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Les Entrobactries (3me

partie) :

Les Entrobactries lactose + : lexemple des

coliformes

Objectifs : * Mettre en vidence les caractres morphologiques, culturaux et biochimiquespour orienter ltude vers la famille des entrobactries.

* Raliser lensemencement dune macrogalerie en vue de la dtermination de

lespce du coliforme.

* A laide du tableau dichotomique, identifier lespce du coliforme donn.

* Raliser, interprter et conclure un test de Mackensie.

1er

jour

Manipulation : Par personne, vous disposez dune souche pure dun coliforme prsent sur GNi :

Souche numrote

prsente sur glose nutritive

Raliser une suspension bactrienne faible ( 1

colonie dans 5 mL deau distille strile)

Etude microscopique :

Raliser une coloration de

Gram

Ralisation du test

dorientation rapide

pour 1 entrobactrie :

Raliser le test de loxydase

Ensemencements

des milieux de la

galerie de famille :

VF

Hugh et Leifsonglucoss

Bouillon nitrat

Glose NutritiveOrdinaire

Ensemencements des

milieux de la galerie de

genre et despce :

Kligler-Hajna

Clarks et Lubs

Ure Indole

Mannitol-Mobilit

Citrate de Simmons

Isolements des bacilles Gram +

sur :

Milieu prfrentiel :

EMB

Milieu non slectif :

BCP

Incuber botes et tubes 24 h 37C

Dj

TEST DE

MACKENSIE

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Compte-rendu :

Coloration de Gram Test respiratoire :

Observations Conclusion Observations Conclusion

Orientation

Souche n

2me

jour

Manipulation :

Lecture des diffrents milieux ensemencs : botes et tubes.

Raliser le tests complmentaires ncessaires la mise en vidence de :

la nitrate rductase

la galactosidase

la voie fermentaire du glucose

la tryptophane dsaminase et de la tryptophanase

Compte-rendu :

1. Ensemencements

Milieux Observations Interprtations Conclusion

VF

Bouillon nitrat

Hugh et Leifson glucos

Kligler

Clark et Lubs

Citrate de Simmons

Mannitol- Mobilit

Ure-Indole

Milieu LDC

Milieu ODC

2. Isolements

Observations : aspect des colonies Conclusion

Glose Nutritive Ordinaire

Glose EMB

Glose BCP

3. Conclusion 3.1. Proposer une identification du coliforme numrot et justifier votre dmarche logique

danalyse : Justification de lappartenance la famille des Entrobactries. Justification de lappartenance au genre et lespce bactrienne.

3.2. Interprter le test de Mackensie et conclure sur le coliforme initial.