Système d'expression viral
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Constitution d’un virus
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Structures génétique des virus
Type de génome: ADN; ADNsb; ARN+, ARN-
Encapsidation: PSI:
Expression
Réplication
Structure :
Cis
Trans
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Génes structuraux
Transgène
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Virus défectif
Virus réplicatif Virus défectif
Pas de productionde nouvelles particules
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Les vecteurs dérivés des rétrovirus
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Famille des rétrovirus
Oncoretrovirinae (rétrovirus simple) 5 genresMoloney Murine Leukemia virusRous Sarcoma virus
Lentiviridae (rétrovirus complexe)Virus de l’Immunodéficience Humaine (V.I.H)
SpumaviridaeVirus Foamy
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Les oncorétrovirus rétrovirus simple
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Structure du génome viral
Recrutement dans la particule viraleInitiation de la transcription inverse
Protéines virales
Transcription inverse
IntégrationTranscription Intégration
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Le cycle de réplication
Transcriptioninverse
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Le cycle de réplication
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Intégrase
Domaine catalytique
N-terminal C-terminal
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L’intégration (2)
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Le cycle de réplication
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Etapes communes aux rétrovirus
Entrée
Transcription inverse/ intégration
Mobilisation d’une informationgénétique dans une particule
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Définitions
Transgène
Séquences virales Les séquences cis sont les séquences associées au transgène
Les séquences trans sont les séquences utiles pour la production du vecteur, mais clonées dans un autre systèmed’expression
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Elaboration d’un vecteur
Séquences cis : « initiation de la transcription »encapsidation dans la particule viraletranscription inverseintégration
Séquences indispensablesProduction de particules recombinantesTransfert de l’information génétique
Séquences cis : « initiation de la transcription »encapsidation dans la particule viraletranscription inverseintégration
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Les vecteurs
Séquences cis
SA
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Dans la cellule productrice
SA
ARN mobilisable dans une particule rétrovirale
Transcription
5’m7G AAAA
SA
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Dans les cellules cibles
SASA
Transcription inverseIntégration
Provirus intégré dans la cellule cible
5’m7G AAAAA
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Les systèmes de transcomplémentation
Les séquences trans: protéines structuralesenzymes (RT, IN, PR)
Structurer la particule viraleCycle de réplication
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Production transitoire
Virus recombinants capables de transduire des cellules cibles
Transfection
AAAA AAAA
SA
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Pseudotypage
Tropisme: spécificité de reconnaissance de la cellule cible déterminant: la glycoprotéine d’enveloppe
Pseudotypage: utilisation d’une glycoprotéine d’enveloppe différente de celle du virus parental
modification du tropisme du vecteur enveloppes plus résistantes aux techniques de purification
Exemple: rétrovirus pseudotypés par la glycoprotéine d’enveloppe du virusde la stomatite vésiculeuse (VSV-G)
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Interphase Prophase Métaphase Télophase
Rétrovirus
Dépendance aucycle cellulaire
HIV FIV SIV ASV MoMLV
peu trés
Rétrovirus et cycle cellulaire
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Les vecteurs lentivirauxFamille : RetroviridæGenre : LentivirusSous-espèces:
-HIV 1-HIV 2-SIV-FIV-BIV-VISNA-CAEV-EIAV
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MoMLV V.I.H
Spécificité du cycle des lentivirus
ppT central
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Sites d’intégration des lentivirus
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Transactivation
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Les vecteurs SIN
P
PARN mobilisé
P
Vecteur intégré dans les cellules transduites
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Les rétrovirus
Spumavirus MammalianC-type
LentivirusD-type B-type Avian
C-typeBLV/HTLV
Premiers vecteurs
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Un exemple d’application des vecteurs rétroviraux
Traitement du déficit immunitaire combiné sévère lié à l’X (X-SCID):déficit: chaîne du récepteur aux interleukines 2, 4, 7, 9 et 15déficit immuntaire majeurtraitement: greffe de moelle allogénique
Vecteur rétroviral:
SA
Chaîne C ILR