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Retour sommaire Les Entérobactéries (3 ème partie) : Les Entérobactéries lactose + : l’exemple des coliformes Objectifs : * Mettre en évidence les caractères morphologiques, culturaux et biochimiques pour orienter l’étude vers la famille des entérobactéries. * Réaliser l’ensemencement d’une macrogalerie en vue de la détermination de l’espèce du coliforme. * A l’aide du tableau dichotomique, identifier l’espèce du coliforme donné. * Réaliser, interpréter et conclure un test de Mackensie. 1 er jour Manipulation : Par personne, vous disposez d’une souche pure d’un coliforme présenté sur GNi : Souche numérotée présentée sur gélose nutritive Réaliser une suspension bactérienne faible ( 1 colonie dans 5 mL d’eau distillée stérile) Etude m icroscopique : Réaliser une coloration de Gram Réalis ation d u t est d’orien ta tio n r apide pou r 1 e ntérobac tér ie : Réaliser le test de l’oxydase En semencements des m ilieux d e l a ga le rie d e f ami lle : VF Hugh et Leifson glucosés Bouillon nitraté Gélose Nutritive Ordinaire En se me ncem en ts d e s milieux d e l a g alerie d e genre e t d ’espèce : Kligler-Hajna Clarks et Lubs Urée Indole Mannitol-Mobilité Citrate de Simmons Isolements des bacilles Gram + sur : Milieu préférentiel : EMB Milieu non sélectif : BCP Incuber boîtes et tubes 24 h à 37°C Déjà TEST DE MACKENSIE
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Les Entrobactries (3me
partie) :
Les Entrobactries lactose + : lexemple des
coliformes
Objectifs : * Mettre en vidence les caractres morphologiques, culturaux et biochimiquespour orienter ltude vers la famille des entrobactries.
* Raliser lensemencement dune macrogalerie en vue de la dtermination de
lespce du coliforme.
* A laide du tableau dichotomique, identifier lespce du coliforme donn.
* Raliser, interprter et conclure un test de Mackensie.
1er
jour
Manipulation : Par personne, vous disposez dune souche pure dun coliforme prsent sur GNi :
Souche numrote
prsente sur glose nutritive
Raliser une suspension bactrienne faible ( 1
colonie dans 5 mL deau distille strile)
Etude microscopique :
Raliser une coloration de
Gram
Ralisation du test
dorientation rapide
pour 1 entrobactrie :
Raliser le test de loxydase
Ensemencements
des milieux de la
galerie de famille :
VF
Hugh et Leifsonglucoss
Bouillon nitrat
Glose NutritiveOrdinaire
Ensemencements des
milieux de la galerie de
genre et despce :
Kligler-Hajna
Clarks et Lubs
Ure Indole
Mannitol-Mobilit
Citrate de Simmons
Isolements des bacilles Gram +
sur :
Milieu prfrentiel :
EMB
Milieu non slectif :
BCP
Incuber botes et tubes 24 h 37C
Dj
TEST DE
MACKENSIE
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Compte-rendu :
Coloration de Gram Test respiratoire :
Observations Conclusion Observations Conclusion
Orientation
Souche n
2me
jour
Manipulation :
Lecture des diffrents milieux ensemencs : botes et tubes.
Raliser le tests complmentaires ncessaires la mise en vidence de :
la nitrate rductase
la galactosidase
la voie fermentaire du glucose
la tryptophane dsaminase et de la tryptophanase
Compte-rendu :
1. Ensemencements
Milieux Observations Interprtations Conclusion
VF
Bouillon nitrat
Hugh et Leifson glucos
Kligler
Clark et Lubs
Citrate de Simmons
Mannitol- Mobilit
Ure-Indole
Milieu LDC
Milieu ODC
2. Isolements
Observations : aspect des colonies Conclusion
Glose Nutritive Ordinaire
Glose EMB
Glose BCP
3. Conclusion 3.1. Proposer une identification du coliforme numrot et justifier votre dmarche logique
danalyse : Justification de lappartenance la famille des Entrobactries. Justification de lappartenance au genre et lespce bactrienne.
3.2. Interprter le test de Mackensie et conclure sur le coliforme initial.
