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Limousin1

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Limousin2

La moelle osseuse est un tissu en renouvellement permanent situé dans les os.

Production de 1012 cellules par jour(mille milliards!)

Répartition :Crâne et mâchoire 13 %Membres supérieurs 8 %Sternum et côtes 10 %Vertèbres 28 %Bassin 34 %Membres inférieurs 4 %

La greffe de CSH Moelle Osseuse

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Limousin3

Qu’est-ce que la moelle osseuse

Un organe responsable de la production des éléments du sang .

Les « cellules souches » donneront :– Globules rouges– Leucocytes– Plaquettes

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Limousin4

Schéma de l’hématopoïèseCellules souches

Lignée myéloïde

Lignée lymphoïde

Mégacaryocyte/plaquettes

Monocyte

Érythrocyte

Éosinophile

Granulocyte

Cellules maturesPrécurseursProgéniteurs

Lymphocytes B et T

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Limousin5

Définition

• Une cellule souche est la « cellule mère » non différenciée et pluripotente dont proviennent toutes les cellules sanguines

• Elle est capable d’une différenciation et d’un auto-renouvellement illimités

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Limousin6

La greffe de moelle osseuseDeux grands types de pathologies :

1. production de cellules anormales :

• Leucémie aigue ou chronique

• Myélome

• Lymphomes

2. dysfonctionnement :

• Aplasie

• Déficits congénitaux

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Limousin7

La greffe de moelle osseuse

Particularités de la greffe de cellules de moelle osseuse

Différent de la greffe d’organe :

• pas d’opération chirurgicale

• injection par voie veineuse comme une transfusion

Mais problèmes immunologiques :

• rejet

• GVH (réaction du greffon contre l’Hôte)

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Limousin8

La greffe de moelle osseuse

Importance de la compatibilité tissulaire

Typages HLA identiques du:

( Human Leucocyte Antigens)

• Donneur

•Receveur

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Limousin9

La greffe de moelle osseuse

Les donneurs potentiels :

•la fratrie : 25% des cas

•les donneurs volontaires de moelle osseuse

•la banque de sang de cordon

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LE SYSTEME HLA

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Limousin11

Human Leucocyte Antigen

• Découvert il y a 50 ans par Jean Dausset

• Complexe Majeur d ’histocompatibilité de l ’Homme

Polymorphe +++

• Réalisation du typage HLA par prise de sang

• « Carte d ’identité », exprimée à la surface de toutes nos cellules nucléées

Chaque sujet est unique

Le système HLA

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Limousin12

LA COMPATIBILITE

Une étude de compatibilité nécessite :

- La réalisation du TYPAGE HLA du patient et des donneurs

- La COMPARAISON des typages HLA du patient et des donneurs

- La RECHERCHE de l’identité tissulaire la plus proche, la plus parfaite.

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Limousin17

-Codominance: tous les gènes sont exprimés(2 Ag détectés par locus, hormis pour les homozygotes)

- Transmission en bloc sous forme d’haplotypes(peu de possibilité de crossing over)

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GENETIQUE DES POPULATIONS

Grande diversité du système HLA

Combinaisons préférentielles dans certaines populations

Information sur l’histoire génétique de chaque population

4 grands groupes de POPULATIONS :

CAUCASOÏDENEGROÏDEMONGOLOÏDEAUSTRALOÏDE

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Limousin19

Nomenclature des antigènes HLA

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Limousin20

FREQUENCES PHENOTYPIQUE ET GENOTYPIQUE(locus HLA-A)

CAUCASOIDES ORIENTAUX NEGROIDES

Allele frquencephnotypique

%

frquencegnique

%

frquencephnotypique

%

frquencegnique

%

frquencephnotypique

%

frquencegnique

%

A1A2A3

A11A23A24A25A26A28A29A30A31A32

Aw33Aw34Aw43Aw66

Ax

26.449.424.712.22.8

19.54.76.39.25.76.95.77.62.80.20.00.40.8

14.228.913.26.31.4

10.32.43.24.72.93.52.93.91.40.10.00.20.4

2.048.33.0

22.00.2

52.90.0

13.94.20.84.5

10.10.8

11.60.60.01.03.4

1.028.11.5

11.70.1

31.40.07.22.10.42.35.20.46.00.30.00.51.7

15.531.913.03.8

15.49.40.08.8

18.89.6

20.83.24.57.69.92.60.69.8

8.117.56.71.98.04.80.04.59.94.9

11.01.62.33.95.11.30.35.0

Nb 2163 976 311

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Limousin21

Méthodologie de l’étude du système HLA:

phénotypage: microlymphocytotoxicité (LCT)

génotypage:résolution générique (2 digits): basse résolutionrésolution allélique (4 voire 6 digits): haute résolution(résolution intermédiaire: moyenne résolution)

->2 manières d’exprimer les spécificités HLA,avec des correspondances entre elles

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Limousin22

Isolement des cellules mononucléées sur Ficoll

PRINCIPE et RESULTATS L'isolement sur Ficoll repose sur les densitésrespectives des cellules etdu Ficoll. Après centrifugation, les cellules mononucléées se rassemblent en un anneau opaque surnageant au dessus du Ficoll. Celui-ci est ensuite prélevé délicatement.

                                                                              

                              

                                        

                    

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Limousin26

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Limousin27

LA BIOLOGIE MOLECULAIRE

appliquée au typage HLA

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Limousin28

Cellule Chromosomes ADN

La Biologie Moléculaire traite de la biologie des acides nucléiques

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Limousin29

Double héliceStructure de l’ADN

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Liaisonsphospho-diesters

(l. irréversibles, catalysées par des enzDNA pol. ou nucléases)

Liaisons hydrogène(réversibles sous l’effet de la chaleur

ou d’agents chimiques: dénaturation-hybridation)

A-T

G-C

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Limousin31

Taq polymerase,+ dNTP

Couple d’amorcesspécifiques

Matrice d’ADN

Permet d’amplifier une zone spécifique sur un gène

Principe de la PCR

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Limousin33

Révélation par BET fluorescentqui s’insère dans la double hélice (intercalant)

Identification en fonction du PM

Migration de l’ADN chargé négativement en gel d’agarose

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Limousin35

Polymorphisme du système HLA : sérologie versus DNA

HLA class II HLA class I

antigènes

DP DQ DRB1/B3/B4/B5

B C A

6 9 19 46 10 21

allèles (DNA)

(>1700)111 59 463 617 179 338