Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et
HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza
humains et animaux.
GRAND ORAL E2M2 – 29-30 JUIN 2009UCBL
VIRPATHCNRS FRE 3011
DR MANUEL ROSA-CALATRAVAPR BRUNO LINA
JEAN-CHRISTOPHE LE BAYON
ED 341 – E2M2
2
LES PARAINFLUENZA hPIV2 ET NDV
Famille : Paramyxoviridae Genre : Rubulavirus
Avulavirus
Terr
ier e
t al.
(200
8)
•Maladies respiratoires•Pas de vaccins/antiviraux•Virus enveloppé Ø 200nm •ARN négatif, simple brin
L’entrée dans la cellule est possible grâce aux GP F et HN
LA FUSION MEMBRANAIRE
F HN
Viral envelope
Cellular membrane
F1
HN
S
S
F2
C N
NC
Fusion peptide
Cytoplasmic tail
Extracellular domain
Transmembrane region
HR1
HR2
F
Taki
mot
o et
al.
(200
2)
3
4
OBJECTIFS
•Caractérisation de mutants de F de hPIV2•Mutation observée sur des souches variantes de hPIV-2 (T96A) ou transposées d’un variant de PIV-5•Rôle de ces mutations dans la fusion et dans l’interaction entre F et HN ?
Méthodes• Analyse bioinformatique de F hPIV2• Clonage des gènes F et HN et mutagénèse• Expression transitoire (cellules A549)• Cytométrie en flux et test de fusion intercellulaire
5
T96A: favorise l’activation par HN
I24P: F “indépendante” de HN
K133E: interaction entre F et HN et augmentation de la fusion
I294A: favorise l’activation par HN
TRAVAIL ABORDÉ EN MASTERT
ête
Tig
e
I24PI294A
T96A
K133E
2 parties distinctes de la tête de F semblent être impliquées dans l’interaction F-HN
PROJET DOCTORAL
6
mécanisme d’entrée
→ Design d’antiviraux
Caractérisation fonctionnelle des
GP mutantes
Études des interactions
F-HN
Observations structurelles
sur les GP
Encadrants :Pr Bruno Lina (accueil)Dr Manuel Rosa-Calatrava (tuteur)Gaëlle Cartet (technicienne)
7
CARACTÉRISATION DE LA FUSIONMéthodes• Expression de glycoprotéines mutantes (WB, FACS)• Capacité fusogène des GP (Test de fusion
intercellulaire luciférase)• Comportement des mutants dans un contexte
pseudo-viral ou viral (VLP et génétique inverse, coopération avec Dr Dimitri Lavillette – INSERM U758-ENSL)• Meilleure mesure de la fusion membranaire (RT lipid-
mix assay)
Objectif• Détermination des résidus impliqués dans le rôle
fusogène de F
8
ÉTUDE DES INTERACTIONS F/HN
Méthodes• Délétions des GP• Interactions entre F et HN (Cross-Linking, CoIP, avec
Dr JC Cortay)
Objectif• Détermination les régions, sur F et sur HN,
impliquées dans l’interaction F et HN• Régions permettant l’activation de F• Région permettant l’inhibition de F
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OBSERVATIONS STRUCTURELLESMéthodes• Observation des VLP et virus (MET, cryoMET,
coopération avec Dr Daniel Thomas – Université Rennes I)• Observation in silico des mutations sur la structure
(coopération avec Pr Gary Taylor et/ou Dr Ruppert Russel – Université de St Andrews, UK)
Objectif• Détermination les régions, sur F et sur HN,
impliquées dans l’interaction F et HN• Régions permettant l’activation de F• Région permettant l’inhibition de F
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MON PROFIL ET MON AVENIR
Atouts• Compétences scientifiques adaptées• Bonne connaissance du sujet• Envie de communiquer sur mes résultats• Envie de transmettre mon expérience
Pendant la thèse• Exercer une activité de monitorat• Doctorant conseil• Me constituer un réseau professionnel
Après la thèse• Post-doctorat ??• Activité de consulting ??
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