectionDtectionDiapositive numro 40Diapositive numro 41Profondeur de ChampDiapositive numro 43Diapositive numro 44Diapositive numro 45Diapositive numro 46Diapositive numro 47Diapositive numro 48Diapositive numro 49Diapositive numro 50Diapositive numro 51Diapositive numro 52Diapositive numro 53Diapositive numro 54Diapositive numro 55Diapositive numro 56Diapositive numro 57Diapositive numro 58Diapositive numro 59Diapositive numro 60Diapositive numro 61Diapositive numro 62Diapositive numro 63Diapositive numro 64Diapositive numro 65Fond noirContraste de phaseDiapositive numro 68Diapositive numro 69Contraste de phaseDiapositive numro 71Diapositive numro 72Diapositive numro 73Diapositive numro 74
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