Diagnostic biologique de l’infection à HEV

XXème Colloque de Virologie

Versailles 25/11/2008

Jacques IzopetLaboratoire de Virologie

CHU de Toulouse & INSERM U563

Mr D John 62 ans Australien en France depuis 4 ans Consulte son médecin généraliste pour un ictère

ATCD : – diabète de type 2 sous metformine et diamicron

depuis 2 ans

Habitudes de vie: – consommation d’alcool 30 à 40 g/j– Habite sur une péniche sur le Canal du Midi

Fièvre à 38°C et céphalées Ictère depuis 2 j Prise de 1 g de paracétamol la veille de

l’hospitalisation

Biologie :– ASAT : 4500 UI/l– ALAT : 5000 UI/l– Phos Alc : N GT : 133 UI/l– TP : 26% CAT pratique ?

Afrique-Asie-Amérique centrale endémie élevée épidémies avec transmission

hydrique cas sporadiques

Pays industrialisés

cas sporadiques : autochtones >> importés

régions endémiques Boutrouille JCM 07 ; Mansuy JMV 08

Circonstances épidémiologiques

Exposition directe à un réservoir animal liée à une activité professionnelle ou de loisir

Habitudes alimentaires

Exposition environnementale

Facteurs de risque

Hépatite symptomatique : ictère, fièvre, asthénie, nausées, vomissements,…

Formes particulières : manifestations articulaires, thrombopénie

Formes asymptomatiques : élévation des ALAT

Circonstances cliniques

Femme enceinte

Hépatopathie chronique sous-jacente

Immunodépression thérapeutique : chimiothérapie anticancéreuse ou transplantation

Facteurs de gravité

Outils virologiques

Diagnostic direct

Dépistage génomiqueSangSelles

Diagnostic indirect

Dépistage sérologiqueIgGIgM

Cinétique des marqueurs

après infection

symptômes

10 20 30 40 50 60 jours 3 4 mois

Transaminases

IgM IgGvirémie

virus dans les selles

contage

Niveau d’endémie national ou régional recherche ou non des marqueurs

HEV en 1ère ligne

Tests disponibles au laboratoire

NABM : Anticorps anti-HEV : B70 ARN HEV : BHN 250

Dalton Lancet 07 ; De Silva JMV 08

Stratégie diagnostique

Tests sérologiques & antigènes utilisés

Génotype1, 2

1, 2

1

Ag recombinant

Peptide synthétique

Ag recombinant

Genelabs

Adaltis

MP Diagnostics

91-123

101-123II

619-660

573-660III

394-660

ORF 2.1

Trousses EIAgen IgM HEV Adaltis IgM HEV ELISA MP Diagnostics Assure HEV IgM Rapid test MP

DiagnosticsPanels

Panel A : 50 sérums ARN HEV (+), G3 Panel B : 406 sérums IgG ARN

HEV (-) anti-HEV (-)

Evaluation des tests IgM anti-HEV

Microplaque Adaltis

MicroplaqueMP Diagnostics

Echantillons ARN HEV (+)

941644545Total (n=50)

544545Negatif (n=9)

437239140Positif (n=41)

négatifpositifnégatifpositifnégatifpositif

Test rapideMP Diagnostics

IgM anti-HEV

anti-HEV IgG

Performance

97.810010082Test rapide

MP Diagnostics

98.595.799.588Microplaque

MP Diagnostics

98.810010090Microplaqu

eAdaltis

Spécificité %

Sensibilité %

VPN %

VPP %

Quantification des IgG dilutions de raison 2 / UA ou

UI

Avidité des IgG urée 5M

IgA

Western-blot

Tests sérologiques spécialisés

Rendall JMV 08 ; Zhang JMV 02 ; Takahashi JCM 05

Détection ARN HEV : RT-PCR conventionnelle RT-PCR temps réel

tests non commercialisés / protocoles validés / EEQ essentiel amorces / sonde ORF2 limite de détection 500 c/ml

Mansuy JCM 04 ; Mansuy JMV 04

Quantification ARN HEV : RT-PCR temps réel

Caractérisation ARN HEV par séquençage

Tests moléculaires

Sang : prélèvement de choix

Selles : gain de 15 % vs sang uniquement

Salive : rarement positif

Echantillons pertinents

0

5

10

15

20

25

0

50

100

150

200

250

300

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

2003 2004 2005 2006 2007 2003 to 07

Trimesters

Periods

Number of cases Rainfall (mm)

Hépatites E aiguës en Midi-Pyrénées

Mansuy JCV 08

Données cliniques

Démographie

H/F : 41/21Age : 58 (20-82)

Symptômes

JaunisseAsthénieFièvreArthromyalgieDouleur abdominaleCéphaléeNauséeAnorexiePerte de poidsDiarrhéeEruption

(%)

67.740.327.421

11.39.79.78.16.54.83.2

Evolution chronique dans 2 situations : Chimiothérapie anticancéreuse

Peron JGH 06 ; Tamura Hepatol Res 07 Transplantation

Kamar NEJM 08 ; Haagsma Liver Transpl 08

Progression vers la cirrhose possible :Gerolami NEJM 08 ; Kamar AJT 08

Hépatites E chez l’immunodéprimé

A

B C

Lésions histologiques

Hépatite aiguë

Hépatite chronique après

15 mois d’évolution

Cirrhose E après3 ans d’évolution

Kamar AJT 08

Diversité du génotype 3

Capside

ORF3

ORF2

ORF1

M Y P V X H R

HV ORF1 RdRp ORF2

Région hypervariable Polymérase

Capside

région ORF2 348nt

3f

3b

3c

3e

21

43

Souches humaines localesSouches porcines

ORF1Région RdRp383 nt

0.1

AF444002-1b-PakistanL25595-1b-ChinaM80581-1b-PakistanL08816-1b-ChinaM94177-1b-China

D11092-1b-ChinaD11093-1b-China

X98292-1b-ChinaAF076239-1a-IndiaAF459438-1a-India

D10330-1a-BurmaM73218-1a-Burma

AF051830-1a-NepalX99441-1a-India

AF185822-1a-PakistanAY204877-1e-Chad

AY230202-1d-MoroccoM74506-2-Mexico

AB091395-4c-JapanAB099347-4c-JapanAB200239-4c-JapanAB09781-4c-Japan

AB080575-4c-JapanAB097811-4cJapan-swine

AB074915-4c-JapanAB074917-4c-Japan

AB161718-4c-JapanAB161717-4c-Japan

AB108537-4e-ChinaAJ272108-4d-China

AY594199-4d-China-swineAB189071-3b-Japan-deerAB189073-3b-JapanAB189074-3b-japanAB189075-3b-JapanAB189072-3b-Japan

AB189070-3b-Japan-boarAP003430-3b-Japan

AB091394-3b-JapanTLS39

AB074918-3a-JapanAB074920-3a-Japan

AB089824-3a-japanAF060668-3a-USA

AF082843-3a-USA-swineAB073912-3a-Japan-swine

AY115488-3j-Canada-swineTLS41

TLS40AF455784-3-Kyrgyzstan-swine

TLS38AB248520-3e-Japan

TLS42AB248522-3e-Japan-swine

TLS36TLS35

TLS37TLS31

TLS32TLS33

TLS34TLS28

TLS19TLS12

TLS10TLS11TLS14

TLS13TLS6

TLS8TLS3TLS2

TLS1TLS5

TLS4TLS7TLS9

TLS18TLS18

TLS16TLS15

TLS30TLS29

TLS27TLS26

TLS25TLS24

TLS23TLS22

TLS21TLS20

100

94

91

78

89

98100

1

2

43

Souches humaines localesSouches porcines

3f

3b

3c3e

ORF1Région HVR

345 nt

0.1

AF444002-1b-PakistanM80581-1b-Pakistan

L25595-1b-ChinaD11092-1b-China

L08816-1b-ChinaM94177-1b-ChinaD1109-1b-ChinaX98292-1b-ChinaAF076239-1a-India

AF459438-1a-IndiaX99441-1a-IndiaAF051830-1a-NepalM73218-1a-BurmaD10330-1a-Burma

AF185822-1a-PakistanAY204877-1e-Chad

AY230202-1d-MoroccoM74506-2a-Mexico

AB091395-4b-JapanAB200239-4c-JapanAB099347-4b-JapanAB097811-4b-Japan-swine

AB097812-4b-JapanAB080575-4b-Japan

AB074917-4c-JapanAB161718-4c-JapanAB161717-4c-Japan

AB074915-4c-JapanAJ272108-4e-China

AY594199-4d-China-swineAB108537-4e-China

AF455784-3g-Kyrgyrstan-swineAB248522-3e-Japan-swine

AB248520-3e-JapanTLS42

AB189074-3b-JapanAB189075-3b-JapanAB189073-3b-JapanAB189070-3b-Japan-boar

AP003430-3b-JapanAB091394-3b-Japan

AB073912-3b-Japan-swineAB074918-3a-Japan

AB074920-3a-JapanAB089824-3a-Japan

AF082843-3a-USA-swineAF060668-3a-USA

AY115488-3j-Canada-swineTLS39

TLS41TLS40

TLS38TLS32

TLS33TLS34

TLS28TLS31

TLS36TLS37

TLS35TLS25

TLS26TLS24

TLS23TLS21

TLS22TLS20TLS29

TLS30TLSE19TLS27

TLS17TLS18

TLS16TLS15

TLS04TLS05TLS07

TLS08TLS06

TLS13TLS14TLS12

TLS10TLS11TLS09

TLS02TLS03

TLS01

100

100

99

78

100

100

75

12

4

3

Souches humaines localesSouches porcines

3f

3b

3c

3e

0.1

AB189071-3b-Japan-deer

AB189072-3b-Japan

AB189070-3b-Japan-boar

AP003430-3b-Japan

AB091394-3b-Japan

AB073912-3b-Japan-swine

AB074918-3a-Japan

AB074920-3a-Japan

AB089824-3a-Japan

AF060668-3a-USA

AF082843-3a-USA-swine

AY115488-3j-Canada-swine

AB290312-3-Mongolia-swine

AB248522-3e-Japan-swine

AB248521-3e-Japan-swine

AB248520-3e-Japan

TLS25AF455784-GC-3g-kyrgyrztan-swine

AB099347-4c-Japan

AB200239-4c-Japan

AB097812-4c-Japan

AB097811-4c-Japan-swine

AB080575-4c-Japan

AB074917-4c-Japan

AB161718-4c-Japan

AB161717-4c-Japan

AB074915-4c-Japan

AB108537-4g-China

AJ272108-4d-China

AY594199-4d-China-swine

M74506-2a-Mexico

AY204877-1e-Chad

AY230202-1d-Morocco

L08816-1b-China

M94177-1b-China

L25595-1b-China

D11092-1b-China

D11093-1b-China

X98292-1b-China

AF185822-1a-Pakistan

AF051830-1a-Nepal

X99441-1a-India

AF076239-1a-India

AF459438-1a-India

D10330-1a-Burma

M73218-1a-Burma

Génome complet100

100

100

100

100

100100

100

100

100

100

93

100

100

100

3

4

1

2

Souches humaines localesSouches porcines

3f3e

3b

3a

Abravanel EID sous presse

Transmission nosocomiale ?

Mansuy CID sous presse

HEV constitue un pathogène émergent pour les pays industrialisés justifiant une stratégie diagnostique adéquate : sérologie + BM

Transmission zoonotique hautement probable mais modes de transmission encore inconnus

projet multidisciplinaire ANR HEVZOONEPI

Formes chroniques : modèle inattendu pour étudier les mécanismes de persistance virale

Synthèse

Remerciements

Laboratoire de Virologie

Florence AbravanelMartine Dubois

Jean-Michel Mansuy

Services d’Hépatologie& Médecine Interne

Jean-Marie PéronLaurent Alric

Service de Néphrologie & Transplantation

Nassim KamarLionel Rostaing