PLACE DES NOUVEAUX MARQUEURS DU VHB · ALAT Immunotolérance Immuno-réactive Clairance Porteur...
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V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 100:09:45
PLACE DES NOUVEAUX MARQUEURS DU VHB
Vincent THIBAULT
Laboratoire de VirologieCHU de Rennes2 rue Henri le Guilloux35033 Rennes cedex 9
IRSET - INSERM U1085Université Rennes 1
CENTREHOSPITALIER
UNIVERSITAIREDE RENNES
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 200:09:45
MAIS QUE NOUS MANQUE-T'IL ?
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 300:09:45
Marqueurs et histoire naturelle : du classique revisité (I ≠ H)
CV V
HB (
log U
I/m
L)
ALA
T U
I/
mL
AgHBe
Anti-HBe
AgHBs
ADN
ALAT
ImmunotoléranceImmuno-réactive
ClairancePorteur inactif
Mutant précoreHépatite "e-"
Infection chroniqueAgHBe positive
Hépatite chroniqueAgHBe positive
Infection chroniqueAgHBe négative
Hépatite chroniqueAgHBe négative
TRAITEMENTTRAITEMENT
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 400:09:47
La réplication à l'échelon cellulaire
AAAAAAAA
AAAA
AAAA
NTCP
ARN
ADN
AAAA
ARNpg
HBeHBx
HBs
ADN
HBcrAg ?
ARN ?
L'ADN intégré : source importante d'AgHBs
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 500:09:48
Des quantités conséquentes et relatives
AAAAAAAA
AAAA
AAAA
NTCP
ARN
ADN
AAAA
ARNpg
HBeHBx
HBs
109/mLHBs/HBc/ADN
106/mLHBs/HBc/ARN
1011/mLHBs/HBc
1014/mLHBs
L'ADN intégré : source importante d'AgHBs
Définir la modulation de ces différentes formes et
leur probable interdépendance
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 600:09:49
L'impact des traitements
AAAAAAAA
AAAA
AAAA
NTCP
ARN
ADN
AAAA
ARNpg
HBeHBx
HBs
ADN
109/mLHBs/HBc/ADN
106/mLHBs/HBc/ARN
1011/mLHBs/HBc
1014/mLHBs
Enrichissement ?
Impact des nouveaux traitements ?
Place de l'AgHBsq ?
Place de l'HBcrAg ?
Place de (des) ARN ?
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 700:09:51
Quels sont nos besoins ?
➢ Identification des personnes infectées
✓ Fenêtre sérologique "Ramping"
✓ Infection B occulte
✓ Risque de réactivation
➢ Suivi des traitements ou de l'infection chronique –Règles d'arrêt
✓ Marqueurs circulants
➢ qHBsAg
➢ HBcrAg
➢ ADN
➢ ARN
✓ Marqueurs intrahépatiques
➢ cccDNA - mRNA
➢ Identification de la "guérison"
✓ cccDNA / ADN intégré
➢ Suivi des nouveaux traitements
✓ CAM
✓ siRNA
✓ NAP
AgHBs (US)qAnti-HBc
Idéalement :
▪ Plasma (sérum)
▪ Dosage automatisé
▪ Sensible
▪ Standardisé
Capside ?mRNA circulants?
Une combinaison de marqueursdirects (Ag-Ac. Nuc.)
etindirects (Ac) ?
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 800:09:51
ARN VIRAUX
▪ Reflet de l'activité transcriptionnelle du cccDNA chez les patients AgHBe positifs
▪ Prédictif de la séroconversion HBe
▪ Prédictif de la rechute virologique à l'arrêt du traitement
Wang (2017), Jansen (2016), Van Bömmel (2015)
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 900:09:52
Une population complexe
Ajiro et al. Emerging Microbes and Infections (2014) 3, e63
Systèmes de quantification hétérogènes; absence de standard
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1000:09:53
Approche "Van Bömmel"
(1709)qPCR SHORT
RACE-3' full length
1789TATAAA-An
RACE-3' truncated (X)
1661CATAAA-An
(1837)qPCR LONG
Van Bommel et al. HEPATOLOGY 2015;61:66-76
Pas d'étape de dégradation d'ADN
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1100:09:53
Un système robuste ?
On-therapy CHB samples (N=16), samples (N=89) from 10 treatment naïve CHB subjects receiving 12-weeks of NA with 8-week follow-up, HBsAg positive blood donor samples (N=102), 3 seroconversion series from plasmapheresis donors (N=79 samples)
▪ 5’ end of X▪ 3’ end of Core▪ Comparaison Van Bömmel
Butler et al. Hepatology 2018;68:2106-2117
SerumPlasmaSensitivity: 1.65 logU/mL
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1200:09:54
Situation sous traitement et naturelle
Butler et al. Hepatology 2018;68:2106-2117
Plus d'ARN que d'ADN Plus d'ADN que d'ARN
16 treated patients ETV or TDF
102: 92 ARN +
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1300:09:55
Situation sous traitement et naturelle
Butler et al. Hepatology 2018;68:2106-2117
Plus d'ARN que d'ADN Plus d'ADN que d'ARN
16 treated patients ETV or TDF
102: 92 ARN +
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1400:09:55
ARN et phase aiguë
Butler et al. Hepatology 2018;68:2106-2117
Evolutions parallèles de l'ADN et de l'ARN
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1500:09:55
La décroissance de l'ARN du VHB : une nouvelle règle d'arrêt de Tt ?
Butler et al. Hepatology (2018)
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1600:09:56
Impact des facteurs liés à l'hôte ou au virus sur le niveau d'ARN
Van Campenhout et al. HEPATOLOGY 2018; 68:839-847
Cohorte multiethnique de 488 porteurs chroniques non traités
n=366 n=122
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1700:09:57
Influence du génotype et des variants "précore"
Van Campenhout et al. HEPATOLOGY 2018; 68:839-847
*
*
*
* *
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1800:09:57
Corrélation ADN/ARN (ARN<ADN)- Peu de corrélation avec protéines
Van Campenhout et al. HEPATOLOGY 2018; 68:839-847
75
49
110
125
16
97
AgHBe+
AgHBe-
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 1900:09:58
Analyse multivariée
Van Campenhout et al. HEPATOLOGY 2018; 68:839-847
Evaluation de l'ARN en fonction de ces paramètres !
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2000:09:59
Histoire naturelle et ARN-VHB
Wang et al. J Viral Hepat. 2018;25:1038–1047.
102 patients jamais traités (66 PBH)
Détection d'ARN chez porteurs inactifs ? Niveaux identiques (e+/-)
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2100:09:59
ARN, ADN, qHBsAg : lequel choisir ?
Wang et al. J Viral Hepat. 2018;25:1038–1047.
Dispersion de l'AgHBsIntérêt du rapport entre quantité de protéines produite et source (ARN ou ADN) ?
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2200:10:00
DOSAGE DE L'AGHBS :
AMÉLIORATION DE LA SENSIBILITÉ DES TESTS
MAIS VISION TROP SIMPLISTE ?
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2300:10:01
Vers une sensibilité exquise…
NameFujirebio
Lumipulse® G HBsAg-Quant
Abbott HBsAg Quant
DiaSorin Murex HBsAg Quant
Roche HBsAg II Quant
Technology CLIA CMIA CLIA ECLIA
Format Quantitative Sandwich
Intended Use
Qualitative and quantitative
determination of HBsAg in serum or plasma
Quantitative determination of HBsAg
in human serum or plasma
Quantitative determination of HBsAg
in human serum or plasma
Quantitative determination in confirmed HBsAg human
serum or plasma
Reference WHO Second International Standard, 00/588, subtype adw2, genotype A
Calibration Range(IU/mL)
0.005 – 150 0.05 - 250 0.05 - 1500.05 - 130
(13 000/52 000)
Automation Lumipulse® G Architect Liaison® XL Elecsys, Cobas e411 (1/100)
Modular, cobas e601-602 (1/400)
Antibodies2 Mabs on solid phase
2 Mabs – AMPPD labelled
2 Mabs on solid phase1 Pab - acridinium
labelled
3 Mabs on solid phase 4 Mabs - isoluminol
labelled
2 Mabs 1 Mab and 1 Pab -ruthenium
labelled
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2400:10:01
Abbott prototype version
Lou et al. J Clin Vir 105 (2018) 18–25
0.02-0.05 IU/mL
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2500:10:02
La perte de l'AgHBs après arrêt du traitement dépend du titre
Jeng et al. HEPATOLOGY 2018; 68:425-434
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2600:10:02
Kuhnhenn et al. Aliment Pharmacol Ther. 2018;1–13
Impact des mutations sur la production des constituants viraux
ARN 3.5kb ADN
AgHBsSurnageants
AgHBsLysats
Modulation des transcrits (S, M, L)
Modulation de l'excrétion
Forme intégrée
Enveloppement des capsides
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2700:10:04
LA QUANTIFICATION DES ANTI-HBC :UNE UTILITÉ ?
▪ Des taux plus élevés durant les phases "hépatites" comparées aux "infections".
▪ Le titre anti-HBc corrèle avec le niveau des transaminases, l'histoire naturelle et la
réponse aux traitements.
▪ Plus le titre est élevé plus la probabilité de faire une séroconversion sous traitement (AN
ou IFN) est importante.
Yuan Q et al. Gut 2013;62:182-184; Fan R et al. Gut 2016;65:313-320.
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2800:10:05
La quantification des anti-HBc aide à la prédiction de la réactivation chez des patients ayant un profil d'infection ancienne et traités pour lymphome
Yang et al. Journal of Hepatology 2018 vol. 69: 286–292
Double-antigen sandwich immunoassay (Wantai, Beijing, China)calibrated using World Health Organization standards.
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 2900:10:06
Anti-HBc et réactivation du VHB
Yang et al. Journal of Hepatology 2018 vol. 69: 286–292
51/4R
72/2R
36/14R
33/1R
HR 17.29
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 3000:10:06
Le titre anti-HBc est associé au risque de rechute à l'arrêt du traitement par analogue
Shi et al. Clinical Gastroenterology and Hepatology (2018),doi: 10.1016/j.cgh.2018.05.047
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 3100:10:07
ET L'HBCRAG ?
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 3200:10:08
L'HBcrAg : HBc related antigens
Attention à l'impact de l'AgHBe !
ATG ATG UAGGène CGène pré-C
1814 1901 2450
Protéine capside
NH2 Capside (21,5kDa 1-183) COOH
Peptide signal p22cr (22kDa -28 - >149) COOH
AgHBe (17kDa -10 - 149) COOH
Peptide signal
Protéine précore
COOH
AgHBe
p22cr
Capside
Traduction
Maturation
Dénaturationet dosage
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 3300:10:09
Brunetto et al. P. 2077 AASLD, SF 2018
HBcrAg : encore un exemple à ne pas suivre !
"Along with HBV DNA and ALT, serum HBcrAglevel may be a useful biomarker for theidentification of HBeAg negative HBV-infectionfrom chronic hepatitis B, independently of HBVgenotype, with a single observation point"
Utilité pour dissocier le statut infection vs. hépatite
- chronic hepatitis B (CHB, N=550),- chronic infection B (CI-1, N=710),- chronic infection with fluctuating low viremiaHBV DNA <20,000 IU/mL, (CI-2, N=322).
☺☺
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 3400:10:10
Quelques points clés
➢ Les marqueurs "classiques" restent de mise
➢ Pas d'information spécifique sur les évènements intra-hépatiques
✓ Difficultés de standardisation du cccDNA
✓ Appréciation de la transcription
➢ Définition de la "guérison" : quels marqueurs ? Définition de seuils
➢ Trois marqueurs sont attractifs
➢ AgHBs : différentes formes, sensibilité accrue, perturbation par l'ADN intégré
➢ HBcrAg : question de sensibilité, mésusage, pertinence clinique ?
➢ ARN : cohérence des résultats, vers une standardisation, automatisation, des données à venir
➢ Nécessité de combiner plusieurs marqueurs pour une vision plus précise
✓ Règles d'arrêt des traitements actuels
➢ Suivi des nouveaux traitements ?
➢ Quid de marqueurs immunologiques pertinents
✓ Place des anti-HBc ?
V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 3500:10:10
MERCI DE VOTRE ATTENTION !