7/23/2019 5-Mthodes Dnombrement Et Identification - H Lesouhaitier

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Stabilit Microbiologique des produitscosmtiques De la formule au packaging

Les mthodes de dnombrement et

didentification des microorganismes

Evreux 14 juin 2012

Hlne Lesouhaitier

Bioadmetys

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A.D.M.E

Microbiologie

Toxicologie

Etude de !erm"a#ilit"

$ro%il $&ysico'&imi(ue

'in"ti(ue ) $ro%il M"ta#oli(ue*$artenariat Biogalenys+

D"termination ,ualit"

Micro#iologi(ue D"termination E%%icacit"

Micro#iologi(ue

-is Assessment

/rritation oculaire et cutan"e /nteraction contenantcontenu

$&ototoxicit"

ensi#ilisation

-is Assessment

$&armaceuti(ue

'osm"ti(ue

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Contrle qualit microbiologique

Enjeu majeur :

Dnombrer et identifier rapidement et simultanment les

bactries vivantes prsentes dans un milieu

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Contrle microbiologique

Essais qualitatifs de prsenceabsence de microorganismes

viables

Essais quantitatifs de dnombrement des microorganismes

viables

Essais d!identification

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Contrle qualit microbiologique

"S# $%%&' : Dnombrement et dtection des bactries

arobies msop(iles

"S# %)$%$ : Dnombrement des levures et moisissures

"S# %*&%+ : Dtection des micro,organismes spcifis

absences de microorganismes pat(og-nes

(Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,

Candida albicans)

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Evaluation de l!efficacit d!antimicrobiens

.rocds de dcontamination

/raitement de surfaces 0plastiques1 ino23

Dsinfectants1 antiseptiques

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Mt(odes conventionnellesdnombrement

/ec(niques fondes sur la croissance en milieu de

culture

,$la(ue *sur%ace ou !ro%ondeur+

iltration

$$ *nom#re le !lus !ro#a#le+

dtection uniquement des microorganismes viables

temps de culture peut 4tre long 0m5cobactries3

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Mt(odes alternatives 0.E3

Mt(odes fondes sur la croissance

M"t&odes "lectroc&imi(ues

Mesure de la consommation ou !roduction de ga3

Bioluminescence *AT$+

Microcalorim"trie

Tur#idim"trie

Milieux c&romognes

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Mt(odes alternatives 0.E3

Mesures directes 0en temps rel3

/ndicateurs de via#ilit" *cytom"trie+

Tec&ni(ues de %iltration et "!i%luorescence directe

6nal5se de composants cellulaires

$&"noty!e *E5/A6 com!osition en acide gras+

7"noty!e *am!li%ication des acides nucl"i(ues !ar $'-+

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Mt(odes alternatives 0.E3

7cessit de valider la mt(ode

,5imite de d"tection

5imite de (uanti%ication

id"lit"

5in"arit"

Exactitude

89

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6utres mt(odes

iabilit cellulaire

Test 5ive Dead

Activit" en3ymati(ue 8 mar(ueurs %luorescents

Activit" en3ymati(ue 8 mar(ueurs colorim"tri(ues

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Mt(odes d!identification microbienne

Mt(odes bioc(imiques 0p(not5pe3

7aleries A$/

ystmes automatis"s

m"t&ode longue en cas d9urgence

Mt(odes molculaires 0gnot5pe3

$'-

"(uen:age A- 1; s

< = 24 &eures ou >

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Spectromtrie de masse

MA5D/T?M

Matrixassistedlaser desor!tion @ ionisationtimeo%%lig&t

mass s!ectrometry+Tec&ni(ue #as"e sur le !ro%il !rot"i(ue

Tec&ni(ue %acile6 ra!ide6 &aut d"#it6 !eu couteuse *&ors cot

de l9a!!areil+6 e%%icace

5imite 8 #ases de donn"es incom!ltes !our certains genres

Mt(odes d!identification microbienne

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Spectromtrie de masse

travaux !our une utilisation en routine dans les la#oratoires

de contrCle

es!oir !our les #act"ries ana"ro#ies

Mt(odes d!identification microbienne