• Techniques usuelles

• Techniques particulières

Techniques anatomo-pathologiques

Mode de prélèvement :

Punch biopsie

• Lésion récente non modifiée par la

thérapeutique

• Profonde avec un fragment d’hypoderme

Biopsie cutanée

Exérèse cutanée

Technique standard

• Fixation

• Examen

macroscopique

Prélèvements en croix

• Bloc de

paraffine

• Bloc

• Lame blanche

• Lame colorée

Lame colorée (HES)

Techniques complémentaires

• Colorations spéciales

• Immunofluorescence Directe

• Cytodiagnostic de Tzanck

• Immunohistochimie

Colorations spéciales

• PAS : membrane basale, mycoses

• Bleu alcian : dépôt de mucines

• Colorations argentiques

• Orcéine : fibres élastiques

• Perls : dépôts hémosidériniques

PAS (Periodic-Acid-Schiff)

Bleu Alcian

Coloration par l’orcéine (fibres élastiques)

Perls

HES

Immunofluorescence Directe

• Indication : dermatoses vésiculo-bulleuse/lupus

• Biopsie en peau saine périlésionelle en zone exposée et non-exposée

• Coupes à congélation

• Panel 4 Ac : IgG, IgM, IgA, C3

• Liquide de Baker

Immunofluorescence indirecte

(IFI)

• Méthode: mise en

évidence des

antigènes contenus

par réaction Ag-Ac

avec révélation par

un substrat

fluorescent

IF: conditions techniques

• Prélèvement frais

• Horaires (prévenir le labo d’anapath)

• Les lames ne se conservent pas

• Examen sur microscope particulier

(avec lampe à UV)

Lésion bulleuse

Grande bulle flasque sujet âgé

Cytodiagnostic de Tzanck

• Indication : dermatoses vésiculeuses et

bulleuses

• Ouverture toit de la bulle au vaccinostyle et

grattage du fond, étalement et coloration de

Giemsa

• Recherche d’effet cytopathogène viral ou de

cellule acantholytique

Techniques complémentaires:

immunomarquage

• À partir d’une lame

blanche

• Mise en évidence

d’une protéine par

réaction Ag-AC

• Révélé par un

chromogène

Immunohistochimie (IHC)

• Mise en évidence des Ag contenus

dans un tissu par réaction Ag-Ac,

révélation par substrat coloré

• Prélèvement fixé

• Lecture sur microscope standard

• Possibilité d’études a posteriori

• Les lames se conservent

Immunohistochimie (suite)

• Exemples: mise en évidence…

– de Cytokératine dans les cellules d’un

carcinome

– d’Actine dans les cellules d’un sarcome

musculaire

– Ag viral dans les cellules d’un lymphome

induit par l’EBV

CD3

CD20

Tumeur peu différenciée?...

Marqueur neuro-endocrine

(chromogranine)

Conclusion:

Carcinome neuro-endocrine

Techniques complémentaires :

hybridation in situ

• Mise en évidence d’un

fragment de chromosome

qui code pour une

protéine particulière

• Sur lame blanche

• Matériel fixé

• Révélation par

fluorescence (FISH) ou

par un chromogène

(CISH)

A B

C D

Hybridation in situ (sonde EBER)

Infiltrat lymphoïde induit par le virus EBV

Biologie moléculaire

et cytométrie de flux

• Examens pratiqués au laboratoire d’hématologie

• +/- passage par le labo d’Anatomie Pathologique pour sélectionner le prélèvement adéquat

• Mise en évidence du caractère clonal du tissu prélevé (recherche de lymphome)

• Sur matériel frais

Techniques cytogénétique

FISH : recherche d’amplification du gène

(prélèvement frais)

Microscopie électronique

• Technique lourde, coûteuse

• Résultat tardif

• Indications très précises, de plus en

plus rares

• Prévenir à l’avance

• Immersion immédiate dans un tube de

gutaraldéhyde

Frais? Fixé?

Matériel fixé Matériel frais

Immunohistochimie Immunofluorescence

Hybridation in situ Biologie moléculaire

Cytométrie de flux

Microscopie

électronique