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Cancer du seinStatut HER2 et IHC

L’importance de la phase technique


Détermination du statut HER2

par IHC et FISH/CISH


Activation par amplification

Oncogène HER2, chr 17q1-2

Surexpression

de la protéine


Tumeurs HER2 (+++)

Lobulaires < 5%

Canalaires < 2 cm 10 à 15%

> 2 cm 20 à 25%

grade I 0%

grade II 11%

grade III 27%

Cancers inflammatoires 30%

Cancers de la femme jeune


Hybridation in situ en fluorescence (FISH)

et Chromogenic in situ hybridization (CISH) :

amplification du

Détermination du statut de HER2/neu

Immunohistochimie (IHC) :

expression de la

gène

protéine


Les cellules tumorales des cancers du sein Nombre de chromosomes anormaux +++

( aneuploïdie)

HER-2: 17q21.1

Dr AURIAS, Institut Curie, Paris


Sur-représentation d’HER-2

des polysomies 17 des translocations déséquilibrées du 17q

Translocation déséquilibrée 17q

6 copies de HER2Dr COUTURIER, Institut Curie, Paris


Est-ce que le statut HER2 est stable,ou peut être acquis au cours de

l’évolution tumorale ?

Travail de Meng S PNAS 2004


Etude sur 33 patientes stade I à IV

– Comparaison de l’amplification HER2 dans les cellules tumorales circulantes et dans la tumeur primitive

Puis même étude sur 24 patientes HER2 -

Meng S, PNAS 2004


Le statut HER2 est concordant pour 29 patientes (11 +/+et 18 -/-).

Il est discordant pour 4 patientes présentant un statut HER2 tumoral positif (par FISH) et négatif sur les CTC ;

Pour 3 de ces patientes, un traitement par chimiothérapie et/ou Herceptin avait été instauré; faussant probablement les résultats, par la destruction des CTC HER2 positives.

Etude initiale sur 33 patientes HER2-


2ème étude sur 24 patientes HER2-

Evaluation sur CTC chez 24 patientes initialement HER2 « négatives » et en rechute

– 9 ont acquis un statut HER2 « positif » lors de la progression

– Les 9 patientes ont alors reçu Herceptin®

2RP et une RC


Critiques de l’étude

Les niveaux d’amplification (rapport HER2/chromosome 17) sont deux à trois fois plus élevés dans la tumeur initiale par rapport aux CTC.

Ceci est assez troublant car l’amplification génique est un phénomène stable.

Pourquoi les cellules métastatiques comme les CTC présentent des taux d’amplification plus faibles que ceux de la tumeur initiale ?

Pour les CTC qui acquièrent une amplification (tumeur initiale négative), les taux sont également faibles (de l’ordre de 2.2 soit inférieur à la valeur limite reconnue pour une amplification).


Plusieurs hypothèses se discutent :

– Le statut HER2 n’a pas été correctement évalué dans la tumeur initiale (problème technique, problème de fixation tissulaire)

– La CTC présente surtout une hyperploïdie du chromosome 17 entraînant essentiellement une sur représentation de HER2, ce qui expliquerait ces valeurs limites d’amplification

– La cellule métastatique acquiert vraiment une amplification de HER2, par sélection d’un clone HER2+ lors des nombreux traitements reçus par ces patientes pour certaines en phase terminale

Pourquoi les CTC présentent elles des niveaux d’amplification si bas ?


Si ces résultats sont confirmés,il faudra peut être re-tester

les patientes négatives sur la tumeur initiale,

au niveau des métastases

Conclusion


Cible des traitements anti HER-2 = protéine HER-2 exprimée à un haut niveau (IHC 3+)

Surexpression à haut niveau d'HER-2 (3+) = liée à l'amplification du gène

Les surreprésentations donnent des hyperexpressions de faible niveau

Leur réponse au traitement n'est pas connue

Objectif : détection des hyperexpressions/amplifications vraies

Amplification Surexpression x10


Détermination du statut HER-2par FISH

Technique idéale ‘’gold-standard’’ :- reproductibilité > à l'IHC- échecs identifiables (fixation BOUIN ++)- résultat sous forme d'une variable discontinue (numérique)

Plusieurs limitations :- investissement en microscopie en fluorescence- coût plus élevé que l'IHC (210 €)- nécessité d'un personnel entrainé- fixation FORMOL ou Formol-Ac Acétique

Indications :- calibration de l'IHC- détermination du statut des IHC 2+


Hybridation in situprincipe

Visualisation in situ du nombre de copies d'un gène

Sur coupe à partir de tissu congelé, ou fixé

Lecture en référence à l'histologie,

– identification des structures invasives

– intérêt par rapport aux méthodes moléculaires +++

La sonde visualisée soit par l'intermédiaire

. d'un fluorochrome (FISH) technique de référence

. d'un chromogène (CISH)


FISH HER-2

2 types de kits approuvés FDA- sonde HER-2 seule (Oncor/Ventana; Zymed) n. de copies HER-2

- sonde HER-2 + cent 17 (Vysis/Abott; Dako, …) rapport copies HER-2 / copies cent 17

Un impératif : distinguer les amplifications des sur-représentations


FISH HER-2

amplifications sur-représentations

centromère 17 HER-2

cent 17

HER-2

>10copies

6 copies


FISH HER-2 recommandations

- HER-2 : > 6 copies

- HER2/cent 17 : > 2.2 *

Les amas de signaux (hsr) signent les amplifications.

Donner les nombres de signaux HER-2

Vérifier HER-2/cent 17 en cas de 6-7 copies HER-2

Archiver les images (contrôle de qualité)

*ASCO 2006, recommandations JCO

Recommandation : afin de ne détecter que les amplifications vraies seuil ratio HER2/Cent 17 > 3


Cas non amplifiés

2 spots

5 spots

CISH Dr ARNOULD, Dijon


Cas avec amplification



Faible amplification

6 spots

Vérification par FISH du centromère du chr 17



Immunohistochimie : avantages

Visualisation de la protéine in situ > spécificité de l’évaluation de la surexpression

> quantification de la protéine cible

Largement répandue Sensible Automatisable et standardisable Faible coût Polyclonaux (A0485, Herceptest®), monoclonaux (CB11,

PathwayTM de Ventana, SP3 de lapin …)


Cas (++)Faible niveau d’amplification 8 – 10 copies du gène


Cas (+++)Fort niveau d’amplification > 15 copies du gène


IHC : inconvénients

Grande sensibilité

Fixation inadéquate : altération des antigènes

Pas de seuil de positivité consensus


Concordance statut HER2 FISH et IHC

Si…1. immunohistochimie calibrée

2. nombre de cas testés par an suffisant

90%


« Discordances » FISH / IHC

• amplification sans surexpression

• surexpression sans amplification

< 10%


Pas d’amplification Pas de surexpression

65 à 80% des cas


Fort niveau d’amplification Surexpression forte +++

15% à 30% des cas


Faible niveau d’amplification

Surexpression modérée ++ 5% des cas dont :

Pas d’amplification

40%

60%


Herceptest® (Dako)

Anticorps primaire polyclonal ( A0485)

Sur tissus fixés en FORMOL neutre tamponné

Réactifs prêts à l’emploi

Témoins : lignées cellulaires, nombre déterminé de copies HER2/neu

Système de lecture standardisée


Comparaison Herceptest® / FISH

Jacobs : J Clin Oncol, 1999, 17, 1974 - 82Pauletti : J Clin Oncol, 2000, 18, 3651- 64Lebeau : J Clin Oncol, 2001, 19, 354 - 63Tubbs : J Clin Oncol, 2001, 19, 2714 -21Perez : Mayo Clin Proc, 2002, 77, 148-154 Dowsett : J Pathol, 2003, 199, 418-423Ainsworth : J Clin Path 2005, 58, 1086-1090

– positivité faible (++) : 6 à 87 % de faux positifs– positivité forte (+++) : 6 à 25 % de faux positifs

Peut être une trop grande sensibilité mais la dernière version du kit donne de très bons résultats

– dans le respect strict des conditions de fixation non alcoolique,

– l’utilisation de témoins externes issus du laboratoire et dont le niveau d’amplification a été préalablement analysé

– l’apprentissage de l’interprétation


Recommandations pour calibrer l’IHC sur la

FISH et maintenir la concordance entre les 2

techniques

Arch Pathol Lab Med, 2003, 127, p 549Modern Path, 2003, 16, p 173

Histopathology, 2003,42, p 337


Conditions de fixation, préparation des coupes

Fixation optimale – en FORMOL neutre tamponné– moins d’1h après la résection chirurgicale– moins de 48h– fragment de 0.5 à 1cm d ’épaisseur

Préparation des blocs et coupes – conservation des blocs de paraffine à 20 à 25°C– réalisation des coupes idéalement moins d’une semaine

avant à 20- 25°C • au maximum 4 à 6 semaines avant la technique

d’immunohistochimie à condition d’un stockage à 4°C

– 3 à 5µm d’épaisseur


Calibration de la technique

• Conditions de réaction calibrées sur • FISH • témoins• lignées cellulaires

• pH du tampon de pré-traitement (pH : 6)• Choix de l’anticorps : monoclonal ou polyclonal• Dilution de l’anticorps primaire

CB11 : 1/500 à 1/800A0485 : 1/500 pour le formol

1/400 pour l’AFA

Adapter la dilution à chaque changement de technique, y compris entre deux automates identiques mais plus ou moins neufs (expérience de Claudius Regaud, Toulouse)


Témoins

Utilisation de contrôles :– lignées cellulaires, fixées comme le tissu analysé – bloc multi-tissulaire (0, ++, +++) : nombre de copies connues

par FISH

Bloc choisi avec tissu normal, en évitant le tissu décalcifié

Faux négatifs rares si pré-traitement par la chaleur


Glandes normales :témoin interne négatif de réaction

Augmenter la dilution de l’anticorps primaire si marquage des glandes normal


Fort niveau d’amplification Surexpression forte +++

Maladie de PAGET témoin positif de réaction


Témoin (++) amplifié (témoin intermédiaire très utile)

À obtenir auprès d’un centre expert FISH

Sur un des cas du laboratoire (condition de fixation et préparation des blocs identiques aux cas à tester )


Calibrage de l’immunohistochimieContrôle de qualité interne (1)

• Pas de marquage des glandes normales

• Coupe d’un bloc multi-tissulaire inclus à chaque manipulation :

– forte amplification (forte surexpression)

– amplification modérée (intensité modérée)

– pas d’amplification (pas de marquage)


Calibrage de l’immunohistochimiecontrôle de qualité interne (2)

Fréquence des cas positifs : 15 à 30%

Retester 5% des cas positifs et négatifs / an

– CURIE en 2005:• 24 cas 3+: 100% concordance avec la FISH

– 4 cas 8 copies HER2

– 18 cas > 10copies

– 2 cas NI

• 19 cas négatifs 100% concordance avec la FISH


MétastaseHER2+++

En cas de surexpression de HER2sur la tumeur primaire

Tumeur primaire

bronchique médullaire


HER2 et récepteurs hormonauxcorrélation inverse

Lal et al Am J Clin Pathol 2005

Koneckny JNCI 2003

Taucher et al Cancer 2003

Huang et al, Annals of Oncology , 2005

HER2 IHC+++

ou FISH positif

HER2 négatif

RO + 10 à 49% 80%

RP + 8 à 24% 53%


Calibrage de l’immunohistochimie contrôle de qualité externe :

Résultats à vérifier par FISH / CISH

Entraînement et formation du personnel

Tests nationaux (AFAQAP) 1 test / an européen (UK NEQAS) 4 tests / an


Indications de la détermination du statut de HER2

En 2007, idéalement :– au diagnostic initial de carcinome infiltrant (ASCP 2006) !!

Ou bien :– Patientes métastatiques– N+– N- avec critères de prescription de chimiothérapie adjuvante

et/ou d’hormonothérapie adjuvante


Regrouper les manipulations Validation

– vérification de la conformité des témoins externes, – détermination du niveau de l’intensité de la manipulation du

jour ++++

Interprétation des cas par le médecin ayant signé le diagnostic.

En pratique


Interprétations

Prendre en compte– Le marquage membranaire

– Le % de cellules carcinomateuses infiltrantes

– L’intensité du marquage

Pas de seuil validé sur la réponse au traitement


Le score

0 Absence de marquage ou < 30% des cellules

non

+ Marquage faible et incomplet de >30% de cellules

non

++ Marquage faible ou modéré et complet de >30% de cellules

Oui seulement si amplification prouvée par FISH

+++ Marquage fort et complet de > 30% des cellules

oui

Indication HerceptinScore Marquage


Surexpression hétérogène de HER2situation exceptionnelle

TESTER LA METASTASE

GANGLIONNAIRE ou VISCERALE


non

0

2+

oui

1+

non

marquage membranaire complet > 30% cellules

Algorithme test HER2 IHC

non

20x ou 40x

oui

3+

10x marquage membranaire complet


2+

Retester par FISH ou CISH

–

Algorithme général test HER2

Réf. : HERA, BCIRG, NSABP B31, FIN HER

Tumeur mammaire

IHC

3+

Traitementanti HER2

+

Traitementanti HER2

–

HER2/Cent 171,82,2compter plusde cellules en FISHou retester en IHC

Statut HER2 équivoque

FISH / CISH

+

Traitementanti HER2


Conclusion

HER2 surexprimé dans ~ 15-20% des cancers du sein

Thérapeutique anti HER2 spécifique

Analyse de HER2 par immunohistochimie APRES CALIBRAGE sur la FISH

• fiable

• rapide

• standardisable

• contrôle de qualité indispensable


IHCAspects

méthodologiques


Exemple du Protocole CurieSeptembre 2006

Echantillons tissulaires fixés en AFA , coupes à 3µm Démasquage antigénique par dénaturation thermique dans 400

ml tampon citrate 10 mM à pH 6,1, pendant 20’ Anticorps CB11 (Novocastra), dilué au 1/800

– Préparation de la dilution par un référent technique, 62.5 µl de l’AC primaire CB11 Novocastra (ref NCL-CB11), dans 50ml de diluant ZYMED (ref 00-32-18), aliquoté en tube de 5 ml stériles , stockés à 4 ° dans le réfrigérateur de la pièce d’immunomarquage,

– un aliquot est utilisé à chaque manipulation, à sortir sur GLACE pour préparation de la manipulation.

– Incubation 60 min

– Automate LABVISION

Révélation : complexe ABC Vectastain Elite de chez Vector Contrôle externe : bloc composé de 4 tissus (3+ amplifié à plus

de 10 copies, 2+ amplifié à 8 copies, 0 à 2 copies et un fragment de glandes normales)


Exemple du Protocole centre Jean PerrinClermont-Ferrand

Echantillons tissulaires fixés en AFA, coupes 3 µm

Démasquage antigénique dans tampon citrate pH 6.0 (réf: ChemMate S2031 Dako) pendant 40 min au Bain Marie à 97°C puis 20 min sur la paillasse à température ambiante

Anticorps Ventana clone 4B5 prédilué (réf: 800-2996) temps de pose de l’anticorps 28 min avec l’automate Nexes de Ventana

Révélation par le kit iView DAB Détection Ventana (réf: 760-091) avec l’automate Nexes


Exemple du Protocole centre René-Huguenin Saint Cloud

Echantillons tissulaires fixés en AFA, coupes 3 µm

Démasquage antigénique dans tampon citrate pH 6.0 pendant 40 min au Bain Marie à 95°C puis 20 min sur la paillasse à température ambiante

Anticorps polyclonal Dako (A0485) temps de pose de l’anticorps 30 min, automate Autostainer Dako

Révélation par le kit DAB Dako (réf: K5001)

Contrôle externe punch 3+, 2+, 0 contrôlés par Fish


Exemple du Protocole Institut Paoli Calmette

Echantillons tissulaires fixés en FA , coupes à 3 µm

Démasquage antigénique par Bain Marie(95-99°) tampon KIT Herceptest TM pH6 pendant 40’, refroidir 20’

Anticorps polyclonal de lapin prédilué KIT Herceptest TM (30’) prêt à l’emploi non aliquoté

Autostainer (DAKO)

Révélation :DAB/KIT Contrôle externe TMA avec 3+,2+,0 contrôlés en FISH


Généralités

Anticorps = Protéine de haut PM (Famille des glycoprotéines)

Conformation complexe de la protéine fragilité

Compromis de la fixation : morphologie et antigénicité

Fixation et démasquage: un couple à optimiser


Durée de fixation

Le délai avant fixation le plus court

Durée de fixation 24 à 48H


Fixation

Choix du fixateur

Délai de fixation

Taille de l’échantillon

Volume pièce / volume de fixateur


Fixateur

Solution de formaldéhyde à 4% dans sa forme tamponnée

Idéale pour FISH et IHC (pontant)

A.F.A (alcool formaldéhyde, acide acétique) (coagulant)

Bon compromis entre morphologie et antigénicité


Déshydratation-Imprégnation

L’eau contenue dans les tissus sera progressivement remplacée par la paraffine (Ethanol puis Toluène ou xylène..)

Infiltration des échantillons par la paraffine (ou mélange paraffine + polymères)

à 56-58°C (point de fusion de la paraffine !!! Attention à la paraffine trop chaude >60°C)afin préserver certaines propriétés chimiques et l’immunoréactivité


Séquence des solvants

Ethanol 4h Toluène 5h Paraffine 3h 58°C* Pour un cycle de nuit 12h Séquence automatisée vide / pression/T°

programme spécial pour le week-end en prolongeant l’étape la moins délétère : TOLUENE (12 heures ou plus)

ENROBAGE en paraffine :

température aussi à 58°C +++


Étalement-Séchage

Coupes de 3µ sur ►bain d’eau distillée à 37- 40°C, décontaminé le soir !!!!

ou

►Sur plaques chauffantes progressives +++

Lames spéciales (+système adhésif)

Drainer sur champ à température ambiante

Sécher 1h à 58° puis une nuit à 37°+++ dans l’étuve ventilée ( thermomètre de contrôle à l’intérieur)


Microtome dédié et piscine thermostatée et lumineuse


Déparaffinage ++++

Séquence automatisée:

Toluène 3 x (5minutes) 15 min

Ethanol 100%, 95%, 80% 6 min.

Eau déminéralisée 2 min.

RENOUVELLEMENT DES BAINS REGULIEREMENT • un bain par jour !!


Démasquage au micro-ondes

• 7000 euros…..!!!! Sinon rien ou bain marie


Les cuves du four micro-ondes


Démasquage au bain-marie

Puis 20 minutes précises dans le tampon sur la paillasse

40 minutes à 97°C (thermomètre !!)


Tampon citrate

à faire soi même ou tout prêt (chez DAKO par ex) Acide citrique 1mM (solution A)

Tris sodium citrate 1mM (solution B)

14 ml de A + 86ml de B + eau distillée qsp 1000ml = solution de travail

Le pH est ajusté à 6.10 +++par addition de HCl ou NaOH


Le pH mètre un investissement indispensable


Anticorps utilisés

Polyclonal : grande sensibilité A485

Monoclonal : grande spécificité CB11, SP3 (lapin), Ventana (clone 4B5)

Reconnaissant un des domaines externe ou interne de HER2


Pipetage

• Apprendre à pipeter juste avec des Pipettes contrôlées. Précision, fidélité et justesse!!

• Maintenance tous les ans (joints d’étanchéité)• Au labo : tous les 2 mois par pesées

– 1000µl = 1gr et 500µl= 0,5g, (trois mesures )

– Cônes stériles+++– Précision du pipetage : contrôle visuel lors du

pipetage


Dilution

La plus élevée possible - pas de marquage des glandes normales

Détecter uniquement la surexpression (glandes normales négatives)

Étalonnée par rapport à la FISH +++++

Les dilutions sont ajustées en fonction du lot d’anticorps. (annexes exemples FPL )


Prévention des contaminations

Utilisation de gants et de matériel à usage unique

Utilisation de diluant pour anticorps du commerce (surfactant et bactéricide)


« Aliquotage »

Limiter la fréquence des pipetages Les dilutions d’anticorps primaires sont réalisées à distance de la

manipulation par un technicien responsable. Chaque lot d’anticorps dilué fait le l’objet d’une vérification du titre Garder la feuille de l’ANTICORPS (n° du LOT à noter sur le flacon

ainsi que la date d’ouverture) Préparer les aliquots par ex CB11 NOVOCASTRA : un tube stock

aliquoté ajusté en fonction de la dilution que l’on utilise et de la consommation du laboratoire.

L’anticorps dilué se conserve moins bien (moins d’1 semaine) Les aliquots sont conservés congelés à -20°C 100µl minimum sinon

risque de dessication (>6MOIS)


Tous les réactifs (PBT, PBS…), sont préparés stérilement en dose unique

En dehors des produits prêts à l’emploi des automates type Benchmarck, Ventana…


Kits de révélation

AC-BIOTINE<>AVIDINE (exemple: ABC de VECTOR, Ventana)

Polymères (de dextran; exemple : Envision…)


Regroupement des demandes

Pour l’analyse en série (minimum de 10 cas à la fois)

Regroupement des techniques HER2 pour des structures avec recrutement plus faible

Optimisation du temps technique et préparation des réactifs

Introduction de lames témoins externes à chaque manipulation

DATER les lames d’une même manip(lot de lames techniquées)


Automatisation de la séquence

Autostainer

Benchmark

Bond max

etc...


Avantage de l’automatisation

Standardisation

Pas de consommable spécifique

Ouverture à tout les système détection

Intervention possible du technicien en cas de problème

Grande capacité


Lames témoins

Des coupes multi-tissulaires issues de blocs dont le statut du gène HER2 est connu (FISH)

Sinon accessibilité de la FISH (à rechercher auprès des centres de référence ++++)

Prendre au minimum des glandes normales et une maladie de PAGET ou un Carcinome in situ de haut grade HER2 +++)

Elles sont utilisées dans chaque série analysée Lames datées à chaque manipulation et conservées au

laboratoire, accessibles à tous Ne pas couper les lames trop longtemps avant la manipulation

(idéalement une semaine avant), à conserver à +4°C à l’abri de la poussière


Choix des zones d’intérêt


Forage des blocs donneurs


Confection du bloc multi-tissulairetémoins externes


Témoin négatifGlandes normales

Témoin positif de réactionMaladie de PAGET

Utilisation de témoins


Expression forte Score : 3+

Marquage complet et intense

Expression modéréeScore : 2+

Vérification du statut du gène/FISH

Critères d’interprétation des cas positifs

Faible niveau d’amplification 8 – 10 copies du gène

Fort niveau d’amplification > 15 copies du gène


Feuille de paillasse

Un exemple


Commentaires de manipulation et de validation


Dialogue médecins & techniciensTRAVAIL MAIN DANS LA MAIN

Feuilles de manip, commentaires de validation des témoins


remerciements

À l’équipe qui l’a réalisé

Anne Vincent Salomon Institut Curie ParisAndré Nicolas Institut Curie Paris

Jérôme Couturier Institut Curie ParisMatthieu Roche Centre Jean Perrin Clermont Ferrand

Et à ceux qui ont bien voulu le relire

Laurent Arnould Centre Georges François Leclerc DijonJean-Marc Guinebretière Centre René Hugenin St CloudJocelyne Jacquemier Centre Paoli Calmettes Marseille

Frédérique Penault Llorca Centre Jean Perrin Clermont FerrandMagali Lacroix Centre Claudius Regaud ToulouseGaetan Mac Grogan, Institut Bergonié Bordeaux


Le statut HER2 ne serait pas stable et pourrait être acquis au cours de l’évolution tumorale

Meng S PNAS 2004


Meng S, PNAS 2004

33 patientes stade I à IV

Comparaison de l’amplification HER2 dans les cellules tumorales circulantes et dans la tumeur primitive

Puis même étude sur 24 patientes HER2 -


Etude initiale sur 33 patientes

Le statut HER2 est concordant pour 29 patientes (11 +/+et 18 -/-).

Il est discordant pour 4 patientes présentant un statut HER2 tumoral positif (par FISH) et négatif sur les CTC ;

pour 3 de ces patientes, un traitement par chimiothérapie et/ou anti HER2 avait été instauré; faussant probablement les résultats, par la destruction des CTC HER2 positives.


24 HER2-

Ils ont alors évalué le statut HER2 sur CTC chez 24 patientes initialement HER2 « négatives » en rechute.

Parmi ces 24 patientes, 9 ont acquis un statut HER2 « positif » lors de la progression

Les 9 patientes ont alors reçu un traitement anti HER2: 2RP et une RC


Critiques de l’étude

Les niveaux d’amplification (rapport HER2/chromosome 17) sont deux à trois fois plus élevés dans la tumeur initiale par rapport aux CTC.

Ceci est assez troublant car l’amplification génique est un phénomène stable.

Il est difficile de comprendre pourquoi les cellules métastatiques comme les CTC présentent des taux d’amplification plus faibles que ceux de la tumeur initiale.

Par ailleurs, pour les CTC qui acquièrent une amplification (tumeur initiale négative), les taux sont également faibles (de l’ordre de 2.2 soit inférieur à la valeur limite reconnue pour une amplification).


Plusieurs hypothèses se discutent :

– soit le statut HER2 n’a pas été correctement évalué dans la tumeur initiale (problème technique, problème de fixation tissulaire)

– soit la CTC présente surtout une hyperploïdie du chromosome 17 entraînant essentiellement une sur représentation de HER2, ce qui expliquerait ces valeurs limites d’amplification ;

– soit la cellule métastatique acquiert vraiment une amplification de HER2, par sélection d’un clone HER2+ lors des nombreux traitements reçus par ces patientes pour certaines en phase terminale

Pourquoi les CTC présentent elles des niveaux d’amplification si bas ?


Si ces résultats sont confirmés,il faudra peut être re-tester les patientes négatives sur la tumeur initiale au niveau des métastases

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