7/23/2019 5-Mthodes Dnombrement Et Identification - H Lesouhaitier
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Stabilit Microbiologique des produitscosmtiques De la formule au packaging
Les mthodes de dnombrement et
didentification des microorganismes
Evreux 14 juin 2012
Hlne Lesouhaitier
Bioadmetys
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A.D.M.E
Microbiologie
Toxicologie
Etude de !erm"a#ilit"
$ro%il $&ysico'&imi(ue
'in"ti(ue ) $ro%il M"ta#oli(ue*$artenariat Biogalenys+
D"termination ,ualit"
Micro#iologi(ue D"termination E%%icacit"
Micro#iologi(ue
-is Assessment
/rritation oculaire et cutan"e /nteraction contenantcontenu
$&ototoxicit"
ensi#ilisation
-is Assessment
$&armaceuti(ue
'osm"ti(ue
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Contrle qualit microbiologique
Enjeu majeur :
Dnombrer et identifier rapidement et simultanment les
bactries vivantes prsentes dans un milieu
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Contrle microbiologique
Essais qualitatifs de prsenceabsence de microorganismes
viables
Essais quantitatifs de dnombrement des microorganismes
viables
Essais d!identification
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Contrle qualit microbiologique
"S# $%%&' : Dnombrement et dtection des bactries
arobies msop(iles
"S# %)$%$ : Dnombrement des levures et moisissures
"S# %*&%+ : Dtection des micro,organismes spcifis
absences de microorganismes pat(og-nes
(Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,
Candida albicans)
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Evaluation de l!efficacit d!antimicrobiens
.rocds de dcontamination
/raitement de surfaces 0plastiques1 ino23
Dsinfectants1 antiseptiques
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Mt(odes conventionnellesdnombrement
/ec(niques fondes sur la croissance en milieu de
culture
,$la(ue *sur%ace ou !ro%ondeur+
iltration
$$ *nom#re le !lus !ro#a#le+
dtection uniquement des microorganismes viables
temps de culture peut 4tre long 0m5cobactries3
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Mt(odes alternatives 0.E3
Mt(odes fondes sur la croissance
M"t&odes "lectroc&imi(ues
Mesure de la consommation ou !roduction de ga3
Bioluminescence *AT$+
Microcalorim"trie
Tur#idim"trie
Milieux c&romognes
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Mt(odes alternatives 0.E3
Mesures directes 0en temps rel3
/ndicateurs de via#ilit" *cytom"trie+
Tec&ni(ues de %iltration et "!i%luorescence directe
6nal5se de composants cellulaires
$&"noty!e *E5/A6 com!osition en acide gras+
7"noty!e *am!li%ication des acides nucl"i(ues !ar $'-+
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Mt(odes alternatives 0.E3
7cessit de valider la mt(ode
,5imite de d"tection
5imite de (uanti%ication
id"lit"
5in"arit"
Exactitude
89
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6utres mt(odes
iabilit cellulaire
Test 5ive Dead
Activit" en3ymati(ue 8 mar(ueurs %luorescents
Activit" en3ymati(ue 8 mar(ueurs colorim"tri(ues
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Mt(odes d!identification microbienne
Mt(odes bioc(imiques 0p(not5pe3
7aleries A$/
ystmes automatis"s
m"t&ode longue en cas d9urgence
Mt(odes molculaires 0gnot5pe3
$'-
"(uen:age A- 1; s
< = 24 &eures ou >
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Spectromtrie de masse
MA5D/T?M
Matrixassistedlaser desor!tion @ ionisationtimeo%%lig&t
mass s!ectrometry+Tec&ni(ue #as"e sur le !ro%il !rot"i(ue
Tec&ni(ue %acile6 ra!ide6 &aut d"#it6 !eu couteuse *&ors cot
de l9a!!areil+6 e%%icace
5imite 8 #ases de donn"es incom!ltes !our certains genres
Mt(odes d!identification microbienne
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Spectromtrie de masse
travaux !our une utilisation en routine dans les la#oratoires
de contrCle
es!oir !our les #act"ries ana"ro#ies
Mt(odes d!identification microbienne
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