• Agents✦ froid

✦ dessication/lyophilisation

✦ certains produits chimiques / antibiotiques

• Agents de✦ incinération

✦ T°C élevée

✦ radiations

✦ désinfectants

1

diversité des agents anti-microbiens (1)

• Agents

• Agents

• Agents

diversité des agents anti-microbiens (2)

2

1.1. Cinétique de destruction microbienne

1.2. Conditions influençant l’efficacité des

agents anti-microbiens

1. Action anti-microbienne

3

0 1 2 3 4 5 6 7 8

0 10 20 30 40 50 60 70 80

Log

(sur

viva

nts)

Temps (min)

Log (survivants) en fonction du temps

1.1. Cinétique de destruction microbienne

Réduction d’un facteur 10de la population = .

Temps deréduction décimale

4

1.1. Cinétique de destruction microbienne

1.2. Conditions influençant l’efficacité des

agents anti-microbiens

1. Action anti-microbienne

5

1.2. Paramètres influençant l’efficacité des AAM (1)

• Influence du✦ de micro-organismes

✦ Nature de la population

✴ .

✴ Faculté à

• Influence de l’✦ (large ou étroit)

✦ des agents physiques

✦ des agents chimiques

✦ d’exposition ou de contact

6

• Influence de l’✦ la température

✦ le pH

✦ les matières organiques

1.2. Paramètres influençant l’efficacité des AAM (2)

7 8

2.1. La chaleur

2.2. la filtration

2.3. les radiations

2. Action des agents physiques

9

2.1. La chaleur 2.1.1. généralités

• Action de la chaleur dépend :✦ taux d’

✦ forme des cellules : /

✦ temps de contact

• Barème temps/température✦ Plus la température

✦ Plus le temps d’exposition nécessaire à la réduction d’un certain facteur de la population microbienne est

10

2.1. La chaleur 2.1.2. stérilisation (1)

• . ✦ par la chaleur

Louis Pasteur1822-1895

✦ par traitement chimique (oxyde d’éthylène)

✦ par traitement ionisant (rayonnements gamma ou UV)

http://fr.wikipedia.org/wiki/Louis_Pasteur

Nicolas Appert1749-1841

http://fr.wikipedia.org/wiki/Nicolas_Appert

Oxyde d’éthylènehttp://fr.wikipedia.org/wiki/Oxyde_d%27éthylène

11

2.1. La chaleur 2.1.2. stérilisation (2)

• Par chaleur :✦ Flambage : flamme bleue d’un bec Bunsen

✦ Four Pasteur : four à air chaud et sec

(utilisation : 180°C pendant 90 minutes)

http://www.veterinaire-alzette.com/pages/clinique.aspx?cp=eqste12

2.1. La chaleur 2.1.2. stérilisation (3)

• Par chaleur : principe de l’✦ Stérilisation à la vapeur

✦ Eau portée à l’ébullition sous

✦ Température atteinte supérieure à

http://fr.wikipedia.org/wiki/Autoclave13

2.1. La chaleur 2.1.3. tyndallisation

John Tyndall1820-1893

• . ✦ Stérilisation modérée

✦ Cycles de (destruction des formes végétatives) et de (transformation des formes en formes )

http://fr.wikipedia.org/wiki/John_Tyndall_(physicien) 14

2.1. La chaleur 2.1.4. pasteurisation

• Procédé de des aliments

• Chauffage entre 62 et 88°C

• Réduction significative de la flore et de

• Exemples de barèmes de pasteurisation■ Jus de fruit acide (pH < 4,5) : [65 °C ; 30 min] ; [77 °C ; 1 min] ; [88 °C ; 15 s]■ Bière (pH < 4,5) : [68 °C ; 20 min] ; [75 °C ; 4 min]■ Lait (pH > 4,5) : [63 °C ; 30 min] ; [72 °C ; 15 s]

http://genie-alimentaire.com/spip.php?article13

15

2.1. La chaleur 2.1.5. thermisation

• Procédé utilisé sur le lait cru

• 15 secondes à 57 - 68°C

• Destruction de la flore pathogène

• Réduction de la flore lactique

• Nécessité de réensemencer pour fabriquer du fromage

16

2.1. La chaleur

2.2. la filtration

2.3. les radiations

2. Action des agents physiques

17

2.2. La filtration (1)• Solutions :

✦ solution de protéines, de glucides,...

✦ antibiotiques, médicaments (injectables, sirops,...)

• Passage de la solution à filtrer sur une filtrante✦ micro-organismes sur la membrane

✦ obtention d’un

• Filtration de l’air✦ milieu hospitalier

✦ PSM (Poste de Sécurité Microbiologique)

18

2.2. La filtration (2)

http://www.allsciences.com http://www.directindustry.fr/prod/merck-millipore/filtres-seringues-31514-456844.html

19 20

2.1. La chaleur

2.2. la filtration

2.3. les radiations

2. Action des agents physiques

21

2.3. LES RADIATIONS

• Radiations UVc (260 nm)✦ Poste de Sécurité Microbiologique (PSM) : air et surface

✦ Traitement de l’eau

• Radiations ionisantes Gamma✦ Source Cobalt 60

✦ Stérilisation à froid : antibiotiques, hormones, objets chirurgicaux,...

22

3.1. Désinfection

3.2. Antisepsie

3.3. Antibiothérapie

3. Action des agents chimiques

23

3.1. Désinfection

• Opération, au résultat momentané, permettant de tuer des micro-organismes et/ou d’inactiver des virus sur un

• Action

• Phase de détersion ( ) précède la phase de désinfection avec un désinfectant

24

3.1. Désinfectants (1)

• Agents anti-microbiens destinés à être utilisés sur des surfaces inertes

• Détruisant 99,999 % des germes ciblés

• doses

• Temps de contact

25

3.1. Désinfectants (2)

• Chaux vive (oxyde de calcium, CaO)

• Hypochlorite de sodium (eau de Javel, NaClO)

• Alcool

• Eau oxygénée (H2O2)

• Ozone (O3)

• Ammoniums quaternaires

26

3.1. Désinfection

3.2. Antisepsie

3.3. Antibiothérapie

3. Action des agents chimiques

27

3.2. Antisepsie• Opération, au résultat momentané, permettant,

au niveau de , dans la limite de leur tolérance, d’éliminer, ou de tuer, les micro-organismes, et/ou d’inactiver les virus.

• Action

28

3.2. ANTISEPTIQUES (1)

• Agents anti-microbiens destinés à être utilisés sur des surfaces vivantes (peau,...)

• Usage local

29

3.2. ANTISEPTIQUES (2)

• Hypochlorite de sodium (eau de Javel, NaClO)

• Alcool à 70°

• Eau oxygénée (H2O2) (10 volumes)

• ...

30

3.2. ANTISEPTIQUES (3)

• Chlorhexidine

31

• Bétadine

3.1. Désinfection

3.2. Antisepsie

3.3. Antibiothérapie

3. Action des agents chimiques

32

• Traitement par d’une infection

• : quantité de principe actif / nombre de fois par jour / durée du traitement

• Dépend :✦ du patient (âge, poids,...)

✦ de l’infection

✦ de la voie d’administration

33

3.3.1. Définitions (1)

34

• Substance qui possède une activité spécifiquement anti-microbienne,✦ par interaction avec le métabolisme de la cellule hôte,

✦ peu toxique pour les organismes eucaryotes, donc utilisables par voie générale,

✦ active à faibles doses (de l’ordre du µg/mL).

3.3.1. Définitions (2)

• Molécules synthétisées par des micro-organismes, modifiées chimiquement, ou totalement synthétiques (cas des sulfamides)

35

Alexander Fleming1881-1955

Structure de la pénicillineInhibition bactérienneautour du Penicillium

3.3.1. Définitions (3)

36

A : Empêcher la construction de la paroi

B : Dissoudre la membrane

C : Agir sur l’ADN

D : Agir sur l’ARN

E : Bloquer la synthèse des protéines

3.3.2. Modes d’action

• Inhibition de la synthèse du

• Inactivation des pénicillines par une enzyme bactérienne :

• Ajout d’un inhibiteur des ß-lactamases :

37

A- Empêcher la construction de la paroi bactérienne

3.3.2. Mode d’action (A) B- Dissoudre la membrane

• Ex : polymyxines : surfactants cationiques

• Action contre les bacilles

• Usage local

car neurotoxiques et néphrotoxiques

38

3.3.2. Mode d’action (B)

39

C- Agir sur l’ADN ou l’ARN

• Ex : quinolones ; Oflocet®

• Inhibition de la réplication de l’ADN

• Indications : infections urinaires

3.3.2. Mode d’action (C)

40

D- Agir sur la synthèse des protéines• Ex : chloramphénicol

• Blocage de la formation de la liaison

• Usage externe local car toxique

• spectre

3.3.2. Mode d’action (D)

3.3.3. EFFICACITÉ (1)

• CMI (concentration minimale inhibitrice)= la plus petite concentration en antibiotique

capable d’inhiber visiblement la croissance bactérienne

(absence de trouble, 100 % de survivants)

41

3.3.3. CMI (1)

42

Tubes à hémolyse 1 2 3 4 5 6 7

Volume de diluant (mL) 1 0 1 1 1 1 1

Volume d’ATBQà (mL) 1 1

Volume du tube précédent (mL) 1 1 1 1

Volume d’inoculum (mL) 1 1 1 1 1 1 1

Dilution ATBQ

Concentration en ATBG (µg/mL) 0 512 256 128 64 32 16

Trouble + - - - - + +

3.3.3. CMI (2)

43

Cupules 1 2 3 4 5 6 7

Volume de diluant (µL) 50 50 50 50 50 50 50

Volume d’ATBQà (µL) 50

Volume de la cupule précédente (µL) 50 50 50 50 50

Volume d’inoculum (µL) 50 50 50 50 50 50 50

Dilution ATBQ

Concentration en ATBQ (µg/mL) 128 64 32 16 8 4 0

Trouble + + + + + + +

3.3.3. CMI (3)

44

Cupules 1 2 3 4 5 6 7

Volume de diluant (µL) 50 50 50 50 50 50 50

Volume d’ATBQà 256 µg/mL (µL) 50

Volume de la cupule précédente (µL) 50 50 50 50 50

Volume d’inoculum (µL) 50 50 50 50 50 50 50

Dilution ATBQ

Concentration en ATBQ (µg/mL)

Trouble - - - - - - +

• Efficacité mesurée par :✦ .

✦ .

45

Tube %%%%%%%%1%% %%%2%%%%% %%3%%%%%4 %%%%%5%% %%%%6%%% %%%%

+ + %% %%%-%%%% %%-%% %%% %-%%% %%+ %%%+ + %%

Dénombrement%survivants.

Tube %n°2

Tube %n°3

Tube %n°4

Déterm ina tion%C MI

Déterm ina tion%C MB

Lec ture %a près%inc uba tion%de %18h%à %37°C

3.3.3. Efficacité (2)

• Résistance :✦ Action sur certaines bactéries et pas sur d’autres

✦ Caractère résistant porté par chromosome ou plasmide (caractère constant)

✦ Ex : résistance des coques Gram + aux polymyxines

• Résistance :✦ par sur le chromosome bactérien

✦ par mutation ou d’un plasmide portant un de

46

3.3.4. Résistances (1)

• Mécanismes de résistance✦ Absence de pénétration de l’antibiotique

✦ Excrétion active

✦ Destruction de l’antibiotique

✦ Séquestration de l’antibiotique par une protéine

✦ Production accrue de la cible

✦ Modification de la cible

47

3.3.4. Résistances (2) CONCLUSION

Agents physiques Agents chimiques

AGENTS ANTI-MICROBIENS

Peu spécifiques Peu spécifiques Spécifiques

Sulfamides

Agents chimio-thérapeutiques

48