ICS : 07.100.30

Correspondance La présente norme est une reprise intégrale de la norme ISO 17410:2019.

Droits d'auteurDroit de reproduction réservés sauf prescription différente aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé électronique ou mécanique y compris la photocopie et les microfilms sans accord formel. Ce document est à usage exclusif et non collectif des clients de l'IMANOR, Toute mise en réseau, reproduction et rediffusion, sous quelque forme que ce soit, même partielle, sont strictement interdites.

© IMANOR 2020 – Tous droits réservésInstitut Marocain de Normalisation (IMANOR) Angle Avenue Kamal Zebdi et Rue Dadi Secteur 21 Hay Riad - RabatTél : 05 37 57 19 48/49/51/52 - Fax : 05 37 71 17 73 Email : imanor@imanor.gov.ma

PNM ISO 17410IC 08.0.157

2020

Projet de Norme Marocaine

Norme Marocaine homologuée Par décision du Directeur de l’Institut Marocain de Normalisation N°........ , publiée au B.O N° ....

La présente norme annule et remplace la NM ISO 17410 homologuée en 2007.

Microbiologie de la chaîne alimentaire

Méthode horizontale pour le dénombrement des micro-organismes psychrotrophes

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Avant-Propos National

L’Institut Marocain de Normalisation (IMANOR) est l’Organisme National de Normalisation. Il a été créé par la Loi N° 12-06 relative à la normalisation, à la certification et à l’accréditation sous forme d’un Etablissement Public sous tutelle du Ministère chargé de l’Industrie et du Commerce.

Les normes marocaines sont élaborées et homologuées conformément aux dispositions de la Loi N° 12- 06 susmentionnée.

La présente norme marocaine NM ISO 17410 a été examinée et adoptée par la Commission de Normalisation des méthodes d'analyse, échantillonnage alimentaires (029)

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Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................ivIntroduction ..................................................................................................................................................................................................................................v1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 12 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 13 Termesetdéfinitions ....................................................................................................................................................................................... 14 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 25 Milieux de culture et réactifs ................................................................................................................................................................... 26 Matériel et consommables ......................................................................................................................................................................... 27 Échantillonnage ..................................................................................................................................................................................................... 38 Préparation de l’échantillon pour essai ....................................................................................................................................... 39 Mode opératoire.................................................................................................................................................................................................... 3

9.1 Prise d'essai, suspension mère et dilutions ................................................................................................................... 39.2 Ensemencement et incubation .................................................................................................................................................. 49.3 Comptage des colonies ..................................................................................................................................................................... 4

10 Expression des résultats............................................................................................................................................................................... 511 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................... 512 Assurance qualité ................................................................................................................................................................................................ 5Annexe A (normative) Milieux de culture et réactifs ........................................................................................................................... 6Annexe B (informative) Méthode rapide pour l’estimation du nombre de micro-organismes

psychrotrophes dans le lait cru ou pasteurisé ...................................................................................................................... 8Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................10

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Sommaire Page

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Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www .iso .org/directives).

L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/avant -propos.

Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie.

Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 17410:2001), qui a fait l'objet d'une révision technique. Elle remplace également l’ISO 6730:2005 | FIL 101:2005[2] et l’ISO 8552:2004 | FIL 132:2004.[4] Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:

— utilisation de la technique d’ensemencement en surface, par opposition à la technique d’ensemencement en profondeur utilisée dans l’ISO 6730:2005 | FIL 101:2005 et l’ISO 8552:2004 | FIL 132:2004, les micro-organismes psychrotrophes étant sensibles à la chaleur;

— utilisation d’une méthode horizontale pour le dénombrement des micro-organismes psychrotrophes dans a) les produits destinés à la consommation humaine, b) les produits destinés à l’alimentation animale, c) les échantillons environnementaux dans le domaine de la production et de la manutention de denrées alimentaires et d) les échantillons au stade de production primaire;

— inclusion, en annexe, de la méthode rapide pour l’estimation du nombre de micro-organismes psychrotrophes dans le lait cru et pasteurisé (extraite de l’ISO 8552:2004 | FIL 132:2004);

— introduction de l’essai de performance du milieu de culture (gélose PCA);

— changement du paragraphe applicable à l’expression des résultats pour être conforme à l’ISO 7218.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.

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https://www.iso.org/fr/directives-and-policies.htmlhttps://www.iso.org/fr/directives-and-policies.htmlhttps://www.iso.org/fr/iso-standards-and-patents.htmlhttps://www.iso.org/fr/foreword-supplementary-information.htmlhttps://www.iso.org/fr/members.html

ISO 17410:2019(F)

Introduction

Les micro-organismes psychrotrophes sont capables de se développer à basses températures. Ces micro-organismes peuvent être responsables de la putréfaction des aliments réfrigérés (à l’exception des aliments emballés sous atmosphère modifiée) qui se manifeste par des modifications d’odeur et de goût. Certains micro-organismes psychrotrophes présents dans le lait cru sont également capables de produire des enzymes stables à la chaleur. Lorsqu’elles sont chauffées (pasteurisation ou stérilisation), ces enzymes ne sont pas complètement inactivées, entraînant des défauts de qualité dans le produit traité thermiquement (dégradation des matières grasses ou des protéines).

Pour la révision du présent document, aucune caractéristique de performance n’a été incluse en raison du manque de données et du fait qu’aucune étude interlaboratoires n’a été organisée pour la méthode décrite, car les micro-organismes psychrotrophes sont un groupe de micro-organismes principalement utilisés pour le contrôle des processus et considérés comme non pathogènes.

Les principales modifications techniques énumérées dans l’avant-propos, introduites dans le présent document par rapport à l’ISO 17410:2001, sont considérées comme mineures (voir l’ISO 17468[6]).

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Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour le dénombrement des micro-organismes psychrotrophes

1 Domaine d’application

Le présent document spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des micro-organismes psychrotrophes capables de se développer et de former des colonies sur un milieu de culture gélosé solide après incubation en aérobiose à 6,5 °C.

Le présent document est applicable aux:

— produits destinés à la consommation humaine,

— produits destinés à l’alimentation animale,

— échantillons environnementaux dans le domaine de la production et de la manutention de denrées alimentaires, et

— échantillons au stade de production primaire.

NOTE L’Annexe B spécifie une méthode rapide pour l’estimation du nombre de micro-organismes psychrotrophes dans le lait cru et pasteurisé.

2 Références normatives

Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).

ISO 835, Verrerie de laboratoire — Pipettes graduées

ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie de la chaîne alimentaire — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique

ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations

ISO 8655-2, Appareils volumétriques à piston — Partie 2: Pipettes à piston

ISO 11133, Microbiologie des aliments, des aliments pour animaux et de l'eau — Préparation, production, stockage et essais de performance des milieux de culture

3 Termesetdéfinitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp

— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/

NORME INTERNATIONALE ISO 17410:2019(F)

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https://www.iso.org/obp/uihttp://www.electropedia.org/

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3.1micro-organisme psychrotropheorganisme de taille microscopique, incluant les bactéries, les levures et les moisissures

Note 1 à l'article: à l’Article Les micro-organismes psychrotrophes sont des bactéries, levures et moisissures capables de produire des colonies dans les conditions spécifiées dans le présent document.

4 Principe

Une quantité spécifiée d’échantillon pour essai (produits liquides) ou une quantité spécifiée d’une suspension mère, dans le cas des autres produits (produits non liquides), est étalée en surface sur un milieu de culture gélosé solide contenu dans des boîtes de Petri.

D’autres boîtes sont préparées dans les mêmes conditions avec les dilutions décimales obtenues à partir de l'échantillon pour essai ou de la suspension mère.

Les boîtes sont incubées en aérobiose à 6,5 °C pendant 10 jours.

L’Annexe B spécifie une méthode rapide pour l’estimation du nombre de micro-organismes psychrotrophes dans le lait cru et le lait pasteurisé en incubant les boîtes à 21 °C pendant 25 h. Cependant, il convient de noter que tous les micro-organismes capables de produire des colonies à 6,5 °C peuvent ne pas donner de colonies s’ils sont incubés à 21 °C.

Le nombre de micro-organismes psychrotrophes par gramme d’échantillon ou le nombre de micro-organismes psychrotrophes par millilitre d’échantillon est calculé d’après le nombre de colonies obtenues dans les boîtes contenant moins de 150 colonies.

5 Milieux de culture et réactifs

Suivre les pratiques courantes de laboratoire conformément à l’ISO 7218. La composition et la préparation des milieux de culture et des réactifs sont spécifiées à l’Annexe A. Pour l’essai de performance des milieux de culture, suivre les modes opératoires conformément à l’ISO 11133 et l’Annexe A.

6 Matériel et consommables

Un matériel jetable constitue une alternative acceptable à la verrerie réutilisable si ses spécifications sont appropriées.

Un matériel courant de laboratoire de microbiologie est nécessaire (voir l’ISO 7218), et en particulier, ce qui suit:

6.1 Compteur de colonies (en option), constitué, par exemple, d’une base éclairée sur fond sombre, équipé d’une loupe grossissante pour faciliter la détection des colonies et (en option), d’un compteur numérique mécanique ou électronique.

6.2 Étaleurs ou râteaux stériles, en verre, plastique ou acier, pour étaler l’inoculum en surface du milieu de culture.

NOTE Un étaleur en verre peut être constitué d’une pipette Pasteur d’environ 3,5 mm de diamètre, en forme de crosse de hockey d’environ 20 cm de long, pliée à angle droit environ 3 cm depuis une extrémité et aplatie aux extrémités par chauffage.

6.3 Étuve, capable de fonctionner à une température de 6,5 °C ± 1 °C.

6.4 Four pour une stérilisation en chaleur sèche ou autoclave pour une stérilisation en chaleur humide, utilisé conformément à l’ISO 7218.

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6.5 Boîtes de Petri, en verre ou en plastique, d’un diamètre d’environ 90 mm ou 140 mm.

6.6 pH-mètre, ayant une précision de lecture de ± 0,1 unité de pH à 25 °C.

6.7 Étuve réfrigérée, capable de fonctionner à une température de 5 °C ± 3 °C.

6.8 Pipettes graduées à écoulement total, stériles, de capacités nominales de 0,1 ml et 1 ml, ISO 835 classe A, ou pipettes automatiques, ISO 8655-2 avec utilisation de pointes stériles.

6.9 Tubes,bouteillesou flacons, de capacité appropriée, pour la préparation, la stérilisation et, si nécessaire, la conservation des milieux de culture.

6.10 Bain-marie ou appareil similaire, capable de fonctionner à une température comprise entre 44 °C et 50 °C et capable de faire bouillir l’eau.

7 Échantillonnage

L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans le présent document. Voir la Norme internationale spécifique au produit concerné. S'il n'existe aucune Norme internationale traitant de l’échantillonnage du produit concerné, il est recommandé aux parties concernées de trouver un accord à ce sujet.

Des techniques d’échantillonnage recommandées sont données dans les documents suivants:

— l’ISO/TS 17728 applicable aux aliments destinés à l’alimentation humaine et animale[8];

— l’ISO 707 applicable au lait et aux produits laitiers[1];

— l’ISO 6887-3 applicables aux coquillages et crustacés[3];

— l’ISO 13307 applicable au stade de production primaire[5];

— l’ISO 17604 applicable aux carcasses[7];

— l’ISO 18593 applicable aux surfaces[9].

Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon représentatif. Il convient que l’échantillon n’ait été ni endommagé ni modifié au cours du transport ou du stockage.

8 Préparation de l’échantillon pour essai

Préparer l'échantillon pour essai à partir de l’échantillon pour laboratoire conformément à la Norme internationale spécifique au produit concerné: suivre les modes opératoires spécifiés dans l’ISO 6887 (toutes les parties). S'il n'existe aucune Norme internationale spécifique, il est recommandé aux parties concernées de trouver un accord à ce sujet.

9 Mode opératoire

9.1 Prise d'essai, suspension mère et dilutions

Utiliser la méthode décrite dans l’ISO 6887 (toutes les parties) ou la Norme internationale spécifique au produit concerné.

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9.2 Ensemencement et incubation

9.2.1 L’ensemencement en surface étant utilisé pour cette méthode, les boîtes doivent être séchées avant utilisation, conformément à l’ISO 11133, jusqu’à ce que les gouttelettes aient disparu de la surface du milieu de culture gélosé. Ne pas trop laisser sécher les boîtes.

À l’aide d’une pipette stérile (6.8), transférer 0,1 ml de l’échantillon pour essai, si le produit est liquide, ou de la suspension mère dans le cas des autres produits (produits non liquides), au centre de chacune d’une boîte de Petri contenant la gélose Plate Count Agar (PCA) (voir A.3).

Si une seule dilution est effectuée, deux boîtes doivent être utilisées (voir ISO 7218).

Pour détecter les faibles quantités de micro-organismes, la limite de détection peut être augmentée d’un facteur de 10 en analysant 1,0 ml de l’échantillon pour essai (produit liquide) ou 1,0 ml de la suspension mère (produit non liquide). Pour cela, étaler 1,0 ml de l’inoculum soit sur la surface d’une grande boîte de Petri (140 mm de diamètre) soit sur la surface de trois petites boîtes de Petri (90 mm de diamètre). Si deux boîtes par dilution sont nécessaires, les préparer en utilisant deux grandes boîtes ou six petites boîtes de Petri.

9.2.2 Prendre une autre boîte de Petri (6.5) contenant la gélose PCA (voir A.3). Utiliser une autre pipette stérile (6.8) pour prélever 0,1 ml de la dilution décimale suivante (les colonies à dénombrer seront présentes à l’étape de dilution de 10−1 dans le cas de produits liquides et de 10−2 dans le cas de produits non liquides).

9.2.3 Si nécessaire, répéter l’opération (voir 9.2.2) avec les dilutions suivantes.

9.2.4 À l’aide d’un étaleur ou d’un râteau (6.2), étaler l’inoculum avec précaution, de façon uniforme et aussi rapidement que possible après l’introduction, sur la surface gélosée, sans toucher les parois de la boîte de Petri (6.5). Laisser la gélose absorber l’inoculum en laissant les couvercles pendant environ 15 min à température ambiante et vérifier si la surface gélosée est sèche avant l’incubation.

Il convient d’inclure une boîte témoin sans inoculum pour vérifier la contamination microbienne des boîtes de gélose utilisées.

Il est possible d’utiliser le même étaleur (6.2) pour toutes les dilutions d’un même échantillon pour essai, à condition de commencer par la dilution la plus forte et de poursuivre dans l’ordre jusqu’à la dilution contenant la plus grande quantité de micro-organismes d’essai.

9.2.5 Retourner les boîtes et les placer dans l’étuve (6.3) à 6,5 °C, conformément à l’ISO 7218. Laisser incuber pendant 10 jours.

9.3 Comptage des colonies

9.3.1 Après la période d’incubation (voir 9.2.5), compter les colonies à partir de la première dilution (la plus faible) contenant moins de 150 colonies. Compter les colonies présentes dans les boîtes en utilisant le compteur de colonies (6.1) si nécessaire. Examiner les boîtes sous une lumière diffuse. Il est important d’inclure les colonies en forme de tête d’épingle dans le comptage; cependant, il est essentiel que l’opérateur évite de confondre ces colonies avec des particules de matières non dissoutes ou précipitées dans les boîtes. Examiner soigneusement les éléments suspicieux, en utilisant un grossissement plus élevé si nécessaire, afin de différencier les colonies des matières étrangères.

NOTE Un seul clone de micro-organismes se multipliant en présence de nutriments pour former une croissance visible sur le milieu de culture gélosé solide est appelé colonie bactérienne. Les tailles de colonies, mesurées en millimètres, sont: en forme de tête d’épingle (≤1 mm), petites (2 mm à 3 mm), moyennes (4 mm à 5 mm) et grandes (>5 mm)[10].

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9.3.2 Les colonies envahissantes ou une chaîne de colonies chevauchantes ou au moins reliées doivent être considérées comme des colonies uniques. Si moins du quart de la boîte est occupé par des colonies envahissantes, compter les colonies se trouvant sur la partie non touchée de la boîte et extrapoler le nombre théorique correspondant à la boîte entière. Si plus du quart est envahi par des colonies envahissantes, il ne faut pas tenir compte de la valeur obtenue pour cette boîte.

NOTE En cas de colonies envahissantes, une seconde couche peut être utilisée (voir ISO 7218).

10 Expression des résultats

Pour calculer les résultats, suivre le(s) mode(s) opératoire(s) conformément à l’ISO 7218. Calculer et exprimer les résultats sous forme de nombre de micro-organismes psychrotrophes, en ufc par gramme, millilitre, par centimètre carré, par écouvillon.

Dans les cas où de petits nombres (moins de 10 colonies, aucune colonie ou autres cas particuliers) du micro-organisme cible ont été détectés, suivre l’ISO 7218 pour l’expression des résultats.

11 Rapport d’essai

Le rapport d’essai doit indiquer:

— la méthode d'essai utilisée, avec une référence au présent document, c’est-à-dire l'ISO 17410;

— la méthode d’échantillonnage utilisée, si elle est connue;

— la taille de la prise d’essai et/ou la nature des éléments examinés;

— toutes les conditions opératoires non spécifiées dans le présent document, ou considérées comme facultatives, ainsi que les détails de tous les incidents susceptibles d'avoir influencé le(s) résultat(s) d’essai;

— tout écart par rapport au présent document;

— toutes les informations nécessaires à l’identification complète de l’échantillon;

— le(s) résultat(s) d'essai obtenu(s);

— la date de l'essai.

Si la méthode rapide pour l’estimation du nombre de micro-organismes psychrotrophes est utilisée pour des échantillons de lait cru ou pasteurisé, conformément à l’Annexe B, l’indiquer dans le rapport d’essai.

12 Assurance qualité

Il convient que le laboratoire soit doté d’un système de contrôle de la qualité clairement défini assurant que le matériel, les réactifs et les techniques sont adaptés à la méthode. L’utilisation de contrôles positifs, de contrôles négatifs et de blancs fait partie de la méthode. L’essai de performance des milieux de culture est spécifié à l’Annexe A et décrit dans l’ISO 11133.

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Annexe A (normative)

Milieux de culture et réactifs

A.1 Généralités

Les spécifications générales de l’ISO 11133 sont applicables à la préparation et à l’essai de performance des milieux de culture décrits dans cette annexe. Si les milieux de culture ou les réactifs sont préparés à partir de milieux/réactifs complets déshydratés ou si des milieux/réactifs prêts à l’emploi sont utilisés, suivre les instructions du fabricant concernant la préparation, les conditions de stockage, la date de péremption et l’utilisation.

La durée de conservation des milieux indiqués dans cette annexe a été déterminée dans certaines études. L’utilisateur doit vérifier ceci dans leurs propres conditions de conservation (conformément à l’ISO 11133).

L’essai de performance des milieux de culture est décrit en A.3.4.

A.2 Diluants

Utiliser le(s) diluant(s) spécifié(s) dans l’ISO 6887 (toutes les parties) applicable au produit concerné ou la Norme internationale spécifique au produit concerné.

A.3 Milieu de culture gélosé: gélose PCA

A.3.1 Composition

Le Tableau A.1 donne une vue d’ensemble de la composition.

En cas d’analyse de produits laitiers, ajouter 1,0 g de lait en poudre écrémé par litre de milieu de culture gélosé. Le lait en poudre écrémé doit être exempt de substances inhibitrices.

Tableau A.1 — Composition

Digestat enzymatique de caséine 5,0 gExtrait de levure 2,5 gGlucose, anhydre (C6H12O6) 1,0 gAgar-agara 9 g à 18 gEau 1 000 mla Selon le pouvoir gélifiant de l’agar-agar.

A.3.2 Préparation

Dissoudre les composants ou le milieu de culture gélosé complet déshydraté dans l'eau, en faisant bouillir si nécessaire. Mélanger vigoureusement et laisser reposer plusieurs minutes.

Si nécessaire, ajuster le pH (6.6) de sorte qu'après stérilisation il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.

Verser le milieu de culture gélosé dans des tubes, des bouteilles ou des flacons (6.9) de capacité appropriée.

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Stériliser à l'autoclave (6.4) réglé à 121 °C pendant 15 min.

Si le milieu de culture gélosé doit être utilisé immédiatement, le refroidir dans un bain-marie (6.10) maintenu entre 47 °C et 50 °C avant utilisation. Sinon, laisser le milieu de culture gélosé se solidifier dans le tube, la bouteille ou le flacon (6.9) et le conserver à l’abri de la lumière à une température de 5 °C (6.7) pendant trois mois maximum, dans des conditions empêchant toute modification de sa composition et de ses propriétés. Avant utilisation, faire complètement fondre le milieu de culture gélosé dans un bain-marie bouillant, puis le refroidir dans un bain-marie (6.10) maintenu entre 47 °C et 50 °C.

A.3.3 Préparation des boîtes de gélose

Verser 18 ml à 20 ml du milieu de culture gélosé dans des boîtes de Petri stériles d’un diamètre de 90 mm ou verser 45 ml à 50 ml du milieu de culture gélosé dans des boîtes de Petri stériles d’un diamètre de 140 mm (6.5), pour obtenir des boîtes de gélose d’au moins 3 mm d’épaisseur, et laisser se solidifier.

Les boîtes peuvent être conservées à 5 °C (6.7) jusqu’à quatre semaines.

Pour faciliter l’étalement uniforme, il convient de sécher la surface des boîtes contenant le milieu de culture gélosé solidifié conformément à l’ISO 11133 de façon que l’inoculum soit absorbé au bout de 15 min.

A.3.4 Essai de performance

La gélose PCA est un milieu de culture gélosé non sélectif utilisé comme boîte de pré-ensemencement en surface. La productivité doit être analysée selon l’ISO 11133.

Tableau A.2 — Essai de performance applicable à l’assurance qualité de la gélose PCA

Milieu Fonction Incubation Souches de contrôle Numéros WDCMaMilieu de référence

Méthode de contrôle Critères

c Réaction caractéristique

PCA Productivité 10 jours/ 6,5 °C ± 1 °C

Pseudomonas fluorescens

00115b Gélose tryptone- soja

Quantitative PR ≥ 0,7 —

Yersinia enterocolitica subsp. palearctica

00216

a Consulter le catalogue des souches de référence sur http: //www .wfcc .info pour avoir des informations sur les numéros de collection des souches de culture et les coordonnées des personnes à contacter; Centre mondial de données sur les micro-organismes (WDCM).b Souche à utiliser au minimum.c PR est le rapport de productivité.

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http://www.wfcc.info

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Annexe B (informative)

Méthode rapide pour l’estimation du nombre de micro-

organismes psychrotrophes dans le lait cru ou pasteurisé

B.1 Généralités

La présente annexe spécifie le mode opératoire qui peut être utilisé pour estimer le nombre de micro-organismes psychrotrophes dans le lait cru ou pasteurisé (c’est-à-dire, la méthode rapide).

B.2 Matériel et consommables

Pour la méthode rapide, le matériel et les consommables sont utilisés comme décrit à l’Article 6, avec les ajouts suivants.

B.2.1 Étuve, capable de fonctionner à une température de 21 °C ± 1 °C.

B.2.2 Bain-marie ou appareil similaire, capable de fonctionner à une température comprise entre 44 °C et 47 °C et capable de faire bouillir l’eau.

B.3 Mode opératoire

B.3.1 Généralités

Pour la méthode rapide, un mode opératoire similaire tel que décrit à l’Article 9 est suivi, excepté l’utilisation de la technique d’ensemencement en profondeur, l’incubation des boîtes et le nombre maximal de colonies à dénombrer (300 ufc). Les boîtes sont incubées pendant 25 h ± 1 h dans une étuve réglée à 21 °C (B.2.1).

B.3.2 Ensemencement et incubation

B.3.2.1 Prendre deux boîtes de Petri stériles (6.5). À l’aide d’une pipette stérile (6.8), transférer dans chaque boîte 1 ml de l’échantillon pour essai liquide. Si des boîtes provenant de plusieurs dilutions sont préparées, le transfert peut se limiter à une boîte par dilution (voir ISO 7218).

B.3.2.2 Prendre une boîte de Petri stérile (6.5). Utiliser une autre pipette stérile (6.8) pour transférer 1 ml de la dilution décimale suivante.

B.3.2.3 Si nécessaire, répéter l’opération (voir B.3.2.2) avec les dilutions suivantes, en utilisant une nouvelle pipette stérile (6.8) pour chaque dilution décimale.

B.3.2.4 Lorsque cela est approprié et possible, choisir uniquement les étapes de dilution critiques (au moins deux dilutions décimales suivantes) pour l’ensemencement des boîtes de Petri (6.5) qui donneront un nombre de colonies compris entre 10 et 300.

B.3.2.5 Verser environ 12 ml à 15 ml de gélose PCA (voir A.3) entre 44 °C et 47 °C (B.2.2) dans chaque boîte de Petri.[11] Le temps écoulé entre la fin de la préparation de la suspension mère et le moment où le milieu (voir A.3) est versé dans les boîtes de Petri (6.5) ne doit pas dépasser 45 min.

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B.3.2.6 Mélanger soigneusement l’inoculum avec le milieu en faisant tourner les boîtes de Petri puis laisser le mélange se solidifier en laissant les boîtes de Petri au repos sur une surface horizontale froide.

B.3.2.7 Retourner les boîtes préparées et les placer dans l’étuve (B.2.1) réglée à 21 °C, conformément à l’ISO 7218. Laisser incuber pendant 25 h ± 1 h.

Les colonies obtenues avec cette méthode rapide ont tendance à être très petites et ne sont pas détectables dans une boîte sans dilution en raison de l’opacité ou de la turbidité du milieu de culture gélosé. Par conséquent, diluer les échantillons pour essai au moins 10 fois (de préférence 100 fois ou plus) afin de pouvoir également observer les petites colonies en forme de tête d’épingle.

La méthode rapide donne une estimation du nombre de micro-organismes psychrotrophes dans le lait cru et pasteurisé et ne doit pas être utilisée pour d’autres matrices d’échantillons.

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Bibliographie

[1] ISO 707, Lait et produits laitiers — Lignes directrices pour l'échantillonnage

[2] ISO 6730:2005 | FIL 101:2005, Lait — Dénombrement des unités formant colonie de micro-organismes psychrotrophes — Technique par comptage des colonies à 6,5 °C

[3] ISO 6887-3, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 3: Règles spécifiques pour la préparation des produits de la pêche

[4] ISO 8552:2004 | FIL 132:2004, Lait — Estimation des micro-organismes psychrotrophes — Technique par comptage des colonies à 21 °C (Méthode rapide)

[5] ISO 13307, Microbiologie des aliments — Stade de production primaire — Techniques de prélèvement

[6] ISO 17468, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Exigences et recommandations techniques pour le développement ou la révision d'une méthode de référence normalisée

[7] ISO 17604, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Prélèvement d'échantillons sur des carcasses en vue de leur analyse microbiologique

[8] ISO/TS 17728, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Techniques de prélèvement pour l'analyse microbiologique d'échantillons d'aliments

[9] ISO 18593, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthodes horizontales pour les prélèvements de surface

[10] Smibert R.M., Krieg N.R. Phenotypic characterization. In: Methods for General and Molecular Bacteriology. Gerhardt P., Murray R.G.E., Wood W.A., Krieg N.R. (Eds.) American Society for Microbiology, Washington, DC. 1994, pp. 607–654

[11] Van der Zant C., Matthys A.W. Effect of temperature of the plating medium on the viable count of psychrophilic bacteria. J. Milk and Food Tech., 1965

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Avant-proposIntroduction1 Domaine d’application2 Références normatives3 Termes et définitions4 Principe5 Milieux de culture et réactifs6 Matériel et consommables7 Échantillonnage8 Préparation de l’échantillon pour essai9 Mode opératoire9.1 Prise d'essai, suspension mère et dilutions9.2 Ensemencement et incubation9.3 Comptage des colonies10 Expression des résultats11 Rapport d’essai12 Assurance qualitéAnnexe A (normative) Milieux de culture et réactifsAnnexe B (informative) Méthode rapide pour l’estimation du nombre de micro-organismes psychrotrophes dans le lait cru ou pasteuriséBibliographiePNM ISO (pg).pdfForewordIntroduction1. Scope2. Normative references3. Definitions4. Lighting design criteria4.1 Luminous environment4.2 Luminance distribution4.3 Illuminance4.3.1 Recommended illuminances at the task area4.3.2 Scale of illuminance4.3.3 Illuminances of immediate surroundings4.3.4 Uniformity

4.4 Glare4.4.1 Shielding against glare4.4.2 Discomfort glare4.4.3 Veiling reflections and reflected glare

4.5 Directionality4.5.1 Modelling4.5.2 Directional lighting of visual tasks

4.6 Colour aspects4.6.1 Colour appearance4.6.2 Colour rendering

4.7 Daylight4.8 Maintenance4.9 Energy considerations4.10 Lighting of workstations with visual display terminals VDT4.11 Flicker and stroboscopic effect4.12 Emergency lighting

5. Schedule of lighting requirements6. Verification procedures6.1 Illuminance6.2 Unified glare rating6.3 Colour rendering index (Ra)6.4 Colour appearance (Tcp)6.5 Maintenance6.6 Luminaire luminance6.7 Tolerances in measurements

ISO (pg).pdfISO (pg N.V).pdfDomaine d'applicationRéférences normativesTermes et définitionsExigences généralesÉléments constitutifsMatériauxConception et caractéristiquesGénéralitésRaccordsFiltreTubulureRéservoir

Stérilité et apyrogénicité

Exigences de fonctionnementExactitude du dispositifDébitBolus, le cas échéant

Méthode d'essaiConditions générales d'essaiAppareillage et réactifsConditions opératoiresExpression des résultatsDébit moyenDébit instantanéTraitement des résultats

Détermination du débitPrincipeAppareillageMode opératoire

Résistance à la pressionMéthode d'essai de chuteÉtanchéité des éléments du dispositifRésistance à la traction de l'ensemble du dispositifVolume du bolusTemps de remplissage

Informations à faire figurer sur l'emballage et/ou le produiDocuments d'accompagnement