Module transfusioncours IFSI

Dr SLIMANE MohamedIH/distri

EFS Dijon

Plan des cours

1 Collecte( à titre informatif)2 groupe ABO, technique 3 Les différents PSL,alternative à la transfusion4 Contrôle ultime,ED 5 Accident transfusionnel

1 Collecte et 2 groupe ABO, technique

A Le don du sangB Le groupage sanguin C Les différentes techniques de groupages( àtitre informatif)

A Le don du sang ( à titre informatif)

AnonymeVolontaireGratuitAvec entretien médicale avant donSuivi post don

L’entretien médicale( à titre informatif)

Une sécurité pour le donneur et le receveurSélection du donRéalisation systématique de bilan et sérologie à chaque donVérification d’absence de pathologie CI au don (ATCD, voyage, infection, médication …..)

Les différents dons de sang( à titre informatif)

« Matières Premières ou P.S.L. produits sanguins labils » :Au nombre de 3Le SANG TOTAL (ST)Les CONCENTRES de PLAQUETTES d’APHERESE (CPA)Le PLASMA d ’APHERESE

Du Donneur aux Patients( ( àà titre informatif)titre informatif)

Prélèvement+

QBDPT PREPARATION

Patients

Distribution PSL

L’EFS Bourgogne / Franche -Comté (EFS B/FC)

( à titre informatif)

9 sites de prélèvements9 sites de distribution1 Plateau Technique de Qualification Biologique du Don ( à Metz Tessy)1 Bioth èque (à Dijon)1 Plateau Technique de Préparation (àBesan çon)

L’ORGANISATION de l‘ EFS B/FC( ( àà titre informatif)titre informatif)

BesançonBelfort

AuxerreSens

DijonChalonMaconNevers

Plateau Technique QBD Metz Tessy

Plateau Technique Préparation Besançon

Tubes de qualificationPrélèvementsMatière premièreProduits finis

Plateau Technique de Préparation ( à titre informatif)

BESANÇONtraite les PSL prélev és sur les sites de prélèvement de la région Bourgogne Franche Comté soit plus de 150 000 prélèvements / anSupervise la logistique du transport des PSL

Le plateau de qualification( à titre informatif)

Metz-TessyGroupage sanguins ABODépistage des maladies transmissiblesSérologie virale + PaludismeSérothèque (Biothèque)

Distribution( à titre informatif)

Des PSL par des personnes qualifiés (techniciens ou infirmières)Vérification de la conformité de la prescriptionSélection des produits adaptésDélivrance selon le degré d’urgence

B Les groupes sanguins

Les groupes sanguins se répartissent en systèmes :ABO, Rh…

Chaque système est défini par:Un ensemble d’antigènes de la membrane du globule rouge génétiquement induits par une unité génétique.

Leur étude doit donc envisager les antigènes et les anticorps qui leur correspondent

Les antig ènes de groupes sanguins

Les antigènes de groupes sanguins sont portés par des glycolipides ou des glycoprotéines et sont exposés à l’extérieur de la membrane.

Les antig ènes de groupes sanguins

Leur classification se fait selon deux niveaux :

Premier niveauPremier niveau : les antigènes de groupes sanguins. plus de 650 actuellement(exemples : Ag A, B, D, Fya, M, Lea…)

DeuxiDeuxièème niveaume niveau : ces antigènes sont regroupés en 23 systèmes de groupes sanguins.

On appelle système de groupes sanguins l'ensemble des antigènes élaborés par les allèles d'une même unité génétique.

Les différents systèmes de groupes sanguins ( à titre informatif)

SYSTEME SYMBOLE

ABO ABO

MNSs MNS

P P1

Rh RH

Lutheran LU

Kell KEL

Lewis LE

Duffy FY

Kidd JK

Diego DI

Cartwright YT

Xg XG

Scianna SC

Dombrock DO

Colton CO

LW LW

Chido-Rodgers CH /RG

H H

ABO et associés

Rh et collègues

• Tissulaires • Pas propres à l'homme • Possèdent des

anticorps naturels • Problèmes en

transfusion et en transplantation

• Propres aux GR • Propres à l'homme • Ne possèdent pas

d’anticorps naturels • Problèmes en cours

de grossesse et lors des transfusions

ABO Hh et Sese Lewis Ii P Luthéran

MN

Rh Kell Duffy Kidd Ss

Deux familles de groupe sanguin (Très important)

Le plus important des groupes sanguinssystème majeur de l'immunologie transfusionnellerôle fondamental dans l'immunologie de greffe (peau ,

rein.)

Le système ABO( à titre informatif)

Découvert en 1900 par Karl Landsteiner

La structure biochimique: des sucres

A ���� Gal Nac transférase ���� N acétylgalactosamine ����AgAB ���� Gal transférase ���� Galactose ����Ag BO ���� enzyme inactive ���� substrat non converti ����Ag H

4 groupes sanguins définis :

Par les antigènes des globules rouges

Par convention , les groupes ABO sont définis par les antigènes présents sur les GR.A lorsque seul l'antigène A est présentB lorsque seul l'antigène B est présentAB si les antigènes A et B sont présentsO si ni l'Ag A ni l'Ag B ne sont présents

Le système ABO

A1

Ax Am

A3A2

Phénotypes Nombre de sites A

A1A2A3Ax

AendAmAyAel

800 000 à 1 000 000200 000 à 300 00030 0004 000

01. à 1 900< 200< 200

Les antig ènes ABH ( à titre informatif)

Enzyme H Enzyme BEnzyme A

Substance de base

Ag H Ag B Ag A

Gène H

Gène A

Gène B

ABO et associés

Les ph énotypes ABOPhénotypes ABO et leur fréquence

dans la population française

Groupessanguins

antigènesglobulaires

anticorpssériques

Fréquenceen France

AB

ABO

ABAB

Aucun

Anti-BAnti-AAucun

anti-A anti-B

45%9%3%43%

Génétique du système ABO( à titre informatif)

Couples Enfants possibles

O x OO x AO x BO x ABA x AA x BA x ABB x BB x ABAB x AB

OO, AO, BA, BO, AO, A, B, ABA, B, ABO, BB, A, ABA, B, AB

Génétique du système ABO( ( àà titre informatif)titre informatif)

Génétique du système ABO( ( àà titre informatif)titre informatif)

Génétique du système ABO( ( àà titre informatif)titre informatif)

Génétique du système ABO( ( àà titre informatif)titre informatif)

Génétique du système ABO( ( àà titre informatif)titre informatif)

Les anticorps de groupes sanguins

Ce sont des immunoglobulines :soit de nature IgM,soit de nature IgG.

Ils sont synthétisés en réponse àl'introduction d'antigènes dont l'organisme est dépourvu, selon les règles de la réponse immunitaire humorale

La réponse immunitaire humorale

IgG

IgM IgG

Taux d’Ig

temps

Période de latence Réintroductionde 7 à 21 jours de l’antigène

Introductionde l’antigène

Réponse Primaire Réponse Secondaire

Les anticorps de groupes sanguins

(Très important)

La classification des anticorps en transfusion se fait selon deux critères :

• naturel ou immun• régulier ou irrégulier.

Ils sont dits naturels lorsqu'ils apparaissent de façon apparemment spontanée

Ils sont dits immuns lorsqu'ils apparaissent après grossesse ou transfusion préalable

Constants –Thermolabiles - IgMSpontanément agglutinants

Les anticorps naturels ABO

réguliers :Correspondent à une réponse primaire constante .Sont toujours présentsApparaissent entre 2 et 6 moisaugmentent jusqu'à 10 ans, puis diminuent.

irréguliers :inconstants dangereux si actifs à 37°C .

Les anticorps de groupes sanguins

Les anticorps naturels sont réguliers, et parfois

irréguliers

• Ce sont habituellement des IgM..• Ils doivent toujours être pris en compte sous peine

de provoquer un accident transfusionnel gravissime.

Les anticorps immuns sont irréguliers,

• l'anti-RH1 (D) du système Rh. • Ce sont habituellement des Ig G.

Les anticorps de groupes sanguins

Anti-AAnticorps naturel régulier

IgM

Anti-DAnticorps immun irrégulier

IgG

Les problèmes transfusionnels

(Très important)Il faut éviter la rencontre d’un antigène avec son anticorps.

En transfusion, 2 situations peuvent se rencontrer :

• introduction d’antigènes (GR) chez un patient possédant l’anticorps correspondant

• introduction d’anticorps (plasma) chez un patient possédant l’antigène correspondant

Les problèmes transfusionnels(Très important)

Transfusion de globules rouges

A ���� A

O O AB AB

B ���� B

Les problèmes transfusionnels(Très important)

Transfusion de plasma

A ���� A

AB AB O O

B ���� B

Les circonstances de l’immunisation (Très important)

La cause des immunisations est double : • grossesse ou transfusion.

Les conséquences sont aussi doubles : • maladie hémolytique du nouveau-né et• accident transfusionnel.

Les anticorps naturels sont une exception àcette règle, et une exception apparente aux lois de l'immunologie.

Rh et collègues(Très important)

Propres aux globules rougesPropres à l’hommePas d’anticorps naturelsBien développés à la naissance Acs = immuns = IgGResponsables :

D’accidents transfusionnelsDe MHNN

Le plus immunogène des systèmes de groupes sanguins : transfusions, grossesses.

Le système Rh (RH)( à titre informatif)

Histoire du système Rh•Découverte de Levine en 1939 : allo anticorps

•Landsteiner et Wiener en 194O : hétéroanticorps

Le nouvel antigène découvert est appeléD ou Rhésus.

Actuellement le système Rhésus s'appelle Rh uniquement.

Le système Rh (RH)(Très important)

Les antigènes Rh (RH)

Les sujets qui :ont l'Ag D sont dits D+ ou Rh+ ou RH:1n’ont pas l'Ag D sont dits D- ou Rh– ou

RH:-1

L'Ag D (RH1)- en Europe : présent chez 85%

absent chez 15 %

- au Japon : présent chez 99,9%absent chez 0,1 %

Le système Rh (RH)( à titre informatif)

Les antigènes Rh (RH)

Puis découverte de 4 autres Ags : C, c, E, e.C et E souvent associés à Dc et e souvent associés à d

L'Ag C présent chez 70 %E 30 %c 80 %e 98 %

Les antigènes C et c, E et e sont antithétiques

Le système Rh (RH)( à titre informatif)

Le Phénotype Rh

Les Ags D, C, E, c et e définissent le phénotype Rh d'un individu.

5 antigènes définissent 18 phénotypesdifférents :

fréquents : 34,5% D+ C+ E- c+ e+

rares : < 0,001% D- C+ E+ c- e-

Ecriture du ph énotype ( à titre informatif)

D-C- E- c+ e+ RH:-1,-2,-3,4,5 dce/dce rr

D- C+ E- c+ e+ RH:-1,2-,3,4,5 dCe/dce r'r

D- C- E+ c+ e+ RH:-1,-2,3,4,5 dcE/dce r"r

D- C+E- c- e+ RH:-1,2,-3,-4,5 dCe/dCe r’r’

D- C- E+ c+ e- RH:-1,-2,3,4,-5 dcE/dcE r"r"

D+ C+ E- c- e+ RH:1,2,-3,-4,5 DCe/DCe R1 R1

D+ C- E+ c+ e- RH:1,-2,3-,4,5 DcE/DcE R 2R2

D+ C+ E- c+ e+ RH:1,2,-3,4,5 DCe/dce R 1 r

D+ C- E+ c+ e+ RH:1,-2,3,4,5 DcE/dce R 2r

D+ C+ E+ c- e- RH:1,2,3,-4,-5 DCE /DCE RZRZ

Le système Rh (RH)( à titre informatif)

Phénotypes Nombre de sites RH1

Dccee DCcee DccEe DCCee DCcEe DccEE

D+C-E-c+e+D+C+E-c+e+D+C-E+c+e+ D+C+E-c-e+D+C+E+c+e+D+C-E+c+e-

RH:1,-2,-3,4,5RH:1,2,-3,4,5RH:1,-2,3,3,5RH:1,2,-3,-4,5RH:1,2,3,4,5RH:1,-2,3,4,-5

10 000 à 14 00012 000 à 20 00014 000 à 16 00014 000 à 19 00023 000 à 31 00015 000 à 30 000

La densité antigénique est fonction du phénotype

Le système Rh (RH)

Comment reconnaître un antigène :D faible ?D Partiel ?

Le système Rh (RH)

Antigène D faible

Tous les épitopes sont présents

Déficit quantitatif en sites antigéniques (<10000)

L’agglutination des hématies « D faibles » est variable (- à3+) en fonction des anticorps anti-D et des techniques utilisés

Les sujets porteurs d’un antigène RH1 faible ne s’immunisent pas contre l’antigène RH1

Le système Rh (RH)

Les sujets possédant un Antigène D partiel peuvent s'immuniser par transfusions ou grossesses contre le morceau qui leur manque.

1 2 3

4 5 6

7 8 9

1 2 3

4 5 6

7 8 9

1 2 3

4 5 6

7 8 9

Antigène D Partiel

Ag D normal Ag D faible Ag D Partiel

Le système Rh (RH)

Les anticorps anti – Rh

Résultent tous d'une allo immunisation: anticorps immuns

par transfusionpar grossesse

Il existe des auto anticorps : auto anti-e

Le système Rh (RH)

Les anticorps anti – Rh

Les Acs anti-Rh sont des IgG qui traversent le placenta

Ils sont responsables:d'accident hémolytique post transfusionnelde MHNN sévères

Le système Rh (RH) (Très important)

Immunogénicité des Ags Rh :RH1 D +++ RH4 c +++ RH3 E + RH5 e + RH2 C +

Les spécificités :anti-D le plus fréquent:anti-c et anti-E moins fréquentsanti-e et anti-C rares isolés, fréquents en

association

Le système Kell (KEL) (Très important)

Pouvoir immunogène de l'antigène K(KEL1)

Fréquence ++ des allo immunisations par transfusions ou par grossesse.

Les antigènes du système Kell2 Ags principaux antithétiques

K (K1 ou Kell)k (K2 ou cellano)

Le système Kell (KEL)( à titre informatif)

Nombre de sites KEL1 (K) par GR:

2 à 5 000 sites pour les hétérozygotes KEL:1,2 ( Kk)

4 à 7 000 sites pour les homozygotes KEL:1,-2 ( KK)

Le système Kell (KEL)( à titre informatif)

GénotypePhénotype

Fréquenceen FranceAllèle 1 Allèle 2

k (KEL2) k (KEL2) K- k+ KEL:-1,2 91 %

K (KEL1) k (KEL2) K+ k+ KEL:1,2 8,8 %

K (KEL1) K (KEL1) K+ k- KEL:1,-2 0,2 %

Génétique du système Kell (KEL)

• 2 allèles principaux : K (KEL1) et k (KEL2)

Le système Kell (KEL)( à titre informatif)

Les anticorps du système Kell (KEL)

� anticorps immuns,� le plus souvent de nature IgG,� fixent le complément, � dépistés par le test indirect à

l’antiglobuline.

Immunog énicité des antig ènes (Très important)

L'immunogénicité d'un antigène est la probabilité avec laquelle il induit la synthèse de l'anticorps correspondant lorsqu'il est introduit dans un organisme qui en est dépourvu.

Certains antigènes sont fortement immunogènes, d'autres moins.

D > [c-K] > [C-E-e] > aux autresMais ce n'est pas parce qu'un antigène est faiblement immunogène qu'il n'est pas dangereux

C Examens biologiques

Généralité ( à titre informatif)Groupage sanguins TDA RAI (Très important)

L’agglutination

L’agglutination est un ph énom ène qui

conduit à la réunion en amas de cellules

telles que des globules rouges, des

bactéries et des virus.

Agglutination immunologique

+

Agglutination immunologique

En fonction des conditions

Hématies

Agglutinées

Hématies

« sensibilisées »

(mais non agglutinées)

Les différentes techniquesLes différentes techniques de groupage ABO

( à titre informatif)

Acs

Ags

groupe

La détermination d’un groupe sanguin ABO comporte obligatoirement :� La détermination des Ags globulaires

= épreuve globulaire ou de Beth Vincent

� la détermination des Acs sériques= épreuve sérique ou de Simonin.

Le goupage ABO

Le groupage ABO

Prélèvement sur anticoagulant centrifugé

Le plasma contient les anticorps

Les hématies portent les antigènes

Les techniques de groupage

MicroplaquePlaque jetableTubeMicrofiltation

Les r éactifs de groupage

Les hématies - tests : A1 et B pour l’épreuve plasmatiqueA2 en cas de difficultés à l’épreuve plasmatiqueO des panels de dépistage et d’identification

Les sérums tests :monoclonauxvégétauxhumains polyclonaux

Groupage ABO en microplaque

Sérums tests + hématies à grouper

Hématies tests + plasma à grouper

Groupage ABO en microplaque

A

AB

B

O

A B AB A1 B

Groupage ABO surmicroplaque précoatée

Hématies àgrouper

Plasma à grouper + hématies tests A1 et B

A B AB A1 B

Groupage ABO sur plaque(Très important)

anti-A anti-B anti-AB GR A1 GRB

Hématies à grouper Plasma à grouper

+++ +++ +++ - -

Groupage ABO sur plaqueTrès important)

anti-A anti-B anti-AB GR A1 GR B

Hématies à grouper Plasma à grouper

+++ - +++ - ++

Groupage ABO en tube

antti-A anti-B anti-AB GR A1 GR B

Hématies à grouper Plasma à grouper

Groupage ABO en tube

Après centrifugation

anti-A anti-B anti-AB GR A1 GR B

αααα-A αααα-B αααα-AB A1 B

+++ - +++ - +++

Groupage ABO en tube

Intensités d’agglutination

++++ +++ ++ + -

Groupage en microfiltration

Groupage ABO par microfiltration

Hématies à grouper

Plasma à grouper + hématies tests

A1 B

3+ - 3+ - - -

A1 B

- 3+

Sensibilité des différentes techniques

ÉpreuvesTechniques

globulaire plasmatique

Plaque jetable + +

Tube +++ ++++

Microplaque ++ ++

Microfiltration ++++ +

Les tests à l’antiglobuline ou tests de Coombs direct TDA ( à retenir)

Le test direct à l’AGH (TDA) = test globulaire

met en évidence les Acs fixés sur les GR “in vivo”

• sensibilisation des GR du nné dans les MHNN

MHNN ABO et MHNN de type RH• sensibilisation des GR par des auto acs dans les

AHA

• sensibilisation des GR par des acs anti médicament dans les AHIA

• sensibilisation des GR du donneur par les Acs du receveur dans les accidents transfusionnels

Passage trans placentaire des anticorps maternels

IgM anti-A

IgG anti-A

Enfant A Mère O

Répartition des antigènes A et B à la surface des GR selon l’âge

naissance

3 - 6 mois 2 ans

GR fœtaux A

IgG anti-A maternelles

Incompatibilité ABO : naissance

Incompatibilité ABO : 2-3 mois

Diagnostic d ’une MHNN

TDA

Elution

+ =�

GR sensibilisés lavés

Éluat + AcsGR détruits

Identification de l’anticorps élué

Principe de l’élution

Les tests à l’antiglobuline outests de Coombs

Le test indirect à l’AGH (TIA) = test sérique

met en évidence la présence d’anticorps dans un sérum en mettant celui ci en contact “in vitro”avec des GR

• RAI

• épreuves directes de compatibilités

• la détermination de certains antigènes

LA RECHERCHE D’ANTICORPS

ANTI-ERYTHROCYTAIRES RAI

(à retenir)

LA RECHERCHE D’ANTICORPS

ANTI-ERYTHROCYTAIRES

Analyse essentielle pour assurer la sécurité

immuno hématologique des transfusions et

des grossesses

Doit être réalisée conformément à la législation

• Dans le cadre de la prévention des accidents

hémolytiques transfusionnels

• En contexte de greffe ou de transplantation

• En contexte pré ou périnatal

LA RECHERCHE D’ANTICORPS

ANTI-ERYTHROCYTAIRESDoit être réalisée

• avec des hématies –tests d’origine humaine

• sur du sérum ou du plasma

Comporte 2 étapes

• Une étape de dépistage

• Une étape d’identification en cas de dépistage positif

Permet d‘identifier des anticorps dirigés contre les antigènes érythrocytaires autres que A et B

La RAI : permet la mise en évidence

d’Acs naturels irréguliers :

préexistants à toute transfusion

dangereux si actifs à 37°C

anti- Lea, Leb, M, N, P1, Lua...

d’Acs naturels réguliers :

anti- H des sujets Bombay

anti - P, P1, Pk des sujets pp

La RAI : permet la mise en évidence

d’Acs d'allo - immunisation

anti - D, C, E, c, e, Kell

anti- Fya, Fyb, Jka, Jkb, S, s

anti- Lan, Vel

qui apparaissent après transfusions ou grossesses

Une RAI négative ne signifie pas "absence d'allo immunisation"

Les anticorps apparaissent et disparaissent : leur

concentration varie avec le temps selon le rythme des stimulations

Il faut toujours tenir compte d'un allo-Ac, même si on ne retrouve plus l’Ac

« UN ANTICORPS UN JOUR UN ANTICORPS

TOUJOURS »

Une RAI négative ne signifie pas "absence d'allo immunisation"

Importance +++ de la RAI

entre le 5ème et 15ème

jour après la transfusion

Taux d’Hb Titre d’Ac

Transfusion 5 10 jours

L'épreuve directe de compatibilitéau laboratoire : EDC

ANSM : indications : SI RAI +

Obligatoire chez tout

patient ayant une RAI +du

jour ou dans ses

antécédants

Obligatoire chez le Nné en

présence d’Acs d’origine

maternel

-Faite au laboratoire :

Test in vitro =

sérum patient +

échantillon de la

poche à transfuser

L'épreuve directe de compatibilitéau laboratoire : EDC

- Durée de validité : 3 jours

- les poches de sang compatibilisées pour un patient sont étiquetées :

Nom, prénom, date de naissance du patient

date de l'examen

date et heure de fin de validité.