[ ]1

Colonnes HPLC XBridge™

Polyvalence et performances inégalées

La gamme de colonnes HPLC XBridge™ a été conçue pour offrir une flexibilité maximale

lors du développement de méthodes HPLC. Elles permettent aux chromatographistes

de développer plus rapidement et avec davantage de fiabilité des séparations robustes

et d'exploiter au maximum les effets du pH. Grâce à la combinaison du greffage, du

procédé de « endcapping » et de la synthèse de particules, répondant aux normes de

fabrication et de qualité les plus sévères, les colonnes XBridge représentent une solution

éprouvée pour vos séparations chromatographiques, même les plus complexes.

■ Flexibilité nécessaire pour travailler avec une gamme inégalée de pH et de tempéatures

■ Transposition directe des méthodes HPLC vers la technologie UltraPerformance LC®

■ Longévité incomparable des colonnes

Technologie Beh

[ ]4

Commercialisée pour la première fois en 1999 pour la gamme de colonnes HPLC XTerra®, la Technologie brevetée de Particules Hybrides organiques/inorganiques

(« Hybrid Particle Technology », HPT)* de Waters parvient à surmonter les limites considérables que rencontrent les colonnes de phase inverse à base de silice,

notamment l'instabilité hydrolytique à pH élevé. La seconde génération de cette technologie, connue sous le nom de Technologie BEH™ et associée aux colonnes

BEH ACQUITY UPLC® et XBridge HPLC, constitue une nouvelle étape décisive dans l'histoire de la chromatographie. Toute la gamme de pH peut désormais être utilisée

pour développer en routine les méthodes chromatographiques.

*Brevets américains 6,686,035 ; 7,223,473 ; 7,250,214

Lors de la synthèse des particules BEH, le monomère bis (triéthoxysilyl) éthane

contient un pont éthane préformé. Ce pont éthane transmet la résistance

des polymères à la dissolution à pH élevé à la structure de la particule

de silice sans toutefois porter atteinte à l'intégrité de la structure ou

l'efficacité de cette particule.

Synt hèSe deS part iculeS de t echnologie Beh

diSSolut ion deS part iculeS à ph élev é

3OH-

Si

Si(OH)4

O

O O Si

O

O Si

O

O Si

O

O Si

O

O Si

O

OHOH

OSi

O

O O

O O Si

O

O O O O

O Si

O

O O O O O O O

OH OH OH

SiO O Si O Si O Si O Si O Si OSiO O Si O Si

SiO O Si

O

O Si

O

O Si

O

O Si O Si

O

OHOH

OSi

O

CH2 O

O O Si

O

OH OH O

O Si

CH2

CH2

O O O O O O O

OH OH CH2 CH2

CH2

CH2

SiO O

O

Si O Si O Si O Si O Si OSi

Si

O

O

O

Si

Si

O

CH2

OH

Si O O

O

O

O

O Si O Si

3OH-

Si

Si(OH)4

O

O O Si

O

O Si

O

O Si

O

O Si

O

O Si

O

OHOH

OSi

O

O O

O O Si

O

O O O O

O Si

O

O O O O O O O

OH OH OH

SiO O Si O Si O Si O Si O Si OSiO O Si O Si

SiO O Si

O

O Si

O

O Si

O

O Si O Si

O

OHOH

OSi

O

CH2 O

O O Si

O

OH OH O

O Si

CH2

CH2

O O O O O O O

OH OH CH2 CH2

CH2

CH2

SiO O

O

Si O Si O Si O Si O Si OSi

Si

O

O

O

Si

Si

O

CH2

OH

Si O O

O

O

O

O Si O Si

■ Seules 4 liaisons doivent être hydrolysées ■ Jusqu'à 6 liaisons doivent être hydrolysées

■ Si(OH)4 est très soluble dans l'eau ■ Plus hydrophobe, réactivité avec l’eau inférieure à celle de la silice

■ Dissolution facile de la silice à pH > 7 ■ Formation de liaisons Si-O-Si quand d'autres rompent

■ Perte d'efficacité

particule de silice particule XBridge

+4

Si

EtO

EtO OEtEtO

Si

E tOE tO

EtO

Si

OEt

OEt

OEt

Si

E tO

O

CH2 CH2

CH2

CH2

Si O Si

E tO

OE t

Si

O

O

OEt

Si

O

SiOO

Et

OOO

Et

E t Et n

Anal. Chem. 2003, 75, 6781-6788

Polyéthoxysilane (BPEOS)

Tetraéthoxysilane (TEOS)

Bis(triéthoxysilyt)éthane (BTEE)

Noyau Noyau

Technologie Beh

[ ]5

caractéristiques des particules hybrides

Les groupes hybrides présents à la surface réduisent la concentration

silanolique en surface

Les ponts internes fournissent une forte réticulation

Les groupes hybrides internes et de surface augmentent l'hydrophobicité

avantageS de la t echnologie hyBride

Grâce à la Technologie BEH, les chromatographistes disposent de la souplesse nécessaire pour transposer les méthodes entre les modes UPLC, analytique et préparatif.

En associant la Technologie BEH à la technologie brevetée d'optimisation de la densité de remplissage OBD™, les colonnes préparatives XBridge Prep OBD présentent

une capacité de charge élevée, une efficacité maximale et une longévité inégalée. La Technologie BEH est utilisée pour les particules HPLC XBridge et pour les

particules ACQUITY UPLC BEH, ce qui permet une transposition directe entre les séparations HPLC et UPLC. La Technologie BEH offre des solutions précises et fiables aux

chromatographistes qui cherchent à effectuer des séparations UPLC (utilisation de colonnes de granulométrie inférieure à 2 µm), à développer des méthodes de purification

ou des séparations analytiques.

avantages pour la chromatographie de phase inverse

Faible facteur de traînée USP pour les bases

Stabilité chimique et mécanique améliorée

Forte stabilité de la colonne à pH élevé

Technologie de séparation des peptides

Technologie de séparation des oligonucléotides

COLOnnES ACQUITY UPLC BEH

Colonnes XBridge

Colonnes BEH pour bioséparations

Colonnes préparatives XBridge Prep OBD

p roduit S ut il iSant la t echnologie Beh

XBridge c18/c8

[ ]6

XBridge C18/C8

Les deux phases HPLC les plus classiques, à savoir les phases C18 et C8, sont les outils de travail idéaux pour le développement de méthodes pour une large gamme d’appli-

cations. Les colonnes XBridge C18/C8 offrent une grande souplesse lors du développement de méthodes. L'utilisation du greffage trifonctionnel et du procédé avancé de

« endcapping » a permis d'observer une reproductibilité, des performances et une durée de vie exceptionnelles sur toute la gamme de pH (1 à 12).

* Valeurs nominales

O Si

O

O

O SiO

O

O SiO

O

O Si

CHPolar Group

3

CH3

O Si

O

O

O SiO

O

O SiO

O

O Si

CHPolar Group

3

CH3

Type de greffon C18 trifonctionnel C8 trifonctionnel

granulométries disponibles (µm) 2,5 ; 3,5 ; 5 ; 10 2,5 ; 3,5 ; 5 ; 10

densité du greffon* 3,1 µmol/m2 3,2 µmol/m2

Teneur en carbone* 18 % 13 %

Procédé de « endcapping » Exclusif Exclusif

gamme de pH 1-12 1-12

Limites de température à bas pH 80 °C 60 °C

Limites de température à pH élevé 45 °C 45 °C

USP L1 L7

diamètre des pores* 135 Å 135 Å

Volume des pores* 0,7 mL/g 0,7 mL/g

Surface spécifique* 185 m2/g 185 m2/g

Phas

e gr

effé

ePa

rticu

le B

EH

Caractéristiques des colonnes XBridge C18 et C8

StaBil it é à BaS ph

L'instabilité à bas pH est due à la rupture des liaisons siloxanes en raison de

l'hydrolyse acide. Pour améliorer la stabilité des phases greffées à bas pH, il est

nécessaire de ralentir la vitesse de l'hydrolyse. Pour ce faire, les colonnes XBridge

C18, C8 et Phenyl ont recours à un greffage trifonctionnel exclusif et au procédé de

« endcapping ». Dans des conditions d'analyse accélérée à bas pH, les colonnes

XBridge C18 affichent une faible perte de rétention, donc une meilleure stabilité

hydrolytique, par rapport aux colonnes remplies de phases synthétisées à l'aide de

silanes monofonctionnels.

StaBil it é à ph élev é

Le mécanisme de rupture prédominant est l'attaque nucléophile par les ions

hydroxydes sur les liaisons siloxanes structurelles. D'un point de vue chromato-

graphique, cela provoque des volumes morts de colonnes, une dégradation de la

finesse des pics et/ou une perte d'efficacité. Les particules XBridge intègrent des

ponts éthane évitant la dissolution des particules à la matrice de silice. Pour libé-

rer une seule unité à pont éthane d’une particule, il faudrait rompre six liaisons

siloxaniques. La stabilité chimique est illustrée par l'augmentation de la durée de

vie des colonnes à pH élevé montrée ci-dessous.

Zorbax® SB C18

XBridge C18

SunFire C18

Intersil® ODS-3

Ace® C18

Gemini™ C18

Luna® C18 (2)

0 20 40 60 80 100

XBridge C18

XTerra MS C18

Gemini™ C18

Zorbax® Extend C18

Luna® C18 (2)

YMC™ Pro C18

0 50 100 150 200

Nombre d’heures en présence de TFA à 1 %, à 80 °C, pour une perte de rétention de 20 % Nombre d’heures en présence de TEA à 50 mM, à 50 °C, pour une perte d'efficacité de 50 %

Modification du ph pour un développeMent de MéthodeS optiMal

En chromatographie de phase inverse, le pH de la phase mobile joue un rôle important sur la sélectivité et les variations du facteur de rétention des composés ionisés.

Les composés acides présentent ainsi une rétention élevée pour des valeurs de pH inférieures à leur pKa. Les composés basiques, pour leur part, affichent une rétention plus

élevée lorsque les valeurs de pH sont supérieures à leur pKa. De nombreux composés présentant une activité pharmacologique peuvent être ionisés. De ce fait, une colonne

travaillant sur une gamme de pH plus large offre une grande flexibilité pour le développement de méthodes pharmaceutiques. Les colonnes XBridge peuvent être utilisées

sur quasiment toute la gamme de pH (pH 1 à 12) et offrent par conséquent une formidable souplesse pour le développement de méthodes.

Le chlorydrate de lincomycine est un antibiotique utilisé pour soigner les hommes et les animaux et agit essentiellement contre les agents pathogènes Gram positifs. La méthode USP actuelle fournit toutefois des pics et une sensibilité de mauvaise qualité. Afin d'améliorer la méthode, le pH est utilisé pour affiner les pics et augmenter la résolution.

Une fois le pH choisi, la pente du gradient a été optimisée pour améliorer la résolution.

XBridge c18/c8

[ ]7

AU

AU

AU

0

0.5

0

0.5

0

0.5

0 5 10 15 min

Colonne : XBridge C18, 3,0 x 100 mm, 3,5 µmPhase mobile A1 : Phosphate de potassium à 100 mM, pH 2Phase mobile A2 : Phosphate de potassium à 100 mM, pH 7Phase mobile A3 : Phosphate de potassium à 100 mM, pH 12Phase mobile B : ACNPhase mobile C : H2ODébit : 0,6 mL/minGradient : Temps Profil (min) %A %B %C 0,0 20 5 75 15,0 20 50 30 Température : 30 °CVolume injecté : 20 µL à 30 mg/mL dans H2ODétection : UV à 215 nm Instrument : Système Alliance® 2695 de Waters avec détecteur PDA 2996

0 5 10 15 min

Colonne : XBridge C18, 3,0 x 100 mm, 3,5 µmPhase mobile A : Phosphate de potassium à 100 mM, pH 12Phase mobile B : AcétonitrilePhase mobile C : EauGradient : Temps Profil (min) %A %B %C 0,0 20 15 65 15,0 20 35 45 Débit : 0,6 mL/minVolume injecté : 20 µL à 30 mg/mL dans de l'eauTempérature : 30 °CDétection : UV à 215 nmInstrument : Système Alliance 2695 de Waters avec détecteur PDA 2996

pH 2Pics largesSaturation de la colonneFaible rétention - composé ionisé

pH 7Pics plus fins

Meilleure rétention - composé ionisé à 50 %Co-élution

pH 12Finesse de pics maximale

Bonne rétention - composé non-ionisé à 100 %Meilleure résolution

excellente charge

résolution optimisée

excellente finesse de pics

0.25 %

1.1 %

7.3 %

XBridge c18/c8

[ ]8

éliMinat ion du relargage en Sp ect roMet rie de MaSSe

0.0E+00

5.0E+06

1.0E+07

1.5E+07

2.0E+07

2.5E+07

3.0E+07

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 min

XBridge C18

Pas de colonne

Nom

bre

d’io

ns

Grâce au couplage entre la spectrométrie de masse et la technique HPLC, les chimistes disposent

d'une sensibilité et d'une sélectivité supérieures. Toutefois, pour exploiter tous les avantages des

couplages LC/MS, il est essentiel d'utiliser des colonnes à faible relargage. Les colonnes XBridge,

remplies de particules de Technologie BEH, éliminent quasiment tout relargage en fournissant

une meilleure stabilité hydrolytique et des particules résistantes. Comme illustré ci-dessous, le

relargage par rapport à un balayage du bruit de fond MS est négligeable.

t irer p rofit deS avantageS deS taMponS phoSphat e

Les tampons phosphates possèdent une sélectivité unique, une excellente transparence UV et

un bon pouvoir tampon à diverses valeurs de pKa. Toutefois, en raison de la nature agressive des

phosphates, la durée de vie des colonnes en silice traditionnelles est réduite de manière significative. La

résistance chimique des particules BEH étant améliorée, les colonnes XBridge fournissent d'excel-

lentes performances avec les tampons phosphates sur toute la gamme de pH.

changeMent de ph : faiBle / élev é

La possibilité de changer de pH (pH élevé/bas pH), au cours

d’analyses successives, réduit considérablement les arrês

inopinés des instruments et les coûts associés. Habituel-

lement, des colonnes distinctes sont attribuées à chaque

valeur de pH de manière à éviter une dégradation préma-

turée de la colonne. Grâce à la présence des particules de

Technologie BEH et aux procédés novateurs de greffage et

de « endcapping », les colonnes HPLC XBridge peuvent être

utilisées à des pH plus élevés que les colonnes convention-

nelles, et supportent le passage de pH acide à pH basique

sans perte de performances. En d'autres termes, une

colonne XBridge peut être utilisée tant en milieu acide qu'en

milieu basique : vous évitez ainsi les temps nécessaires au

changement de colonnes et n'êtes plus obligé de disposer

de plusieurs colonnes pour effectuer des analyses en milieu

acide ou basique.

Lors de cette évaluation, on a examiné l'effet d'une variation soudaine du pH de la phase mobile suite à l'injection d'un mélange de composés acides, basi-ques et neutres. Chaque colonne a tout d'abord été équilibrée à pH 3, puis le mélange test a été injecté une fois. Ensuite, chaque colonne a été équilibrée à pH 10, puis le mélange test a été injecté une fois. Cette séquence a été répétée plusieurs milliers de fois sans que la colonne XBridge C18 ne soit détériorée.

V0 BA

N

0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 min

V0

BA N

0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 min

B = A = N =

B = A = N =

Inj. n° 2

Inj. n° 4800

basiqueacideneutre

basiqueacideneutre

Inj. n° 2

Inj. n° 1724

V0 BA

N

0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 min

V0

BA N

0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 min

B = A = N =

B = A = N =

Inj. n° 2

Inj. n° 4800

basiqueacideneutre

basiqueacideneutre

Inj. n° 2

Inj. n° 1724

Colonne XBridge

Colonne gemini™

0 1 2 3 4 5 6 7 8 min

0 1 2 3 4 5 6 7 8 min

0 1 2 3 4 5 6 7 8 min

1

6

6

6

5

5

5

4

4

4

3

3

3

2

2

2

1

1

pH 2

pH 7

pH 12

Usine de fabrication Waters

Waters Corporation s'est vue attribuer les

homologations et certifications suivantes :

• HomologationauprèsdelaFoodandDrugAdminis-

tration américaine : dispositifs médicaux cGMP et

de classe 1

• ISO9001:2000

• ISO13485:2003

XBridge c18/c8

[ ]9

StaBil it é pour deS perforManc eS f iaBleS

La Techologie BEH produit des particules qui améliorent les performances des colonnes ainsi

que leur durée de vie dans des conditions opératoires difficiles et exigeantes. nos techniques de

synthèse des particules à la pointe de la technologie ont permis de concevoir et de développer des

colonnes dotées d'une durée de vie nettement supérieure à celle des principales colonnes HPLC

traditionnelles, et ce à pH faible et élevé.

Les usines Waters à la pointe du progrès fabriquent des

colonnes HPLC et UPLC qui maximisent les performances

des laboratoires. Waters, fabricant exclusif de particules

de silice et hybrides, est en mesure d'effectuer un suivi et un

contrôle réguliers de l'ensemble des procédés de fabrication

durant toute la durée de vie du produit. Le contrôle et la

répétabilité entre les lots de phases sont par conséquent

inégalés.

rep roduct iBil it é du dév elop peMent de Mét hodeS

Waters continue de servir de référence en matière de reproductibilité de lot à lot. À commencer par

les colonnes Symmetry® en 1994, puis en poursuivant avec les colonnes HPLC XTerra, Atlantis® et

SunFire™, les colonnes Waters ont toujours fourni des résultats constants. Les colonnes XBridge sont

fabriquées sur des installations certifiées cGMP, ISO9001 ISO13485. Les utilisateurs sont ainsi

assurés de pouvoir reproduire, d'une année sur l'autre, les séparations obtenues.

0 10 20 30 min

Les résultats ci-dessus ont été obtenus lors d'une évaluation de colonnes HPLC de gran-de envergure menée par un grand groupe pharmaceutique. La stabilité de l'efficacité et la sélectivité de 18 colonnes au total, ainsi que la reproductibilité d'un lot à l'autre, ont été évaluées au cours d'une utilisation prolongée dans des conditions difficiles. Résultat de cette évaluation : les colonnes XBridge HPLC ont été déclarées meilleures colonnes destinées au développement de méthodes.

Données mises à disposition par novartis.

0 5 10 15 20 25 30 min

Analyse lot 1

Analyse lot 13

Analyse lot 15

Analyse lot 34

Analyse lot 36

Analyse lot 3

XBridge C18, pH 2

XBridge C18, pH 11,3

1 analyse de lot = 500 volumes

de colonne

5 µm

5 µm

10 µm

3,5 µm

3,5 µm

XBridge Phenyl

[ ]10

XBridge PHenyL

Les colonnes Phenyl sont souvent utilisées pour les séparations lorsque des sélectivités complémentaires sont nécessaires, notamment pour les composés d'intérêt à

cycle aromatique. Traditionnellement, les colonnes Phenyl étaient peu souvent utilisées en raison de leur manque de stabilité à bas pH. Les scientifiques travaillant

en développement de méthodes ne sont désormais plus limités par le pH lorsqu'ils utilisent des colonnes Phenyl. Grâce aux procédés innovants de greffage et de

« endcapping » utilisés sur les particules de Technologie BEH, les colonnes XBridge Phenyl fournissent une excellente stabilité quel que soit le pH et présentent la

meilleure reproductibilité du marché.

p erforManc eS SupérieureS

Les colonnes XBridge Phenyl allient le greffage trifonctionnel du ligand hexylphényle au procédé de « endcapping » breveté par Waters pour obtenir une stabilité unique à

bas pH, tout en conservant une excellente finesse de pics.

excellente finesse de pics

10 20 30 40 50 60 70 80 90 min

Zorbax® SB Phenyl

XBridge PhenylNUSP = 9300T USP = 1,20

NUSP = 920T USP = 6,59

Amitriptyline

Amitriptyline

50

60

70

80

90

100

0 20 40 60 80 100

XBridge™ Phenyl

Agilent Zorbax® SB-Phenyl

Phenomemex® Luna® Phenyl-Hexyl

Varian Pursuit® Diphenyl

Agilent Zorbax® Eclipse XDB Phenyl

Restek Ultra Phenyl

Probe: Éthylparabène

Nombre d’heures en présence de H2O, pH 1,0, à 80 °C

% ré

tent

ion

initi

ale

O Si

O

O

O SiO

O

O SiO

O

O Si

CHPolar Group

3

CH3

Type de greffon C6 Phenyl trifonctionnel

granulométries disponibles (µm) 2,5 ; 3,5 ; 5

densité du greffon* 3,0 µmol/m2

Teneur en carbone* 15 %

Procédé de « endcapping » Exclusif

gamme de pH 1-12

Limites de température à bas pH 80 °C

Limites de température à pH élevé 45 °C

USP L11

diamètre des pores* 135 Å

Volume des pores* 0,7 mL/g

Surface spécifique* 185 m2/g

* Valeurs nominales

Phas

e gr

effé

ePa

rticu

le B

EH

Caractéristiques des colonnes XBridge Phenyl

Stabilité unique à bas pH

XBridge Phenyl

[ ]11

Sélect iv it é unique

Les colonnes XBridge Phenyl fournissent une sélectivité complémentaire

par rapport aux colonnes à chaîne linéaire alkyle et à groupe polaire intercalé,

notamment pour les composés contenant une fonction aromatique. Ces

colonnes offrent davantage de flexibilité pour le développement de

méthodes orthogonales dans le cadre de séparations difficiles.

ut il iSat ion de ph acideS pour répondre auX déf iS du dév elop p eMent de Mét hodeS

De tous temps, la séparation des acides aromatiques à l'aide des colonnes C18 traditionnelles a été difficile. Ces composés, dérivés du phénol, possèdent des cycles

aromatiques, ce qui rend logique l'utilisation d'une colonne Phenyl. Toutefois, il a été démontré qu'il était essentiel, pour réussir la séparation de ce type de composés, de

travailler dans des conditions acides, ce qui pose un problème de stabilité à la majorité des colonnes Phenyl disponibles sur le marché. La réponse : les colonnes XBridge

Phenyl. Elles fournissent non seulement la sélectivité souhaitée (via des interactions π-π), mais aussi l'amélioration de la stabilité chimique qui allonge la durée de vie des

colonnes et permet une utilisation robuste à bas pH.

4 8 12 16 20 min

Acides

Bases

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 min

Les acides aromatiques sont utilisés dans plusieurs herbicides courants, tels que Silvex, Picloram et Weed-B-Gone. De nombreux autres acides organiques sont des acides extrêmement polaires difficiles à retenir sur des colonnes C18 traditionnelles. Les colonnes XBridge Phenyl sont pour leur part parfaitement capables de relever ce défi.

Colonne : XBridge Phenyl 4,6 × 100 mm, 3,5 µm

Référence : 186003334

Phase mobile A : H2O

Phase mobile B : ACN

Phase mobile C : NH4HCOOH à 100 mM, pH 3

Débit : 1 mL/min

Gradient : Temps Profil

(min) %A %B %C

0,0 85 5 10

8,00 65 25 10

10,00 10 80 10

11,00 10 80 10

12,00 85 5 10

15,00 85 5 10

Volume injecté : 20 µL

Reprise de l'échantillon : 10 µg/mL de tous les composés dans H2O

Température de la colonne : 35 °C

Température de l'échantillon : 60 °C

Détection : UV à 280 nm

Fréquence d'acquisition : 5 points/sec

Constante de temps : 1.0

Lavage de l'aiguille : 5/95 MeOH/H2O

Instrument : Système Alliance 2695 avec détecteur PDA 2996 Composés

1. Acide gallique

2. Acide protocatéchique

3. Acide 3,4-dihydroxyphénylacétique

4. Acide 4- hydroxybenzoïque

5. Picrolam

6. Acide vanillique

7. Acide syringique

8. Acide salicylique

9. Acide (dichloro-2,4 phénoxy)acétique (Weed-B-Gone)

10. Acide 2-(2,4,5-trichlorophénoxy) propionique (Silvex)

En fonction du greffon, on observe une variation de la sélectivité. Comme le montre le graphique ci-dessus, le greffon phényl améliore la rétention et fournit une sélectivité complémentaire pour les antidépres-seurs tricycliques (pics 6 et 7 par rapport au pic 8).

1

1

1

2

2

2

3

3

3

4,5

4

4

5

5

6

6

6

7

7

7

8

8

8

9

9,10

9

11

11

11

10

10

12

12

12

XBridge Phenyl

XBridge C18

XBridge Shield rP18

1

23 4

5

6

7

8 9 10

XBridge SHieLd rP18

Ces colonnes contenant des groupes polaires intercalés deviennent courantes auprès des chromatographistes travaillant en développement de méthodes en raison de la sélectivité

complémentaire qu'elles offrent par rapport aux chimies C18 traditionnelles. De plus, les colonnes XBridge Shield RP18 présentent une finesse de pics supérieure pour les composés

basiques. La technologie brevetée Shield* dispose d'un groupe carbamate intercalé dans le greffon qui « protège » littéralement les silanols de surface. En outre, cette fonctionnalité

permet d'utiliser un grand nombre de phases mobiles aqueuses tout en assurant la mouillabilité des pores, pour une rétention fiable et robuste.

*Brevet américain 5,374,755 [neue et al.]

XBridge Shield rP18

[ ]12

* Valeurs nominales

O Si

O

O

O SiO

O

O SiO

O

O Si

CHPolar Group

3

CH3

Type de greffon Groupe polaire intercalé monofonctionnel

granulométries disponibles (µm) 2,5 ; 3,5 ; 5 ; 10

densité du greffon* 3,3 µmol/m2

Teneur en carbone* 17 %

Procédé de « endcapping » TMS

gamme de pH 2-11

Limites de température à bas pH 30 °C

Limites de température à pH élevé 45 °C

USP L1

diamètre des pores* 135 Å

Volume des pores* 0,7 mL/g

Surface spécifique* 185 m2/g

Phas

e gr

effé

ePa

rticu

le B

EH

Caractéristiques des colonnes XBridge Shield rP18

qu'eSt-c e que la t echnologie « Shield » ?

Le début des années 1990 a vu naître des phases greffées novatrices, dans lesquel-

les des groupes fonctionnels polaires ont été intercalés dans les chaînes alkyles

C18 et C8. L'un des principaux avantages a été une réduction des interactions entre

les silanols et les composés basiques, ce qui a amélioré la finesse des pics. La pre-

mière génération de phases était synthétisée à l'aide d'un protocole à deux étapes.

Il consistait à modifier la surface des silanols avec un mélange de groupements

amines dérivatisés ou non et pouvant varier d'un lot à l'autre. Par conséquent, la

rétention des composés s'effectuait à la fois par mécanismes de phase inverse et

d'échange d'anions.

La seconde génération de phases est synthétisée en modifiant la surface en une

seule étape durant laquelle le groupe fonctionnel est intégré à un silane. Une seule

réaction avec le silane donne naissance à une seule structure, excluant toute possi-

bilité d'échange d'anions. Cette approche s'est avérée fournir une excellente repro-

ductibilité d'un lot à l'autre. L'élimination des mécanismes d'échange d'anions est

également importante puisqu'elle évite de possibles interactions secondaires avec

les composés chargés négativement.

Avantages de la technologie « Shield » :

■ Réduction des interactions entre le silanol et les composés basiques qui

entraîne une meilleure finesse de pics pour les bases.

■ Sélectivité unique : les facteurs de rétention sont en général réduits pour

les composés basiques et polaires alors que les composés apolaires ne sont

quasiment pas affectés.

■ Les phases greffées Shield présentent des temps de rétention reproductibles et

stables en présence de phases mobiles 100 % aqueuses. Dans de telles conditions,

les phases alkyles C8 et C18 traditionnelles subissent généralement le phénomène

d'assèchement des pores et les temps de rétention sont considérablement diminués.

« A review of Waters’ Bonded Phase Shield Technology and its Use in High Performance Liquid Chromatography (H PLC) White Paper »

Référence bibliographique 720000207En

Référence bibliographique

opt iMiSat ion de la Sélect iv it é danS le cadre du dév elop p eMent de Mét hodeS

Lors du développement de méthodes chromatographiques, les outils dont disposent les scientifiques sont, entre autres, le pH, les chimies de colonnes et les modificateurs

organiques. Les colonnes XBridge Shield RP18 fournissent une sélectivité complémentaire tout en fonctionnant parfaitement sur une large gamme de pH avec un grand

nombre de solvants différents. Cette fonctionnalité clé permet aux chromatographistes d'optimiser rapidement les conditions d'analyses, ce qui est indispensable pour

réussir les séparations.

De grandes variations de sélectivité sont observées en fonction des chimies et des modificateurs organiques.

Meilleure Séparat ion deS BaSeS

Certaines colonnes C18 présentent des interactions secondaires avec les composés basiques en raison de l'échange cationique faible avec les silanols résiduels, ce qui

produit une traînée de pics. Les colonnes XBridge Shield RP18, dotées de la technologie brevetée « Shield », réduisent l'interaction entre les silanols et les composés

basiques et fournissent des pics fins et parfaitement symétriques.

XBridge Shield rP18

[ ]13

0.00

0.02

0.04

0.06

AU

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 min

Composés1. Nordoxépine2. Triméthoprime3. Nortriptyline4. Doxépine5. Imipramine6. Amitriptyline7. Trimipramine

Colonne : XBridge Shield rP18, 4,6 X 50 mm, 3,5 µmRéférence : 186003042Phase mobile A : H2OPhase mobile B : MeOHPhase mobile C : NH4HCO3 à 100 mMDébit : 1,0 mL/min

Gradient : Temps Profil (min) %A %B %C 0 90 0 10 2 30 60 10 10 16 74 10 11 90 0 10 13 90 0 10

Volume injecté : 20 µLConcentration de l'échantillon : 10 µg/mL dans H2OTempérature : 35 °CDétection : UV à 254 nmFréquence d'acquisition : 5 points/secondeConstante de temps : 1.0Lavage de l'aiguille : 5/95 MeOH/H2OInstrument : Système Alliance 2695

avec détecteur PDA 2996

Acides

Bases

20 4 6 8 10 12 14 16 18 min

20 4 6 8 10 12 14 16 18 min

20 4 6 8 10 12 14 16 18 min

1

2

2

2

1

1

3

3

3

4

4

4

5

5

5

6

6

6

7,12

7

7

8

8,9

8

9

9

10

10

10

11

11

11

12

12

1

2

3

4 5

67

pH 10XBridge™ C18

Méthanol

XBridge™ Shield rP18

Méthanol

XBridge™ Shield rP18

Acétonitrile

* Valeurs nominales

O Si

O

O

O SiO

O

O SiO

O

O Si

CHPolar Group

3

CH3

Type de greffon BEH non greffées

granulométries disponibles (µm) 2,5 ; 3,5 ; 5

gamme de pH 1 - 8

Limites de température à bas pH 45 °C

Limites de température à pH élevé 45 °C

USP L3

diamètre des pores* 130 Å

Volume des pores* 0,7 mL/g

Surface spécifique* 185 m2/gParti

cule

BEH

Caractéristiques des colonnes XBridge HiLiC

XBridge hilic

[ ]14

XBridge HiLiC

La chromatographie par interaction hydrophile (HILIC) est un mode chromatographique qui peut être utilisé pour améliorer la rétention des composés extrêmement polaires

qui sont mal retenus par chromatographie de phase inverse. Les colonnes XBridge HILIC fournissent une sélectivité complémentaire aux colonnes de phase inverse

ainsi qu'une finesse de pics, une rétention et une durée de vie supérieures à celles des colonnes HILIC à base de silice. Grâce à la robustesse de la Technologie BEH, les

colonnes XBridge HILIC créent une nouvelle référence en matière de performances pour les séparations HILIC.

aMéliorat ion de la rét ent ion

Les mécanismes de rétention HILIC constituent une combinaison complexe de

partage, d'échange d'ions et de liaisons hydrogènes qui améliore la rétention des

composés polaires. Cette rétention a lieu en présence d'une phase stationnaire

polaire et de phases mobiles dont la composition en acétonitrile est supérieure à

80 %. Résultat : une rétention nettement supérieure à la phase inverse.

V0 = 0,35 min

V0 = 0,33 min

0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 min

HON+

Choline

XBridge C18

Facteur de rétention = 0

XBridge HiLiC

Facteur de rétention = 1,8 1 2 3 4 5 6 min0

Les colonnes XBridge HILIC retiennent les composés non retenus en phase inverse.

Composés1. 6-acétylmorphine2. Morphine3. Morphine-3-β-glucuronide

XBridge C18

XBridge HiLiC

3

2

1

12

3

Les colonnes XBridge HILIC fournissent une sélectivité complémentaire aux colonnes de phase inverse. Les métabolites polaires de la mor-phine sont mieux retenus en mode HILIC.

Sélect iv it é coMpléMentaire

Les colonnes XBridge HILIC fournissent une sélectivité complémentaire aux

colonnes de phase inverse. Dans certains cas, l'augmentation de la rétention

s'accompagne d'une inversion de l'ordre d'élution, ce qui peut présenter un

avantage lors du développement de séparations pour les composés polaires.

Phas

e gr

effé

e

StaBil it é chiMique

Des phases mobiles de pH intermédiaire sont souvent nécessaires pour ajuster l'état de charge des composés et/ou des substrats de manière à améliorer leur rétention.

Dans le cas des phases à base de silice, cela entraîne souvent une dissolution des particules, et par là même, une réduction de la durée de vie des colonnes. Les colonnes

XBridge HILIC intègrent la Technologie BEH qui offre une longévité exceptionnelle aux colonnes et permet d'effectuer des milliers d'injections sans perte de performances.

XBridge hilic

[ ]15

2 min10

3.0 x 107

2.0 x 107

1.0 x 107

3.0 x 107

2.0 x 107

1.0 x 107

0.2 1.0 2.0 min

ON+

O

HON+

1. Acétylcholine 2. Choline

Intensité

Intensité

0 2 4 6 min

HO

O

O

NCH3

H

O

HO

O

HO

NCH3

H

Conditionnement / Équilibre :200 µL CH3OH/ 200 µL H2O

Charge :300 µL de plasma humain surchargé de H3PO4 à 2 %

Lavage 1 : 200 µL de HCOOH à 2 % dans H2O

Lavage 2 :200 µL de CH3OH

Lavage 3 :200 µL de CH3CN

Élution : 50 µL de 5 % NH4OH dans CH3CN

Injection directe d’éluant :Élimine les étapes très longues

d’évaporation et de reconstitution

6-acétylmorphine10 ng/mL ajouté à du plasma humain

Morphine10 ng/mL ajouté à du plasma humain

XBridge C18

injection 10

injection 1000

injection 2000

XBridge HiLiC

1

2

3

Colonne : XBridge HiLiC, 2,1 x 50 mm, 3,5 μmPhase mobile A : 95/5 acétonitrile/ eau avec NH4+ CH3COO à 10 mM - pH 5,5Phase mobile B : 50/50 acétonitrile/ eau avec NH4+ CH3COO à 10 mM - pH 5,5Débit : 0,5 mL/minGradient : 1 – 99 % B après 2 minutes, 1 % B à 2,1 min,

maintenu pendant 0,4 minVolume injecté : 2,0 μLTempérature : 30 ˚CDétection : UV à 254 nm

Les colonnes XBridge HILIC font preuve d'une résistance chimique exceptionnelle qui allonge leur durée de vie.

2 1

1

2

10,5 x réponse 8,6 x réponse

Les colonnes XBridge HILIC améliorent la réponse en spectrométrie de masse, abaissant ainsi les limites de détection.

aMélioration de la SenSiBilité en SpectroMétrie de MaSSe

Le mode HILIC est devenu de plus en plus courant, notamment en raison de l'utili-

sation répandue de la spectrométrie de masse comme méthode de détection et

moyen d'améliorer la sensibilité pour quantifier les composés polaires. Contraire-

ment à la spectrométrie de phase inverse qui utilise des phases mobiles fortement

aqueuses pour permettre la rétention des composés polaires, le mode HILIC a

recours à des phases mobiles riches en acétonitrile. Cette phase mobile hautement

organique est simple à désolvater ; l'efficacité de l'ionisation et la réponse en

spectrométrie de masse sont ainsi améliorées.

étapeS de préparation deS échantillonS écourtéeS

Lors de l'application de méthodes d'extraction liquide-solide (SPE) pour la prépa-

ration des échantillons, une fraction fortement organique est souvent utilisée pour

procéder à une élution sélective des composés d'intérêt. Avant d'injecter cette

fraction organique sur la colonne de phase inverse, elle doit préalablement faire

l'objet d'une évaporation puis être reconstituée en partie avec un solvant aqueux.

Ces deux étapes sont souvent les plus longues de la méthode SPE. Avec les co-

lonnes XBridge HILIC , la fraction fortement organique peut être directement injectée,

ce qui rend l'étape d'évaporation superflue et augmente la cadence d'analyse des

échantillons.

Les colonnes XBridge HILIC permettent une injection directe des éluats SPE et améliorent la cadence d'analyse des échantillons.

Opiacés dans du plasma humainPlaques µElution Oasis® MCX

Composés1. Uracile2. 5-fluorocytosine3. Cytosine

Technologie UPlc

[ ]16

En 2004, Waters révolutionne les techniques de séparations chromatographiques en concevant le système ACQUITY UltraPerformance LC® (UPLC®). Ce système, capable

d'utiliser tout le potentiel des colonnes remplies de particules inférieures à 2 µm et résistantes à la pression, permet d'effectuer des séparations UPLC hautement résolutives.

La Technologie BEH est l'une des clés de cette nouvelle technologie de séparations, car elle fournit l'efficacité, la résistance et la gamme de pH nécessaires aux sépara-

tions UPLC.

Les colonnes ACQUITY UPLC BEH et XBridge HPLC utilisent toutes deux la Technologie BEH. Il est possible de procéder à une transposition directe entre les modes HPLC

et UPLC. Les séparations chromatographiques peuvent être transférées sans effort entre les modes UPLC, HPLC analytique et HPLC préparative. Les chromatographistes

peuvent ainsi profiter d'une large gamme de granulométries (c'est-à-dire 1,7 ; 2,5 ; 3,5 ; 5 et 10 µm), tout en préservant l'efficacité de la méthode.

t echnologie uplc : v it eSSe et réSolut ion

Pour les séparations isocratiques, la résolution (Rs) est proportion-nelle à la granulométrie. Par conséquent, plus les particules sont de petite taille, meilleure est la résolution.

0,04

0,08

0,08

0,04

0,04

Abs

orba

nce

at 2

70 n

m

Rs (2,3) = 2,90

Rs (2,3) = 7,42

Rs (2,3) = 4,58

Rs (2,3) = 4,57

Rs (2,3) = 6,18

2,1 x 30 mm, 1,7 µm

2,1 x 50 mm, 1,7 µm

2,1 x 100 mm, 1,7 µm

2,1 x 150 mm, 5,0 µm

UPLC

HPLC

2,1 x 150 mm, 1,7 µm

0,00 0,50 1,00 1,50

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00

0,00 2,00 4,00 6,00 7,00

0,00 0,50 1,50 2,001,00 2,50

0,00 5,00 15,0010,00 20,00

VITESSEEXTRÊME

RÉSOLUTIONEXTRÊME

VITESSE ETRÉSOLUTION

RÉSOLUTIONET VITESSE

Abs

orba

nce

at 2

70 n

mA

bsor

banc

e at

270

nm

Abs

orba

nce

at 2

70 n

mA

bsor

banc

e at

270

nm

UPLC Protocole de développement de méthodes

HPLC Protocole de développement de méthodes

AccelerATion dU deVeloPPeMenT de MeThodeS AVec lA Technologie UPlc

26,8 heuresTemps total d’exploration des conditions

pH 3 / acétonitrile pH 3 / acétonitrile

pH 3 / méthanol

pH 3 / méthanol

pH 10 / acétonitrile

pH 10 / acétonitrile

pH 10 / méthanol

pH 10 / méthanol

Temps : 6,7 heures / colonne x 4 colonnes

8 heuresTeMPS ToTAl d'eXPlorATion deS condiTionS

Temps : 2 heures / colonne x 4 colonnes

Le développement de méthodes à l'aide d'une méthodologie systématique

est l'une des manières les plus rapides et efficaces pour obtenir de nouvelles

séparations HPLC. L'évaluation de la combinaison du pH, de la chimie de colonne

et du modificateur organique permet de sélectionner les informations requises

pour décider en toute fiabilité de la marche à suivre pour développer une

méthode. Mais qu'en serait-il si les données pouvaient être obtenues plus

rapidement ? C'est la technologie UPLC qui nous livre la réponse à cette

question.

Un protocole classique de développement de méthodes à l'aide des technolo-

gies HPLC et UPLC est décrit ci-dessus. Ces deux méthodes fournissent le même

volume d'informations. La différence réside dans le temps nécessaire au labora-

toire pour obtenir ces informations. Dans cet exemple, la technologie UPLC

fournit une réponse 3 fois plus rapide ! L'ensemble du protocole peut ainsi être

traité en un seul jour tout en conservant la qualité des informations obtenues.

La technologie UPLC améliore considérablement la vitesse de développement

des méthodes et l'efficacité des laboratoires.

at t eindre un niv eau Supérieur pour la durée de v ie deS colonneS p réparat iv eS

Les faibles durées de vie et les performances irrégulières des colonnes préparatives sont des problématiques

auxquelles sont confrontés les chimistes. Toutefois, la réduction des coûts par purification et la minimisation de

la perte d'échantillons due à une défaillance prématurée de la colonne sont des impératifs. Après de nombreu-

ses années de recherche sur les phases et la conception de colonnes, Waters a conçu les colonnes préparatives

à densité de remplissage optimisée OBD (Optimum Bed Density) qui répondent à ces exigences. Ces colonnes

sont considérées par l'industrie comme étant les colonnes préparatives les plus stables, efficaces et présentant la meilleure reproductibilité du

marché.

Grâce à l'association des particules BEH XBridge et de la technologie OBD, ces colonnes préparatives atteignent des performances inégalées, une

efficacité maximale et une longue durée de vie, et permettent une transposition directe des méthodes.

Les colonnes préparatives XBridge Prep fournissent la même capacité de charge et fiabilité que nos colonnes préparatives XTerra tout en générant une contrepression inférieure et une meilleure efficacité.

efficacité maximale/diminution de 30 % de la contrepression

0 2 4 6 8 10 min

0 2 4 6 8 10 min 0 2 4 6 8 10 min

0 2 4 6 8 10 minXTerra Prep MS C18, 19 x 50 mm, 5 µmVolume injecté : 660 µLCharge totale : 60 °CContrepression maximale : 1000 psi

XBridge Prep C18, 19 x 50 mm, 5 µmVolume injecté : 660 µLCharge totale : 60 °CContrepression maximale : 700 psi

Phase mobile A : DEA à 0,1 % dans H2OPhase mobile B : DEA à 0,1 % dans CH3CNConcentration de l'échantillon : 300 mg/mL dans DMSOInstrument : Système AutoPurification® Détection : UV à 260 nm

Composés1. Labétolol (50 mg/mL)2. Quinine (50 mg/mL)3. Diltiazem (50 mg/mL)4. Vérapamil (100 mg/mL)5. Amitriptyline (50 mg/mL)

Débit : 23,8 mL/minGradient : Temps Profil (min) %A %B 0,0 95 5 1,79 95 5 6,79 5 95 7,79 5 95

Débit : 23,8 mL/minGradient : Temps Profil (min) %A %B 0,0 95 5 1,79 95 5 6,79 5 95 7,79 5 95

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min

La colonne préparative OBD présente la même densité de remplissage que les colonnes analytiques, ce qui permet une trans-position directe.

XBridge C18, 4,6 x 100 mm, 5 µmVolume injecté : 30 µLCharge totale : 60 °C

Phase mobile A : Acétate d'ammonium à 10 mM, pH 10Phase mobile B : Acétonitrile/bicarbonate d'ammonium à 100 mM (90/10)Débit : 1,06 min/mL (analytique) ; 18 min/mL (préparative)Gradient : 10 minutes pour passer de A 5 % à B 95 %Détection : UV à 270 nm

Composés1. Éconazole (100 mg/mL)2. Miconazole (100 mg/mL)

XBridge Prep C18, 19 x 100 mm, 5 µmVolume injecté : 510 µLCharge totale : 60 °C

Transposition directe

Technologie PréPArATiVe oBd

[ ]18

*Brevet du Royaume-Uni n° GB2408469

1 2

3

45

12

3

4

5

12 1 2

0

100

100

100

0

0

0 1 2 3 4 5 6 7 min

%

%

%

avantageS du ph lorS de la purif icat ion

-1

100

100

100

-8

00 2 4 6 8 10 min

%

%

%

L'utilisation d'un faible pH pour l'analyse des composés acides fournit une capacité de charge, une rétention et une séparation maximales.

L'utilisation d'un pH élevé pour l'analyse des composés basiques fournit une capacité de charge, une rétention et une séparation de qualité supérieure.

XBridge C18

XBridge C18

injection de bases

injection d’acides

réduct ion deS coûtS et augMentat ion de la durée de v ie deS colonneS

injection 1

injection 7 000

Brochure dédiée aux colonnes préparatives disposant de la technologie d'optimisation de la densité de remplissage

(« Optimum Bed density », OBd)

Référence bibliographique 720002336En

Référence bibliographique

Technologie PréPArATiVe oBd

[ ]19

La demande en purification de composés de haute pureté souli-

gne l'importance de colonnes préparatives robustes et stables.

Les échantillons, difficilement solubles, sont souvent dissous dans

des solvants forts, tels que le DMSO. Cette faible solubilité et

les chocs dus à la pression provenant de l'injection de volumes

importants de solvant organique sont les principales causes des

défaillances prématurées des colonnes.

La technologie OBD présente une résistance exceptionnelle aux

défaillances mécaniques grâce à la qualité du remplissage et

délivre des performances constantes d'une colonne à l'autre, ce

qui réduit les coûts et augmente la durée de vie des colonnes.

1,2

1

1

1

1

1

2

2

2

2

2

3

3

3

3

3

3

Bases1. Nordoxépine2. Doxépine3. Amitriptyline

Acides1. Oxacilline2. Cloxacilline3. Dicloxacilline

x5 sur l'axe y

x20 sur l'axe y

0,1 mg

0,8 mg

0,1 mg

0,3 mg

0,5 mg

0,2 mg

pH 2,3

pH 2,3

pH 7

pH 7

pH 10

pH 10

Technologie de SéPArATion deS PePTideS

[ ]20

Les colonnes Waters utilisées pour la séparation des peptides font également appel à des particules de Technologie BEH. Elles sont spéciale-

ment testées par le biais d'une carte peptidique de manière à garantir la qualité des séparations peptidiques et un comportement prévisible

des nombreux échantillons analysés en protéomique, lors de la caractérisation des protéines et de la synthèse des peptides. Disponibles en

granulométries 130 Å ou 300 Å et pour des particules comprises entre 1,7 µm et 10 µm, elles fournissent :

■ Des pics étroits et symétriques pour une résolution maximale

■ D'excellentes séparations pour un grand nombre de peptides

■ Des pics remarquablement fins et une rétention supérieure dans l'acide formique et l'acide trifluoroacétique pour des résultats chromato-graphiques optimaux

■ Une transposition directe des séparations UPLC (sur des colonnes de granulométrie inférieure à 2 µm) vers les séparations préparatives HPLC de 10 µm.

Les colonnes BEH peuvent être utilisées pour améliorer la résolution des digestions peptidiques complexes. Le chromatographiste peut attein-

dre une résolution maximale en utilisant les particules UPLC BEH de 1,7 µm avec des colonnes plus longues. Le pouvoir de séparation d'une

colonne peut être exprimé par le rapport de sa longueur sur la taille des particules (l/dp). Les colonnes dont le rapport l/dp est élevé fournis-

sent une meilleure efficacité et sont en règle générale utilisées pour les séparations les plus complexes. Les colonnes, de 150 mm, dédiées à la

technologie des séparations des peptides ACQUITY UPLC BEH en sont un exemple. Leur rapport l/dp est supérieur à 88 000, ce qui correspond

à une efficacité supérieure à 35 000 plateaux théoriques.

élaBorat ion de cart eS pept idiqueS pluS réSolut iv eS grâc e à l'uplc

Le graphique ci-dessus montre la résolution d'un mélange peptidique complexe après digestion protéique par la phospho-rylase b. En utilisant les colonnes dédiées à la technologie de séparation des peptides de Waters, la résolution des composés obtenue sur un système ACQUITY UPLC de Waters est meilleure que lors d'une analyse HPLC traditionnelle.

30 40 50 60 70 80 90 min

30 40 50 60 70 80 90 min

HPLC

Capacité de pics = 372

UPLC

Capacité de pics = 723

Technologie de SéPArATion deS oligonUcléoTideS

[ ]21

La technologie de séparation des oligonucléotides (« Oligonucleotides Separations Technology », OST) utilise des particules hybrides BEH et est

disponible dans des granulométries de 1,7 µm (conditions UPLC) et de 2,5 µm (conditions HPLC). Cette technologie offre la flexibilité nécessaire

pour répondre à un grand nombre de besoins analytiques et préparatifs tout en continuant à délivrer une résolution exceptionnelle et une longue

durée de vie.

La séparation des échantillons d'oligonucléotides synthétiques provenant de la détritylation est basée sur une méthode bien établie de chroma-

tographie d'appariement d'ions en phase inverse. Les colonnes ACQUITY UPLC OST C18 et XBridge OST C18 conviennent parfaitement à ce type

d'analyses et présentent les caractéristiques suivantes :

■ Séparations tout aussi efficaces, si ce n'est meilleures, que les méthodes PAGE-CGE ou HPLC par échange d'ions

■ Capacité de résoudre de grandes séquences d'oligonucléotides grâce au pouvoir de séparation apporté par les particules inférieures à 3 µm

■ Colonnes couvrant les besoins des laboratoires, de l'échelle analytique à l'échelle préparative

■ Durée de vie exceptionnellement longue des colonnes réduisant les coûts par analyse.

durée de v ie reMarquaBleMent longue deS colonneS

Séparation d’un polymère 55 – 25 mer : oligodésoxythymidine à double chaîne après détritylation

Disponibles en diverses tailles, les colonnes XBridge OST C18 sont les colonnes dédiées aux purifications d'oligonucléotides après détritylation.

Les spécialistes ont ainsi la possibilité de choisir la taille de colonne la mieux adaptée en fonction du volume d'échantillon d'oligonucléotides

disponible. Résultat : une résolution optimale et un rendement maximal pour le produit cible.

guide de sélection des colonnes XBridge OST C18 pour la purification d'oligonucléotides après détritylation

Colonne : XBridge OST C18, 2,5 µm (2,1 x 50 mm)Phase mobile : A : 10 % MeOH / 90 % (385 mM HFIP + 14,3 mM TEA) B : 25 % MeOH / 75 % (385 mM HFIP + 14,3 mM) Température de la colonne : 60 °C

Gradient : 0 à 100 % B en 30 min (10-25 % MeOH)Débit : 1,0 mL/minDétection : 260 nmSystème HPLC : Système Alliance Bio 2796 de Waters avec détecteur PDA

Colonne (mm) : Capacité de charge approx. (µmoles)** Débit (mL/min)

2,1 x 50 0,04 0,2

4,6 x 50 0,20 1,0

10,0 x 50 1,00 4,5

19,0 x 50* 4,00 16,0

30,0 x 50* 9,00 40,0

50,0 x 50* 25,00 110,0

* Colonne OST sur demande

** Ces valeurs sont approximatives et dépendent de la longueur des oligonucléotides, de la composition en bases et de la méthode de

collecte dite « heart-cutting » utilisée.

injection n° 4 : injection n° 1001 :

[ ]22

■ Analyse des statines

Les statines, ou inhibiteurs de l'HMG CoA réductase, sont des médicaments hypocholestérolémiants utilisés comme agents pharmaceutiques pour

faire baisser les taux de cholestérol chez les personnes atteintes ou susceptibles de développer une maladie cardiovasculaire. Pour ce faire, les

statines inhibent l'enzyme limitante HMG-CoA réductase de la voie du mévalonate qui est impliquée dans la synthèse du cholestérol. L'inhibition

de cette enzyme dans le foie stimule les récepteurs LDL, entraînant une meilleure élimination de lipoprotéines de basse densité (LDL) dans le

sang et une diminution des taux de cholestérol sanguins.

En outre, les statines jouent un rôle dans la prévention de l'athérosclérose. Les chercheurs avancent également l'hypothèse que les statines

aideraient à prévenir les maladies cardiovasculaires en empêchant la formation de thrombus, en stabilisant les taux de plaquettes, en stimulant

la fonction endothéliale et en calmant les réponses inflammatoires.

Composés1. Pravastatine2. Atorvastatine3. Lovastatine4. Simvastatine

0 1 3 5 7 min

Les colonnes XBridge Shield RP18 parviennent à séparer des composés fortement apparentés, ce qui accélère leur identification.

SolUTionS XBridge - indUSTrie PhArMAceUTiqUe

■ Analyse de la caféine et de ses métabolites

La caféine, un stimulant du système nerveux central et du métabolisme, est utilisé par les médecins pour réduire la fatigue physique et raviver

la vivacité mentale en cas de faiblesse ou de somnolence inhabituelles. La caféine stimule tout d'abord le système nerveux central aux niveaux

les plus élevés, entraînant une amélioration de la vivacité et de la vigilance, un développement plus rapide et plus clair de la pensée et une

meilleure coordination générale du corps.

Colonne : XBridge Phenyl, 4,6 × 100 mm, 3,5 µm Référence : 186003334 Phase mobile A : H2OPhase mobile B : ACNPhase mobile C : NH4HCO3 à 100 mM Débit : 1,0 mL/min Gradient : Temps Profil (min) %A %B %C 0,0 89 1 10 9,00 66 24 10 10,00 89 1 10 20,00 89 1 10Volume injecté : 10 µL Échantillon : Caféine (10 µg/mL), théobromine (10 µg/mL), 1-méthylxanthine, (10 µg/mL), acide 1,3-diméthylurique(10 g/mL), acide 1,7-diméthylxanthine, (10 µg/mL), acide 1,7-diméthyluricique dans H2O/NH4HCO3 (90/10) Température de la colonne : 30 °CDétection : UV à 280 nmFréquence d'acquisition : 5 points/secConstante de temps : 0.2Instrument : Système Alliance 2695 de Waters

avec détecteur PDA 2998

Les colonnes XBridge Phenyl permettent des sépara-tions rapides et robustes pour l'analyse de la caféine et de ses métabolites

Composés1. Acide 1,7-diméthylurique 2. 1-méthylxanthine 3. Acide 1,3-diméthylurique4. 1,7-diméthylxanthine5. Théobromine6. Caféine

0 2 4 6 8 min

Colonne : XBridge Shield rP18, 4,6 x 50 mm, 3,5 µm

Référence : 186003042

Phase mobile A : H2O

Phase mobile B : ACN

Phase mobile C : NH4HCO3 à 100 mM, pH 10

Débit : 1,2 mL/min

Volume injecté : 20 µL

Concentration de l'échantillon : 10 µg/mL dans H2O

Température : 30 °C

Détection : UV à 248 nm

Fréquence d'acquisition : 5 points/seconde

Constante de temps : 1.0

Lavage de l'aiguille : 5/95 MeOH/H2O

Instrument : Système Alliance 2695 de Waters avec détecteur PDA 2996

1

2

3

4

5

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2

34

SolUTionS XBridge - SécUriTé AliMenTAire

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Pour obtenir des notes d'application supplémentaires XBridge, rendez-vous sur www.waters.com/xbridge

Référence bibliographique

■ Analyse des additifs et conservateurs alimentaires

La saccharine est un édulcorant de synthèse. L'acide 4-hydroxybenzoïque est principalement connu comme base pour la préparation de ses

esters, les parabènes, qui sont utilisés comme conservateurs. L'acide déhydroacétique, le méthylparabène et l'acide sorbique sont des conserva-

teurs utilisés dans les produits cosmétiques et alimentaires.

Les colonnes XBridge Phenyl garantissent une quantification rapide des composés d'intérêt.

■ Analyse de la patuline dans le jus de pomme

La patuline est une mycotoxine fabriquée par plusieurs espèces de moisissures susceptibles de se former à la surface de nombreux aliments tels

que les céréales, les fruits et les fromages. La plus courante, Penicillum expansum, est souvent trouvée sur les pommes en décomposition. En

raison de sa toxicité, plusieurs institutions gouvernementales ont fixé des quantités maximales de palutine pouvant être ingérées chaque jour, la

préoccupation principale étant la consommation de jus de pomme par les enfants.

À l'aide de cette méthode, la palutine peut être entièrement séparée du pic de hydrométhylfurfural, un composé interférant courant.

Données mises à disposition par le Dr Vural Gökmen, Food Engineering Department, Hacettepe University, Ankara, Turquie 3 4 5 6 min

Colonne : XBridge C18, 4,6 x 100 mm, 3,5 µm

Référence : 186003033

Phase mobile : 0.1 % HCOOH/ACN (95/5, v/v)

Débit : 0,75 mL/min

Température : 60 °C

Détection : 276 nm

1 2 3 4 5 6 min

Composés1. Saccharine2. Acide p-hydroxybenzoïque 3. Acide sorbique4. Méthylparabène 5. Acide déhydroacétique

Colonne : XBridge Phenyl, 4,6 × 100 mm, 3,5 µmRéférence : 186003334 Phase mobile A : 20 mM KH2PO4, pH 2,5 Phase mobile B : ACN Débit : 1,0 mL/min Phase mobile isocratique de composition : A 75 % ; B 25 % Volume injecté : 10 µL

Échantillon : Saccharine (100 µg/mL), acide p-hydroxybenzoïque (10 µg/mL), acide déhydroacétique (100 µg/mL), méthylparabène (25 µg/mL), Acide sorbique (10 µg/mL) dans du KH2PO4/ACN (75/25)

Température de la colonne : 30 °CDétection : UV à 240 nmFréquence d'acquisition : 5 points/secConstante de temps : 0.2Instrument : Système Alliance 2695 de Waters

avec détecteur PDA 2996

1

2

1

23

45

Composés1. Hydroxyméthylfurfural2. Patuline

SolUTionS XBridge - enVironneMenT

[ ]24

■ Analyse des dérivés de la dnPH

Les agences de réglementation du monde entier sont intéressées par la mesure des formaldéhydes et autres aldéhydes présents dans l'air. En ef-

fet, les organismes chargés de la santé souhaiteraient connaître le rôle de ces aldéhydes dans les irritations respiratoires et les effets potentiellement

cancérigènes d'une exposition prolongée. Les fabricants de produits qui contribuent aux émissions d'aldéhydes dans l'air et de polluants intérieurs

travaillent dans les domaines suivants : matériaux de construction, produits en bois, tissus et textiles et construction automobile.

1 3 5 7 min

Les colonnes XBridge C18 séparent rapidement les composés d'intérêt en vue de leur quantification.

Colonne : XBridge Phenyl, 3,5 µm, 4,6 × 100 mm

Référence : 186003334

Phase mobile A : H2O

Phase mobile B : ACN

Phase mobile C : HCOOH à 0,2 % dans H2O

Débit : 1,2 mL/min

Gradient : Temps (min) %A %B C 0,0 40 50 10 2.67 40 50 10 6.67 0 90 10 7.33 40 50 10 11.00 40 50 10

Volume injecté : 10 µL

Échantillon : Acétaldéhyde-DNPH (10 µg/mL), acétone- DNPH (10 µg/mL), cyclohexanone-DNPH (10 µg/mL), formaldéhyde-DNPH (10 µg/mL), crotonaldéhyde-DNPH (10 µg/mL) dans

H2O/ACN (60/40)

Température de la colonne : 30 °C

Détection : UV à 254 nm

Fréquence d'acquisition : 5 points/sec

Constante de temps : 0.2

Instrument : Système Alliance 2695 de Waters avec détecteur PDA 2996

Composés

1. Formaldéhyde-DNPH

2. Acétaldéhyde-DNPH

3. Acétone-DNPH

4. Crotonaldéhyde-DNPH

5. Cyclohexanone-DNPH

1 2

3

4

5

■ Analyse d'explosifs

La méthode EPA 8330 décrit l'utilisation de la chromatographie liquide haute performance (HPLC) couplée à un détecteur d'ultra-violets (UV)

dans le but d'analyser des échantillons contenant ou soupçonnés de contenir des matières explosives. La méthode 8330 permet la détection de

parties par milliard (ppb) de matières explosives contenues dans les sols, l'eau et les sédiments.

2 6 10 14 18 22 min

Colonne : XBridge Phenyl, 2,1 x 150 mm, 3,5 µm

Référence : 186003324

Phase mobile : Formiate d'ammonium / isopropanol à 10 mM

Débit : 0,25 mL/min

Volume injecté : 10 µL

Température : 40 °C

Détection : UV à 254 nm

Système : Système Alliance HPLC de Waters équipé du détecteur 2487 double λ

Composés 1. HMX 2. RDX 3. 1,3,5-trinitrobenzène 4. 1,3 dinitrobenzène 5. Nitrobenzène 6. TNT 7. Tétryl 8. 2 amino-4,6 dinitrotoluène 9. 2,4 dinitrotoluène 10. 4 amino-2,6 dinitrotoluène 11. 2,6 dinitrotoluène 12. 4-nitrotoluène 13. 2-nitrotoluène 14. 3-nitrotoluène

Les colonnes XBridge Phenyl ont séparé avec exac-titude les 14 composés explosifs présents dans les échantillons d'intérêt.

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10 11

1213 14

SolUTionS XBridge - enVironneMenT

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Référence bibliographique

■ Analyse des aldéhydes et cétones comme dérivés de dnPH

Les méthodes EPA T011, 554 et 8315 décrivent l'utilisation de la chromatographie liquide haute performance (HPLC) couplée à un détecteur d'ultra-violets (UV)

dans le but d'identifier les aldéhydes et cétones en tant que dérivés de la dinitrophénylhydrazine (DnPH) dans l'eau potable (554), dans les échantillons de sols,

d'air, d'eau et de déchets prélevés selon la méthode 001 (8315 option 1), dans l'air ambiant (T011) et les échantillons d'air prélevés en intérieur selon la méthode

0100 (8315 option 2). Les méthodes EPA 554 et 8315 option 1 ciblent les mêmes composés (12). De la même manière, les méthodes T011 et 8315 option 2

ciblent les mêmes composés (15). Certains composés sont communs aux quatre méthodes.

Associées à ces méthodes EPA, les colonnes XBridge Phenyl aident à résoudre l'identification des dérivés de DNPH dans les échantillons environnementaux.

Colonne : XBridge Phenyl, 4,6 x 150 mm, 3,5 µm

Référence : 186003335

Phase mobile : Eau/tétrahydrofurane/acétonitrile

Débit : 1,5 mL/min

Volume injecté : 20 µL de chacun des mélanges standard AccuStandard (M- 8315-R1-DNPH et M-8315-R2-DNPH) dilués à 1/5 dans un mélange d'eau/acétonitrile (40/60)

Température : 35 °C

Détection : UV à 360 nm

Système : Système Alliance HPLC de Waters avec détecteur UV

1. Formaldéhyde 2. Acétaldéhyde 3. Propanal 4. Crotonaldéhyde 5. Butanal 6. Cyclohexanone 7. Pentanal 8. Hexanal 9. Heptanal 10. Octanal 11. Nonanal 12. Décanal

1. Formaldéhyde 2. Acétaldéhyde 3. Acétone 4. Acrylaldéhyde 5. Propanal 6. Crotonaldéhyde 7. Butanal 8. Benzaldéhyde 9. Isovaléraldéhyde 10. Pentanal 11. o-tolualdéhyde 12. p-tolulaldéhyde 13. m-tolulaldéhyde 14. Hexanal 15. 2-5 diméthylbenzaldéhyde

Dérivés DNPH du

Dérivés DNPH du

4 86 1210 1614 18 20 22 min

4 86 1210 1614 18 20 min

1

1 2

3

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78 9 10

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14

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2

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7

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1011

12

inforMATionS coMMerciAleS

[ ]26

Colonnes analytiques XBridge

Dimensions Type Granulométrie C18 C8 Shield RP18 Phenyl HILIC

1,0 x 50 mm Colonne 2,5 µm 186003118 186003164 186003136 186003306 —

2,1 x 10 mm Précolonne 2,5 µm 1860030561 1860030741 1860030651 1860033591 1860044551

2,1 x 20 mm IS™ Colonne 2,5 µm 186003201 186003167 186003139 186003307 —

2,1 x 30 mm Colonne 2,5 µm 186003084 186003099 186003091 186003308 1860044562,1 x 50 mm Colonne 2,5 µm 186003085 186003101 186003092 186003309 1860044573,0 x 20 mm IS Colonne 2,5 µm 186003087 186003168 186003140 186003310 —3,0 x 20 mm Précolonne 2,5 µm 1860030572 1860030752 1860030662 1860033602 —3,0 x 30 mm Colonne 2,5 µm 186003121 186003169 186003141 186003311 —3,0 x 50 mm Colonne 2,5 µm 186003122 186003170 186003142 186003312 1860044584,6 x 20 mm IS Colonne 2,5 µm 186003088 186003172 186003144 186003313 —4,6 x 20 mm Précolonne 2,5 µm 1860030582 1860030762 1860030672 1860033612 1860044592

4,6 x 30 mm Colonne 2,5 µm 186003089 186003173 186003145 186003314 —4,6 x 50 mm Colonne 2,5 µm 186003090 186003174 186003096 186003315 1860044604,6 x 75 mm Colonne 2,5 µm 186003124 186003175 186003146 186003316 186004461

1,0 x 50 mm Colonne 3,5 µm 186003126 186003177 186003148 186003317 1860044291,0 x 100 mm Colonne 3,5 µm 186003127 186003178 186003149 186003318 —1,0 x 150 mm Colonne 3,5 µm 186003128 186003179 186003150 186003319 —2,1 x 10 mm Précolonne 3,5 µm 1860030591 1860030771 1860030681 1860033621 1860044301

2,1 x 20 mm IS Colonne 3,5 µm 186003019 186003180 186003151 186003320 —2,1 x 30 mm Colonne 3,5 µm 186003020 186003046 186003035 186003321 1860044312,1 x 50 mm Colonne 3,5 µm 186003021 186003047 186003036 186003322 1860044322,1 x 100 mm Colonne 3,5 µm 186003022 186003048 186003037 186003323 1860044332,1 x 150 mm Colonne 3,5 µm 186003023 186003049 186003038 186003324 1860044343,0 x 20 mm IS Colonne 3,5 µm 186003024 186003181 186003152 186003325 —3,0 x 20 mm Précolonne 3,5 µm 1860030602 1860030782 1860030692 1860033632 —3,0 x 30 mm Colonne 3,5 µm 186003025 186003182 186003153 186003326 —3,0 x 50 mm Colonne 3,5 µm 186003026 186003050 186003039 186003327 1860044353,0 x 100 mm Colonne 3,5 µm 186003027 186003051 186003040 186003328 1860044363,0 x 150 mm Colonne 3,5 µm 186003028 186003052 186003041 186003329 —4,6 x 20 mm IS Colonne 3,5 µm 186003029 186003183 186003154 186003330 —4,6 x 20 mm Précolonne 3,5 µm 1860030612 1860030792 1860030702 1860033642 1860044372

4,6 x 30 mm Colonne 3,5 µm 186003030 186003184 186003155 186003331 1860044384,6 x 50 mm Colonne 3,5 µm 186003031 186003053 186003042 186003332 1860044394,6 x 75 mm Colonne 3,5 µm 186003032 186003185 186003043 186003333 —4,6 x 100 mm Colonne 3,5 µm 186003033 186003054 186003044 186003334 1860044404,6 x 150 mm Colonne 3,5 µm 186003034 186003055 186003045 186003335 1860044414,6 x 250 mm Colonne 3,5 µm 186003943 186003963 186003964 186003965 —

2,1 x 10 mm Précolonne 5 µm 1860030621 1860030801 1860030711 1860033661 1860044421

2,1 x 20 mm IS Colonne 5 µm 186003107 186003186 186003156 186003336 —2,1 x 30 mm Colonne 5 µm 186003129 186003187 186003157 186003337 1860044432,1 x 50 mm Colonne 5 µm 186003108 186003011 186002999 186003338 1860044442,1 x 100 mm Colonne 5 µm 186003109 186003012 186003002 186003339 1860044452,1 x 150 mm Colonne 5 µm 186003110 186003013 186003003 186003340 1860044463,0 x 20 mm IS Colonne 5 µm 186003130 186003188 186003158 186003341 —3,0 x 20 mm Précolonne 5 µm 1860030632 1860030812 1860030722 1860033672 —3,0 x 30 mm Colonne 5 µm 186003111 186003189 186003159 186003342 —3,0 x 50 mm Colonne 5 µm 186003131 186003190 186003160 186003343 1860044473,0 x 100 mm Colonne 5 µm 186003132 186003191 186003004 186003344 1860044483,0 x 150 mm Colonne 5 µm 186003112 186003014 186003005 186003345 —3,0 x 250 mm Colonne 5 µm 186003133 186003192 186003161 186003346 —4,6 x 20 mm IS Colonne 5 µm 186003134 186003193 186003162 186003347 —4,6 x 20 mm Précolonne 5 µm 1860030642 1860030822 1860030732 1860033682 1860044492

4,6 x 30 mm Colonne 5 µm 186003135 186003194 186003163 186003348 1860044504,6 x 50 mm Colonne 5 µm 186003113 186003015 186003006 186003349 1860044514,6 x 75 mm Colonne 5 µm 186003114 186003195 186003007 186003350 —4,6 x 100 mm Colonne 5 µm 186003115 186003016 186003008 186003351 1860044524,6 x 150 mm Colonne 5 µm 186003116 186003017 186003009 186003352 1860044534,6 x 250 mm Colonne 5 µm 186003117 186003018 186003010 186003353 186004454

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inforMATionS coMMerciAleS

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Colonnes préparatives XBridge

Dimensions Type Granulométrie C18 C8 Shield RP18 Phenyl

2,1 x 100 mm Kit MV 3,5 µm 186003766 186003777 186003788 1860037993,0 x 100 mm Kit MV 3,5 µm 186003767 186003778 186003789 1860038003,0 x 150 mm Kit MV 3,5 µm 186003768 186003779 186003790 1860038014,6 x 100 mm Kit MV 3,5 µm 186003769 186003780 186003791 1860038024,6 x 150 mm Kit MV 3,5 µm 186003770 186003781 186003792 1860038032,1 x 150 mm Kit MV 5 µm 186003771 186003782 186003793 1860038043,0 x 100 mm Kit MV 5 µm 186003772 186003783 186003794 1860038053,0 x 150 mm Kit MV 5 µm 186003773 186003784 186003795 1860038064,6 x 100 mm Kit MV 5 µm 186003774 186003785 186003796 1860038074,6 x 150 mm Kit MV 5 µm 186003775 186003786 186003797 1860038084,6 x 250 mm Kit MV 5 µm 186003776 186003787 186003798 186003809

Kits de validation de méthodes pour colonnes XBridge

1 Exige le support de garde universel Sentry - 2,1 x 10 mm WAT097958

2 Exige le support de garde universel Sentry - 3,0 x 20 mm / 4,6 x 20 mm WAT046910

3 Exige le support de garde préparatif - 10 x 10 mm 289000779

4 Exige le support de garde préparatif - 19 x 10 mm 186000709

Pour obtenir des informations sur les co-

lonnes ACQUITY UPLC, rendez-vous sur :

www.waters.com/acquitycolumns

Pour obtenir des informations sur les colonnes

en bioséparations, rendez-vous sur :

www.waters.com/biosep

Dimensions Type Granulométrie C18 C8 Shield RP18 Phenyl

10 x 10 mm Précolonne 5 µm 1860029721 1860029911 1860029831 1860033541

10 x 50 mm Colonne 5 µm 186002973 186003264 186003257 18600327110 x 100 mm Colonne 5 µm 186003255 186003265 186003258 18600327210 x 150 mm Colonne 5 µm 186002974 186003266 186003259 18600327310 x 250 mm Colonne 5 µm 186003256 186003267 186003260 18600327419 x 10 mm Précolonne 5 µm 1860029752 1860029922 1860029842 1860033552

OBD 19 x 30 mm Colonne 5 µm 186002976 186003268 186003261 186003275OBD 19 x 50 mm Colonne 5 µm 186002977 186002993 186002985 186003356OBD 19 x 100 mm Colonne 5 µm 186002978 186002994 186002986 186003357OBD 19 x 150 mm Colonne 5 µm 186002979 186002995 186002987 186003358OBD 19 x 250 mm Colonne 5 µm 186004021 186004023 186004022 186004024OBD 30 x 50 mm Colonne 5 µm 186002980 186002996 186002988 186003277OBD 30 x 75 mm Colonne 5 µm 186002981 186003269 186003262 186003278OBD 30 x 100 mm Colonne 5 µm 186002982 186002997 186002989 186003279OBD 30 x 150 mm Colonne 5 µm 186003284 186003083 186002990 186003276OBD 30 x 150 mm Colonne 5 µm 186004025 — — —OBD 50 x 50 mm Colonne 5 µm 186003933 186003934 186003935 186003936OBD 50 x 100 mm Colonne 5 µm 186003937 186003938 186003939 186003940OBD 50 x 150 mm Colonne 5 µm 186003929 — — —OBD 50 x 250 mm Colonne 5 µm 186004107 — — —

10 x 10 mm Précolonne 10 µm 1860038893 1860040033 1860039883 —10 x 150 mm Colonne 10 µm 186003890 186004004 186003989 —10 x 250 mm Colonne 10 µm 186003891 186004005 186003990 —OBD 19 x 10 mm Précolonne 10 µm 1860038924 1860040064 1860039914 —OBD 19 x 50 mm Colonne 10 µm 186003893 186004007 186003992 —OBD 19 x 100 mm Colonne 10 µm 186003901 186004008 186003993 —OBD 19 x 150 mm Colonne 10 µm 186003894 186004009 186003994 —OBD 19 x 250 mm Colonne 10 µm 186003895 186004010 186003995 —OBD 30 x 100 mm Colonne 10 µm 186003930 — — —OBD 30 x 150 mm Colonne 10 µm 186003896 186004011 186003996 —OBD 30 x 250 mm Colonne 10 µm 186003897 186004012 186003997 —OBD 50 x 50 mm Colonne 10 µm 186003898 186004013 186003998 —OBD 50 x 100 mm Colonne 10 µm 186003902 186004014 186003999 —OBD 50 x 150 mm Colonne 10 µm 186003899 186004015 186004001 —OBD 50 x 250 mm Colonne 10 µm 186003900 186004016 186004002 —

Autriche et Export européen (Europe centrale, orientale et du Sud, CEI et Moyen-Orient) +43 1 877 18 07

Australie +61 2 9933 1777

Belgique +32 2 726 1000

Brésil +55 11 5094-3788

Canada +1 800 252 4752 x2205

Chine +86 10 8586 8899

CEI/Russie +7 495 3367000

République tchèque +420 2 617 1 1384

Danemark +45 46 59 8080

Finlande +358 9 5659 6288

France +33 1 30 48 72 00

Allemagne +49 6196 400600

Hong Kong +852 29 64 1800

Hongrie +36 1 350 5086

Inde et sous-continent indien

+91 80 2837 1900

Irlande +353 1 448 1500

Italie +39 02 27 421 1

Japon +81 3 3471 7191

Corée +82 2 820 2700

Mexique +52 55 5200 1860

Pays-Bas+31 76 508 7200

Norvège +47 6 384 60 50

Pologne +48 22 833 4400

Porto Rico +1 787 747 8445

Singapour +65 6273 1221

Espagne +34 93 600 9300

Suède +46 8 555 11 500

Suisse +41 56 676 70 00

Taïwan +886 2 2543 1898

Royaume-Uni +44 208 238 6100

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720001255FR Avril 2008 SC-W P

Le système de gestion de la qualité des unités de production de Watersà Taunton, Massachusetts et à Wexford, Irlande, est conforme aux normes de gestion et d'assurance qualité de la norme internationale ISO 9001:2000. Waters fait périodiquement l'objet d'un audit conduit par l'organe d'enregistre-ment, pour s'assurer du respect de ces normes par l'entreprise.