rPar : S / Abdessemed

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Principe : ce test est utilisé pour la mise en évidence de la fixation in vivo d’immunoglobulines ou de complément sur les hématies.Il est effectué pour le diagnostic de la

maladie hémolytique du nouveau-né (MHNN) et les anémies hémolytiques auto immune (AHAI).

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LE TEST DE COOMBS DIRECT

5 ml de sang sur tube citraté.

LE TEST DE COOMBSINDIRECT

5 ml de sang sur tube sec.

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1. centrifuger le sang total a 3000trs/min pendant 5minutes.

2. éliminer le plasma, et laver les hématies 6fois avec l’eau physiologique.

3. préparer une suspension a 5% dans l’eau physiologique.

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4. dans un tube a hémolyse, déposer deux gouttes de la suspension et une goutte de l’antiglobuline polyvalente.

5. mélanger et centrifuger a 1000trs/min pendant une minute.

6. ne pas oublier le témoin, utiliser simultanément :

Hématies O RH+ sensibilisé par un anti D mis en présence d’antiglobuline.

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Observer l’agglutination en décollant doucement la pastille d’hématies au fond du tube.

Une réaction positive est caractérisée par une agglutination qui signifie une fixation des Anticorps sur les hématies

Absence d’agglutination = réaction négative

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Principe : c’est un test permettant la recherche et l’identification d’Allo-Anticorps présent dans le sérum du sujet à l’aide de globules rouges de structure Antigénique connue.

Il est effectué pour la recherche d’agglutinines irrégulières (RAI), Le phénotypage.

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1. Récupérer le sérum par centrifugation du sang a analyser a une vitesse de 3000trs/min pendant 5minutes.

2.laver trois fois les hématies de groupe O et préparer une suspension a 5% dans l’eau physiologique.

3.Déposer dans une tube a hémolyse une goutte de la suspension et 2goutte a sérum a tester.

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4. Mélanger le tube et incubé a 37C pendant 45 minutes

5. Laver les hématies 3 fois avec l’eau physiologique puis décanter complètement l’eau de lavage.

6. Ajouter une goutte d’antiglobulinepolyvalente.

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7. Mélanger et centrifuger a une vitesse de 1000-2000 trs/min pendant une minute.

8. Observer l’agglutination en décollant doucement la pastille d’hématies au fond du tube.

9. Aux tube donnant une réaction négative, on ajoute une goutte de suspension d’hématies sensibilisées avec une IgG pour valider les réactions.

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Une hémolyse ou une agglutination, après incubation a 37C = réaction positive.

Une hémolyse ou une agglutination, après adition d’Antiglobuline = réaction positive.

Réaction négative, absence d’hémolyse ou d’agglutination, sous réserve d’une validation par l’agglutination d’hématies sensibilisées a l’IgG sinon le test doit être refait.

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