Diagnostic biologique de l’infection à HEV
XXème Colloque de Virologie
Versailles 25/11/2008
Jacques IzopetLaboratoire de Virologie
CHU de Toulouse & INSERM U563
Mr D John 62 ans Australien en France depuis 4 ans Consulte son médecin généraliste pour un ictère
ATCD : – diabète de type 2 sous metformine et diamicron
depuis 2 ans
Habitudes de vie: – consommation d’alcool 30 à 40 g/j– Habite sur une péniche sur le Canal du Midi
Fièvre à 38°C et céphalées Ictère depuis 2 j Prise de 1 g de paracétamol la veille de
l’hospitalisation
Biologie :– ASAT : 4500 UI/l– ALAT : 5000 UI/l– Phos Alc : N GT : 133 UI/l– TP : 26% CAT pratique ?
Afrique-Asie-Amérique centrale endémie élevée épidémies avec transmission
hydrique cas sporadiques
Pays industrialisés
cas sporadiques : autochtones >> importés
régions endémiques Boutrouille JCM 07 ; Mansuy JMV 08
Circonstances épidémiologiques
Exposition directe à un réservoir animal liée à une activité professionnelle ou de loisir
Habitudes alimentaires
Exposition environnementale
Facteurs de risque
Hépatite symptomatique : ictère, fièvre, asthénie, nausées, vomissements,…
Formes particulières : manifestations articulaires, thrombopénie
Formes asymptomatiques : élévation des ALAT
Circonstances cliniques
Femme enceinte
Hépatopathie chronique sous-jacente
Immunodépression thérapeutique : chimiothérapie anticancéreuse ou transplantation
Facteurs de gravité
Outils virologiques
Diagnostic direct
Dépistage génomiqueSangSelles
Diagnostic indirect
Dépistage sérologiqueIgGIgM
Cinétique des marqueurs
après infection
symptômes
10 20 30 40 50 60 jours 3 4 mois
Transaminases
IgM IgGvirémie
virus dans les selles
contage
Niveau d’endémie national ou régional recherche ou non des marqueurs
HEV en 1ère ligne
Tests disponibles au laboratoire
NABM : Anticorps anti-HEV : B70 ARN HEV : BHN 250
Dalton Lancet 07 ; De Silva JMV 08
Stratégie diagnostique
Tests sérologiques & antigènes utilisés
Génotype1, 2
1, 2
1
Ag recombinant
Peptide synthétique
Ag recombinant
Genelabs
Adaltis
MP Diagnostics
91-123
101-123II
619-660
573-660III
394-660
ORF 2.1
Trousses EIAgen IgM HEV Adaltis IgM HEV ELISA MP Diagnostics Assure HEV IgM Rapid test MP
DiagnosticsPanels
Panel A : 50 sérums ARN HEV (+), G3 Panel B : 406 sérums IgG ARN
HEV (-) anti-HEV (-)
Evaluation des tests IgM anti-HEV
Microplaque Adaltis
MicroplaqueMP Diagnostics
Echantillons ARN HEV (+)
941644545Total (n=50)
544545Negatif (n=9)
437239140Positif (n=41)
négatifpositifnégatifpositifnégatifpositif
Test rapideMP Diagnostics
IgM anti-HEV
anti-HEV IgG
Performance
97.810010082Test rapide
MP Diagnostics
98.595.799.588Microplaque
MP Diagnostics
98.810010090Microplaqu
eAdaltis
Spécificité %
Sensibilité %
VPN %
VPP %
Quantification des IgG dilutions de raison 2 / UA ou
UI
Avidité des IgG urée 5M
IgA
Western-blot
Tests sérologiques spécialisés
Rendall JMV 08 ; Zhang JMV 02 ; Takahashi JCM 05
Détection ARN HEV : RT-PCR conventionnelle RT-PCR temps réel
tests non commercialisés / protocoles validés / EEQ essentiel amorces / sonde ORF2 limite de détection 500 c/ml
Mansuy JCM 04 ; Mansuy JMV 04
Quantification ARN HEV : RT-PCR temps réel
Caractérisation ARN HEV par séquençage
Tests moléculaires
Sang : prélèvement de choix
Selles : gain de 15 % vs sang uniquement
Salive : rarement positif
Echantillons pertinents
0
5
10
15
20
25
0
50
100
150
200
250
300
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
2003 2004 2005 2006 2007 2003 to 07
Trimesters
Periods
Number of cases Rainfall (mm)
Hépatites E aiguës en Midi-Pyrénées
Mansuy JCV 08
Données cliniques
Démographie
H/F : 41/21Age : 58 (20-82)
Symptômes
JaunisseAsthénieFièvreArthromyalgieDouleur abdominaleCéphaléeNauséeAnorexiePerte de poidsDiarrhéeEruption
(%)
67.740.327.421
11.39.79.78.16.54.83.2
Evolution chronique dans 2 situations : Chimiothérapie anticancéreuse
Peron JGH 06 ; Tamura Hepatol Res 07 Transplantation
Kamar NEJM 08 ; Haagsma Liver Transpl 08
Progression vers la cirrhose possible :Gerolami NEJM 08 ; Kamar AJT 08
Hépatites E chez l’immunodéprimé
A
B C
Lésions histologiques
Hépatite aiguë
Hépatite chronique après
15 mois d’évolution
Cirrhose E après3 ans d’évolution
Kamar AJT 08
Diversité du génotype 3
Capside
ORF3
ORF2
ORF1
M Y P V X H R
HV ORF1 RdRp ORF2
Région hypervariable Polymérase
Capside
région ORF2 348nt
3f
3b
3c
3e
21
43
Souches humaines localesSouches porcines
ORF1Région RdRp383 nt
0.1
AF444002-1b-PakistanL25595-1b-ChinaM80581-1b-PakistanL08816-1b-ChinaM94177-1b-China
D11092-1b-ChinaD11093-1b-China
X98292-1b-ChinaAF076239-1a-IndiaAF459438-1a-India
D10330-1a-BurmaM73218-1a-Burma
AF051830-1a-NepalX99441-1a-India
AF185822-1a-PakistanAY204877-1e-Chad
AY230202-1d-MoroccoM74506-2-Mexico
AB091395-4c-JapanAB099347-4c-JapanAB200239-4c-JapanAB09781-4c-Japan
AB080575-4c-JapanAB097811-4cJapan-swine
AB074915-4c-JapanAB074917-4c-Japan
AB161718-4c-JapanAB161717-4c-Japan
AB108537-4e-ChinaAJ272108-4d-China
AY594199-4d-China-swineAB189071-3b-Japan-deerAB189073-3b-JapanAB189074-3b-japanAB189075-3b-JapanAB189072-3b-Japan
AB189070-3b-Japan-boarAP003430-3b-Japan
AB091394-3b-JapanTLS39
AB074918-3a-JapanAB074920-3a-Japan
AB089824-3a-japanAF060668-3a-USA
AF082843-3a-USA-swineAB073912-3a-Japan-swine
AY115488-3j-Canada-swineTLS41
TLS40AF455784-3-Kyrgyzstan-swine
TLS38AB248520-3e-Japan
TLS42AB248522-3e-Japan-swine
TLS36TLS35
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TLS32TLS33
TLS34TLS28
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TLS10TLS11TLS14
TLS13TLS6
TLS8TLS3TLS2
TLS1TLS5
TLS4TLS7TLS9
TLS18TLS18
TLS16TLS15
TLS30TLS29
TLS27TLS26
TLS25TLS24
TLS23TLS22
TLS21TLS20
100
94
91
78
89
98100
1
2
43
Souches humaines localesSouches porcines
3f
3b
3c3e
ORF1Région HVR
345 nt
0.1
AF444002-1b-PakistanM80581-1b-Pakistan
L25595-1b-ChinaD11092-1b-China
L08816-1b-ChinaM94177-1b-ChinaD1109-1b-ChinaX98292-1b-ChinaAF076239-1a-India
AF459438-1a-IndiaX99441-1a-IndiaAF051830-1a-NepalM73218-1a-BurmaD10330-1a-Burma
AF185822-1a-PakistanAY204877-1e-Chad
AY230202-1d-MoroccoM74506-2a-Mexico
AB091395-4b-JapanAB200239-4c-JapanAB099347-4b-JapanAB097811-4b-Japan-swine
AB097812-4b-JapanAB080575-4b-Japan
AB074917-4c-JapanAB161718-4c-JapanAB161717-4c-Japan
AB074915-4c-JapanAJ272108-4e-China
AY594199-4d-China-swineAB108537-4e-China
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AB248520-3e-JapanTLS42
AB189074-3b-JapanAB189075-3b-JapanAB189073-3b-JapanAB189070-3b-Japan-boar
AP003430-3b-JapanAB091394-3b-Japan
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TLS22TLS20TLS29
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TLS17TLS18
TLS16TLS15
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TLS13TLS14TLS12
TLS10TLS11TLS09
TLS02TLS03
TLS01
100
100
99
78
100
100
75
12
4
3
Souches humaines localesSouches porcines
3f
3b
3c
3e
0.1
AB189071-3b-Japan-deer
AB189072-3b-Japan
AB189070-3b-Japan-boar
AP003430-3b-Japan
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AF060668-3a-USA
AF082843-3a-USA-swine
AY115488-3j-Canada-swine
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AB248522-3e-Japan-swine
AB248521-3e-Japan-swine
AB248520-3e-Japan
TLS25AF455784-GC-3g-kyrgyrztan-swine
AB099347-4c-Japan
AB200239-4c-Japan
AB097812-4c-Japan
AB097811-4c-Japan-swine
AB080575-4c-Japan
AB074917-4c-Japan
AB161718-4c-Japan
AB161717-4c-Japan
AB074915-4c-Japan
AB108537-4g-China
AJ272108-4d-China
AY594199-4d-China-swine
M74506-2a-Mexico
AY204877-1e-Chad
AY230202-1d-Morocco
L08816-1b-China
M94177-1b-China
L25595-1b-China
D11092-1b-China
D11093-1b-China
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X99441-1a-India
AF076239-1a-India
AF459438-1a-India
D10330-1a-Burma
M73218-1a-Burma
Génome complet100
100
100
100
100
100100
100
100
100
100
93
100
100
100
3
4
1
2
Souches humaines localesSouches porcines
3f3e
3b
3a
Abravanel EID sous presse
Transmission nosocomiale ?
Mansuy CID sous presse
HEV constitue un pathogène émergent pour les pays industrialisés justifiant une stratégie diagnostique adéquate : sérologie + BM
Transmission zoonotique hautement probable mais modes de transmission encore inconnus
projet multidisciplinaire ANR HEVZOONEPI
Formes chroniques : modèle inattendu pour étudier les mécanismes de persistance virale
Synthèse
Remerciements
Laboratoire de Virologie
Florence AbravanelMartine Dubois
Jean-Michel Mansuy
Services d’Hépatologie& Médecine Interne
Jean-Marie PéronLaurent Alric
Service de Néphrologie & Transplantation
Nassim KamarLionel Rostaing
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