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Stratégie analytique lors de la prise en charge des cas de
soumission chimique
Julie Maublanc
SFTA - Réunion des Jeunes Scientifiques 11 juin 2013
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GÉNÉRALITÉS
• Soumission chimique =« administration à des fins criminelles ou délictuelles d’un ou plusieurs produits psychoactifs, à l’insu de la victime
ou sous la menace »
• Objectif = altération de la vigilance, des • Objectif = altération de la vigilance, des capacités de jugement et du libre arbitre
• Véhicules▫ Boissons alcoolisées ou non▫ Aliments
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• Trois catégories de personnes particulièrement vulnérables
▫ les femmes → viols, ▫ les enfants → actes de pédophilie ou sédation,
GÉNÉRALITÉS
▫ les enfants → actes de pédophilie ou sédation,▫ les personnes âgées → vols, extorsions
• Agresseurs = souvent des proches ou des membres de la famille
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• Deux types de situations distinctes :
▫ les victimes « endormies » � sédation ou troubles de conscience suffisants pour compromettre toute résistance ou pour «
GÉNÉRALITÉS
pour compromettre toute résistance ou pour « avoir la paix »,
▫ les victimes « actives » � conscientes mais soumises ou désinhibées
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PRISE EN CHARGE
• Rapide +++
• Doit comporter :
▫ Le recueil du/des témoignage(s)
▫ Un examen physique
▫ Une évaluation de l’état psychologique
▫ La réalisation de prélèvements
• Suivi psychologique et social à plus long terme
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PRÉLÈVEMENTS
• Réalisation précoce
▫ ADN
▫ ToxicologiquesSang 2 x 10 mL sur tubes EDTA� Sang → 2 x 10 mL sur tubes EDTA
� Urine → 2 x 30 mL
� Cheveux → 4 mèches
� Accompagnés d’une fiche de renseignements
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QUELLES SUBSTANCES RECHERCHER EN PRIORITÉ ?
Selon les signes cliniques
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DesinhibitionNeuroleptiques
AmphétaminesBZDSédation
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GHBCannabis Amnésie
HallucinationsLSD
AmphétaminesBZDEthanol
Kétamine
SédationNeuroleptiques
sédatifsAntihistaminiques
Opioïdes Anti-cholinergiques
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QUELLES SUBSTANCES RECHERCHER EN PRIORITÉ ?Selon le délai entre les faits et la prise en charge
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• Sang si < 1 semaine• Urine si < 2 semaines• Au-delà → cheveux
QUELLES SUBSTANCES RECHERCHER EN PRIORITÉ ?
• Pour élargir fenêtre de détection, utilisation de techniques analytiques avec une importante sensibilité
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immunochimietechniques
chromatographiques
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PLUSIEURS DIFFICULTÉS ANALYTIQUES
• Multiplicité et diversité des molécules devant être recherchées
éthanol
anesthésiques
antihistaminiques H1neuroleptiques
hypnotiquesbenzodiazépines
• À partir d’une quantité limitée d’échantillons
• À de faibles concentrations
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hallucinogènes ecstasyscannabis
anesthésiques (GHB, kétamine)
neuroleptiquessédatifs
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OBJECTIFS
• 1 - développer une méthode de recherche de psychotropes en CL-SM/SM,▫ dans les cheveux, ▫ puis dans le sang et l’urine
• 2 - obtenir des LDD et LDQ faibles, ▫ pg/mg de cheveux ▫ µg/L de sang ou d’urine.
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OBJECTIFS
• 1 - développer une méthode de recherche de psychotropes en CL-SM/SM,▫ dans les cheveux, ▫ puis dans le sang et l’urine
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• 2 - obtenir des LDD et LDQ faibles, ▫ pg/mg de cheveux ▫ µg/L de sang ou d’urine.
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• Détection et quantification simultanée des 35 principaux psychotropes utilisés en soumission chimique :
alimémazine, alprazolam, bromazépam, buprénorphine, clobazam, clonazépam, 7-amino-clonazépam, cyamémazine, diazépam,
diphenhydramine, doxylamine, flunitrazépam, 7-amino-
PSYCHOTROPES - CHEVEUX
diphenhydramine, doxylamine, flunitrazépam, 7-amino-flunitrazépam, halopéridol, hydroxyzine, kétamine,
lévomépromazine, loprazolam, lorazépam, lormétazépam, LSD, méthadone, midazolam, niaprazine, nordazépam, oxazépam,
prazépam, propoxyphène, scopolamine,témazépam, tétrazépam, tramadol, trazolam, zolpidem et zopiclone
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• Décontamination▫ But : éliminer contamination externe▫ Protocole : 2 x 2 min dans eau
puis 2 x 1 min dans dichlorométhane
• Segmentation▫ But : différencier une prise unique d’un traitement
PSYCHOTROPES - CHEVEUX
▫ But : différencier une prise unique d’un traitement chronique▫ Adapter selon le délai entre les faits et les prélèvements
• Section fine▫ < 1 mm▫ À l’aide de ciseaux
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PSYCHOTROPES - CHEVEUX
50 mg d’échantillon
EI : buprénorphine-d4, flunitrazépam-d7, LSD-d3, méthadone-d9 et scopolamine-d3+ 3 mL de KH2PO4 pH 5
centrifugation
Agitation planaire16hTempérature ambiante
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70 µL TF/ACN (90/10)
Évaporation
Flux d’azote, à T°ambiante
agitation
centrifugation
Élimination
+ 1 mL de NaOH+ 5 mL de dichlorométhane/éther (70/30)
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• Chromatographie▫ 2 pompes Perkin Elmer series 200 micro LC pump▫ Injecteur automatique Perkin Elmer series 200 thermostaté à 9°C▫ Colonne = Atlantis T3, 2,1 x 150 mm, 3 µm (Waters™)
• Spectrométrie de masse en tandem
PSYCHOTROPES - CHEVEUX
• Spectrométrie de masse en tandem▫ 3200 QTRAP (AB Sciex™)▫ Source ESI en mode positif▫ Analyseur : triple quadripôle▫ Acquisition :
� mode scheduled MRM� 2 transitions par molécule
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PSYCHOTROPES - CHEVEUX
Phase mobile A : tampon formiate d’ammonium 2mM pH 3Phase mobile B : acétonitrile avec 10% de phase A
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• Données de validation :
▫ Absence d’effet de matrice
▫ Linéarité : de la LDQ à 500 pg/mg
▫ LDD et LDQ de 0,5 à 5 pg/mg (excepté pour lorazépam :
PSYCHOTROPES - CHEVEUX
▫ LDD et LDQ de 0,5 à 5 pg/mg (excepté pour lorazépam :
10 pg/mg)
▫ Répétabilité et fidélité intermédiaire :
� CV% et biais relatif < 25 % à la LDQ� CV% et biais relatif < 20 % à la C2 et la Cmax
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Utilisation en routine
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OBJECTIFS
• 1 - développer une méthode de recherche de psychotropes en CL-SM/SM,▫ dans les cheveux, ▫ puis dans le sang et l’urine
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• 2 - obtenir des LDD et LDQ faibles, ▫ pg/mg de cheveux ▫ µg/L de sang ou d’urine.
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• Liste molécules ▫ 34 psychotropes précédents + 18 métabolites
1-hydroxymidazolam, 2-oxo-3-hydroxy-LSD, 3-hydroxybromazépam, 4-hydroxymidazolam, cétirizine, déhydronorkétamine, EDDP,
halopéridol réduit, hydroxyalprazolam, hydroxytriazolam, iso-LSD,
PSYCHOTROPES - SANG ET URINE
halopéridol réduit, hydroxyalprazolam, hydroxytriazolam, iso-LSD, norbuprénorphine, norclobazam, nor-iso-LSD, norkétamine,
nor-LSD, norpropoxyphène, O-desméthyltramadol
• → élargissement de la fenêtre de détection
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• Pré-traitement
▫ Échantillons sanguins� 1 mL de sang� + 2 mL d’ACN
▫ Échantillons urinaires� 1 mL d’urine� + 20 µL de β-glucuronidase+ 250 µL de tampon
PSYCHOTROPES - SANG ET URINE
� + 250 µL de tampon acétate de sodium pH 4,8
� 1 h au bain-marie à 56 °C
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Précipitation des protéines
Libération des formes glucuro- et sulfo-conjuguées
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• extraction en phase solide sur cartouches Oasis HLB(Waters™)
PSYCHOTROPES - SANG ET URINE
2 mL de MeOH2mL d’H2O
Échantillon
2 mL d’H2O3 mL d’H2O/MeOH
3 mL de dichlorométhane/éther
(70/30)
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22
Conditionnement Dépôt et lavage Élution
Échantillon+ 4 mLd’H2O
70 µL TF/ACN (90/10)
Évaporation
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• Effet de matrice ▫ = compétition d’ionisation entre des molécules endogènes et les molécules d’intérêt
PSYCHOTROPES - SANG ET URINE
HLBInteraction hydrophobe
MCXInteraction hydrophobe
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HLB• Interaction hydrophobe
MCX• Interaction hydrophobe• + échange de cations
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• Extraction retenue : SPE sur cartouches Oasis MCX (Waters™)
PSYCHOTROPES - SANG ET URINE
2 mL de MeOH3 mL de KH2PO4
Échantillon+ 4 mL de
1,5 mL d’HCl2 mL d’H2O/MeOH
2 x 3 mL de dichlorométhane/éther/propan-2-ol (50/30/20)
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Conditionnement Dépôt et lavage Élution
+ 4 mL de KH2PO4
70 µL TF/ACN (90/10)
Évaporation
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PSYCHOTROPES - SANG ET URINE
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OBJECTIFS
• 1 - développer une méthode de recherche de psychotropes en CL-SM/SM,▫ dans les cheveux, ▫ puis dans le sang et l’urine
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• 2 - obtenir des LDD et LDQ faibles, ▫ pg/mg de cheveux ▫ µg/L de sang ou d’urine.
0,5 à 5 pg/mg0,05 à 5 µg/L
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CAS RÉELSCAS RÉELS
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• JF, 25 ans, avec problèmes conjugaux,
• Dépôt de plainte à l’encontre de son mari pour viol
avec soumission chimique
• Signes cliniques : somnolence puis amnésie partielle
CAS N°1
• Signes cliniques : somnolence puis amnésie partielle
• TTT : prazépam (LYSANXIA), 3 cp à 10 mg / jour
• Faits : 3 semaines auparavant
• Prélèvement : 1 mèche de cheveux, d’environ 8 cm
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• Résultats
CAS N°1
Segments capillaires zolpidem prazépam nordazépam
- du cuir chevelu à 2 cm
0,9 pg/mg 416 pg/mg 229 pg/mg
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29
cm
- de 2 à 4 cm non détecté 763 pg/mg 48,9 pg/mg
- de 4 à 6 cm non détecté > 1000 pg/mg 32,1 pg/mg
- de 6 cm à la pointe (≈≈≈≈ 8 cm)
non détecté > 1000 pg/mg 44,6 pg/mg
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• Femme, 62 ans, retrouvée un matin somnolente et trèsconfuse, nue, sans aucun souvenir de la nuitprécédente
• La veille : dîner au restaurant
CAS N°2
• La veille : dîner au restaurant
• Hospitalisation aux urgences pour somnolence etdésorientation.
30Stratégie analytique lors de la prise en charge des cas de soumission chimiqueJulie Maublanc
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• Prélèvements sanguins et urinaires réalisés 40 heuresaprès les faits▫ Zolpidem = 1 µg/L de sang▫ Lorazépam = 56 µg/L de sang
Prélèvement capillaire réalisé 3 semaines après les
CAS N°2
• Prélèvement capillaire réalisé 3 semaines après lesfaits
31
Segments capillaires Zolpidem Lorazépam Nordazépam - du cuir chevelu à 1,5 cm
0,5 pg/mg 0,5 pg/mg non détecté
- de 1,5 à 3 cm non détecté non détecté 3,3 pg/mg - de 3 à la pointe non détecté non détecté 7,7 pg/mg
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Julie Maublanc
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• Soumission chimique = problème de Santé Publique
• Information du public et des professionnels de santé primordiale pour une meilleure prise en charge
• Méthodes « psychotropes » intéressantes dans ce
CONCLUSION
• Méthodes « psychotropes » intéressantes dans ce contexte▫ Recherche simultanée des principales molécules utilisées en soumission chimique▫ LDD et LDQ faibles
• Mais l’interprétation est toujours délicate
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• En France, soumission chimique =▫ Simple élément de preuve du délit ou du crime
▫ Délit à part entière : « administration de substances nuisibles ayant porté atteinte à l'intégrité physique ou psychique d'autrui » (art 222-15 du Code Pénal)
CONCLUSION
psychique d'autrui » (art 222-15 du Code Pénal)
▫ Circonstance aggravante car notion de préméditation
• Les agresseurs sont très imaginatifs donc ces méthodes devront être continuellement enrichies avec de nouveaux psychotropes.
Stratégie analytique lors de la prise en charge des cas de soumission chimiqueJulie Maublanc
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