Constitution d’un virus

Structures génétique des virus

Type de génome: ADN; ADNsb; ARN+, ARN-

Encapsidation: PSI:

Expression

Réplication

Structure :

Cis

Trans

Génes structuraux

Transgène

Virus défectif

Virus réplicatif Virus défectif

Pas de productionde nouvelles particules

Les vecteurs dérivés des rétrovirus

Famille des rétrovirus

Oncoretrovirinae (rétrovirus simple) 5 genresMoloney Murine Leukemia virusRous Sarcoma virus

Lentiviridae (rétrovirus complexe)Virus de l’Immunodéficience Humaine (V.I.H)

SpumaviridaeVirus Foamy

Les oncorétrovirus rétrovirus simple

Structure du génome viral

Recrutement dans la particule viraleInitiation de la transcription inverse

Protéines virales

Transcription inverse

IntégrationTranscription Intégration

Le cycle de réplication

Transcriptioninverse

Le cycle de réplication

Intégrase

Domaine catalytique

N-terminal C-terminal

L’intégration (2)

Le cycle de réplication

Etapes communes aux rétrovirus

Entrée

Transcription inverse/ intégration

Mobilisation d’une informationgénétique dans une particule

Définitions

Transgène

Séquences virales Les séquences cis sont les séquences associées au transgène

Les séquences trans sont les séquences utiles pour la production du vecteur, mais clonées dans un autre systèmed’expression

Elaboration d’un vecteur

Séquences cis : « initiation de la transcription »encapsidation dans la particule viraletranscription inverseintégration

Séquences indispensablesProduction de particules recombinantesTransfert de l’information génétique

Séquences cis : « initiation de la transcription »encapsidation dans la particule viraletranscription inverseintégration

Les vecteurs

Séquences cis

SA

Dans la cellule productrice

SA

ARN mobilisable dans une particule rétrovirale

Transcription

5’m7G AAAA

SA

Dans les cellules cibles

SASA

Transcription inverseIntégration

Provirus intégré dans la cellule cible

5’m7G AAAAA

Les systèmes de transcomplémentation

Les séquences trans: protéines structuralesenzymes (RT, IN, PR)

Structurer la particule viraleCycle de réplication

Production transitoire

Virus recombinants capables de transduire des cellules cibles

Transfection

AAAA AAAA

SA

Pseudotypage

Tropisme: spécificité de reconnaissance de la cellule cible déterminant: la glycoprotéine d’enveloppe

Pseudotypage: utilisation d’une glycoprotéine d’enveloppe différente de celle du virus parental

modification du tropisme du vecteur enveloppes plus résistantes aux techniques de purification

Exemple: rétrovirus pseudotypés par la glycoprotéine d’enveloppe du virusde la stomatite vésiculeuse (VSV-G)

Interphase Prophase Métaphase Télophase

Rétrovirus

Dépendance aucycle cellulaire

HIV FIV SIV ASV MoMLV

peu trés

Rétrovirus et cycle cellulaire

Les vecteurs lentivirauxFamille : RetroviridæGenre : LentivirusSous-espèces:

-HIV 1-HIV 2-SIV-FIV-BIV-VISNA-CAEV-EIAV

MoMLV V.I.H

Spécificité du cycle des lentivirus

ppT central

Sites d’intégration des lentivirus

Transactivation

Les vecteurs SIN

P

PARN mobilisé

P

Vecteur intégré dans les cellules transduites

Les rétrovirus

Spumavirus MammalianC-type

LentivirusD-type B-type Avian

C-typeBLV/HTLV

Premiers vecteurs

Un exemple d’application des vecteurs rétroviraux

Traitement du déficit immunitaire combiné sévère lié à l’X (X-SCID):déficit: chaîne du récepteur aux interleukines 2, 4, 7, 9 et 15déficit immuntaire majeurtraitement: greffe de moelle allogénique

Vecteur rétroviral:

SA

Chaîne C ILR