Exemple de démarche d’une recherche expérimentale

Jean MantzService d’Anesthésie Réanimation SMUR, INSERM U676

Hôpital Beaujon

Impact Factors

2001: Pain: 4,54

Anesthesiology: 3,38

Anaesthesia: 2,37

Anesth Analg: 2,27

Br J Anaesth: 2, 20

Pathophysiology of neuronal death: excitotoxicity

Cell death:

Ca/calmodulin kinase

PKC

NO synthase

PLA2

Calpains

Free radicals

Lipid peroxydation

DNA damage

Proteolysis

VOCC

NMDA-R

AMPA-R

GLUm-R

Na+

Ca++

Ca++

Ca++stores

PLC

cAMP

cGMP

Hypothèse de départ

• Le glutamate joue un rôle fondamental dans la mort neuronale ischémique

• Les anesthésiques volatils ont un effet neuroprotecteur in vitro et in vivo.

• Cet effet pourrait être transitoire et ne concerner que la mort neuronale par nécrose (non apoptotique).

Question

• Les anesthésiques préviennent-ils ou retardent-ils simplement la mort neuronale ischémique ?

But de l’étude

• Etudier les effets des anesthésiques (isoflurane) sur la mort neuronale retardée après lésion ischémique neuronale.

• Tester l’hypothèse d’une action sur la transmission glutamatergique (réduction)

Choix du modèle expérimental

• Destiné à répondre à la question posée (et non l’inverse!...)

• In vivo vs in vitro • La culture de tranche organotypique d’hippocampe.

– Modèle in vitro– Préserve les connexions physiologiques interneuronales– Contient du glutamate– Permet de tester des effets à long terme (plusieurs jours ou

semaines)

Méthodes

Durée de l’ischémie: 45 min

Effets d’un Placebo (saline) vs MK 801 (10 µM) vs Isoflurane (1%, 30 min) sur la mort neuronale induite par l’ischémie ou une charge de glutamate

Pickard L et al. Neuropharmacology 2001; 41: 700-13

Sullivan BL et al.Anesthesiology 2002; 96: 189-95

Conclusion

Quelques commentaires

• Les objectifs sont atteints• Le choix du modèle• La rigueur méthodologique• La netteté des effets• Les concentrations faibles

d’isoflurane• La concision de la discussion

Absence de dose-réponse

Absence de calcul de puissance

Absence d’exploration de la mort apoptotique

Limites du modèle:

- pertinence clinique

- durée d’observation

Points forts Points faibles

Severe incomplete cerebral ischemia (10 min)

Lecture critique d’un article scientifique: les points essentiels

• La question est-elle clairement posée?• La méthode est-elle adaptée aux objectifs ?• La population étudiée est-elle clairement identifiée ?• La population témoin est-elle clairement identifiée ?• La taille des échantillons est-elle adaptée ?• Les variables analysées sont-elles clairement identifiées ?• Le choix des variables est-il adapté aux objectifs ?• La durée de suivi est-elle suffisante ?• Les méthodes statistiques sont-elles appropriées ?• Les résultats sont-ils présentés de façon claire, détaillée et objective ?• Les conclusions sont-elles valides ?• L’impact de l’article est-il réel ?