LA CYTOMÉTRIE EN FLUXLA CYTOMÉTRIE EN FLUX

Par Serge Sénéchal

Comment définir la Cytométrie en flux ?

La Cytométrie en flux est une technologie qui nous permet de mesurer simultanément de multiples

caractéristiques physiques d’une cellule.

Le cytomètre enregistre le comportement de la cellule quand celle-ci passe devant le laser en mesurant:

1- La diffusion de la lumière incidente

2- L’émission de la fluorescence

Un Cytomètre est une combinaison de 3 différents systèmes :

1) Système fluidique : Flux laminaire qui permet aux cellules en suspension de passer une à une devant le laser.

2) Système optique : Rayon laser et différents filtres qui permettent de sélectionner les longueurs d’ondes appropriées.

3) Système électronique : PMT qui capte la lumière émise,digitaliseur qui la transforme en signal électrique puis en signal numérique et finalement l’ordinateur qui gère et entrepose les données.

Les renseignements transmis par le cytomètre à propos des cellules sont:

1- Sa taille relative (FSC)2- Sa granularité relative (SSC)3- L’intensité de la fluorescence émise (Fl)

FSC

SSC

Filtre: Passe-haut

LP 500

480 500 520

Filtre: Passe-bas

SP 500

480 500 520

Filtre: Passe-bande

480 500 520

500/40

460 540

Pics d’émission de fluorescence de différents fluorochromes

- +

Tri cellulaire

Tube de collecte

Laser

Plaques de déflexion

Veine liquide d’entraînement

Non sélectionnées

Cytométrie en flux

FL1

FL2

SSC

FSCLaser

Miroirsdichroïques

Filtres

PMT

PMT

PMT

Diode

Perspectives d’avenir

Des analyseurs avec 3 ou même 4 différents lasers nous permettant de détecter jusqu’à 8 fluorescences (couleurs) simultanément sur la même cellule.

Des trieurs encore plus rapides avec une vitesse atteignant 60,000 évènements/seconde. Des tris à 4 voies donc, possibilité de trier 4 sous-populations cellulaires en même temps, à partir du même échantillon. Ces appareils peuvent lire jusqu’à 15 paramètres différents (FSC + FL1 à FL14).Un système électronique digital au lieu d’analogique qui nous donne une plus grande sensibilité et une plus grande précision.

L ‘apparition de nouveaux fluorochromes conjugués à différents anticorps et des ordinateurs toujours plus puissants pour gérer le tout.

Des appareils encore plus performants sont déjà sur le marché:

Liens utiles

Cytoguide

BD Biosciences

Purdue Cyto (Présentations PowerPoint)

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