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L’INNOVATION TECHNOLOGIQUE EN MILIEU HOSPITALIER
Assistance Médicale à la Procréation
Pr Christophe ROUX
Centre d’AMP – CHRU Besançon
Service de Biologique et Médecine de la Reproduction, Cryobiologie
• CIC de Biothérapies 1431
• INSERM - UMR 1098 (Interaction Hôte Greffon et Ingénierie Cellulaire et Génique)
6ème JOURNÉE DE L’INNOVATION - CHRU JEAN MINJOZ à BESANÇON – 13 AVRIL 2017
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- Le Centre d’Assistance Médicale à la Procréation du CHRU
- L’innovation : Réutilisation du tissu ovarien cryoconservé
Qualification non délétère des ovocytes
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation Loi n° 2011- 814 du 7 juillet 2011 relative à la bioéthique
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Unité clinique
Service de Gynécologie Obstétrique et
Médecine de la Reproduction (pôle Mère-Femme)
- UF 6650 d’AMP-Clinique
- Dr P. Lagré
- Dr A. Berdin
(sages femmes, infirmière, ASH)
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Service d’Urologie et Andrologie (pôle investigation et innovation chirurgicales)
- Pr H. Bittard
- Dr G. Guichard
Unité biologique
Service de Biologie et Médecine de la
Reproduction Cryobiologie (pôle Biologie médicale et anatomie
pathologique)
- UF 5158 AMP-Biologique
- UF 5143 Cryobiologie – CECOS
- UF 5168 Conservation de tissus germinaux
- Pr C. Roux
- Dr C. Amiot
- Dr A. Bailly
- Dr O. Blagosklonov
(techniciens de laboratoire, ingénieur biomédical)
Responsable du Centre d’AMP : Pr C. ROUX
Coordinateur du Centre d’AMP : Dr P. LAGRE
(Services hospitaliers CHRU & réseau de soins : correspondants gynécologues du centre d’AMP)
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- Préparation de sperme en vue d'assistance médicale à la procréation
- Fécondation in vitro sans micromanipulation (FIV)
- Fécondation in vitro avec micromanipulation (ICSI)
- Congélation des gamètes
- Congélation des tissus germinaux
- Congélation des zygotes et des embryons
- (Maturation in vitro des ovocytes)
Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Arrêté du 18 juin 2012 fixant la liste des procédés biologiques utilisés en assistance médicale à la procréation
Activités en intraconjugal ou avec tiers donneur :
(don de sperme, don d’ovocyte, accueil d’embryon)
- des produits biologiques :
gamètes, embryons, tissus
- des milieux spécifiques :
préparation, culture, congélation
- des contenants :
tubes, boites, paillettes,
micropipettes, cathéters
- des environnements :
hottes, incubateurs, laboratoire
(classe A <-> D)
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- Préparation de sperme en vue d'assistance médicale à la procréation
- Test de migration survie (migration ascendante, centrifugation en gradient de
densité)
- Préparation de spermatozoïdes prélevés chirurgicalement (MESA –TESE)
- Techniques de préparations particulières : cryptozoospermie, recherche dans
les urines, préparation en contexte viral (VIH, VHC, VHB)
Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Arrêté du 18 juin 2012 fixant la liste des procédés biologiques utilisés en assistance médicale à la procréation
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- Préparation de sperme en vue d'assistance médicale à la procréation
Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Arrêté du 18 juin 2012 fixant la liste des procédés biologiques utilisés en assistance médicale à la procréation
- Centrifugation en gradient de densité :
- Migration ascendante :
avant après
sperme
spermatozoïdes
1 sperme + milieu 2 culot 3 migration
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- Fécondation in vitro sans micromanipulation (FIV)
Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Arrêté du 18 juin 2012 fixant la liste des procédés biologiques utilisés en assistance médicale à la procréation
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- Fécondation in vitro avec micromanipulation (ICSI)
Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Arrêté du 18 juin 2012 fixant la liste des procédés biologiques utilisés en assistance médicale à la procréation
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Arrêté du 18 juin 2012 fixant la liste des procédés biologiques utilisés en assistance médicale à la procréation
- Congélation des gamètes
- Congélation des tissus germinaux
- Congélation des zygotes et des embryons
congélation lente ou vitrification
plateau de cryobiologie
cryobanques
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Arrêté du 18 juin 2012 fixant la liste des procédés biologiques utilisés en assistance médicale à la procréation
ABM Tentatives Grossesses % Gr naissances % naissance enfants % enfants
Inséminations 52731 6586 12,49 5344 10,13 5839 11,07
FIV 20425 4856 23,77 3869 18,94 4404 21,56
ICSI 39349 9800 24,91 7931 20,16 9069 23,05
TEC 24536 5673 23,12 4199 17,11 4524 18,44
CHRU Tentatives Grossesses % Gr naissances % naissance enfants % enfants
Inséminations 282 53 18,79 50 17,73 59 20,92
FIV 214 71 33,18 56 26,17 70 32,71
ICSI 284 105 36,97 90 31,69 106 37,32
TEC 146 90 61,64 40 27,40 44 30,14
Résultats Bilan 2015 Agence de la biomédecine (ABM) et CHRU Besançon
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Réutilisation du tissu ovarien cryoconservé
1. Autogreffe de cortex ovarien autoconservé
- Première naissance 2009 en France – pathologie non cancéreuse et
allogreffe de moelle osseuse (Roux et al. 2010 Fertil Steril)
- Protocole de recherche clinique (DATOR) 17 CHU (Dr C. Amiot)
2. Développement de technique de détection de la Maladie
Résiduelle ovarienne
- Qualification carcinologique : leucémies aiguës
- Qualification fonctionnelle des greffons
3. Alternative à la greffe : Obtention de follicules ovariens isolés
- Qualification fonctionnelle des follicules isolés
- Technique de purification de follicules ovariens isolés (leucémies aiguës)
- Technique de réutilisation de ces follicules
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Réutilisation du tissu ovarien cryoconservé
2. Développement de technique de détection de la Maladie
Résiduelle ovarienne (leucémies aiguës)
Amiot et al., Hum Reprod, 2013
Zver et al., Haematologica, 2014
Zver et al., JARG, 2015
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Réutilisation du tissu ovarien cryoconservé
3. Alternative à la greffe : Obtention de follicules ovariens isolés
Dissociation mécanique et enzymatique
avec collagénase GMP NB6 (Good
Manufacturing Process) (Coger ®)
+ purification
moyenne de 210 follicules par 100 mg de cortex
Viabilité folliculaire= 93,4%
Mouloungui et al., ISPF Shanghai 2015
Mouloungui et al., GRECOT Paris 2016
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Réutilisation du tissu ovarien cryoconservé
3. Alternative à la greffe : Obtention de follicules ovariens isolés
Réutilisation des follicules ovariens isolés :
- Injection intra-ovarienne (au niveau de l’ovaire restant)
- Création d’un ovaire artificiel :
Colle à base de fibrinogène et de thrombine humains EVICEL®,
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Qualification non délétère des ovocytes
1. Observation et analyse d’images
- Observation statique et dynamique (« time lapse »)
- Analyse d’image (texture…)
2. Analyse de spectres
- Modification de la lumière blanche d’illumination
3. Caractéristiques mécaniques
- Mesure de microforces et nanoforces
4. Système intégré « station multimodale » pour le laboratoire de
fécondation in vitro
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Qualification non délétère des ovocytes
Vg MI MII
Roux et al., Hum Reprod & Hum Reprod update 1995
1. Observation et analyse d’image
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Qualification non délétère des ovocytes
1. Observation et analyse d’image
Wacogne et al. Laser Phys Lett 2013
Transformation de Karhunen-loeve
Canaux TKL Base
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Qualification non délétère des ovocytes
1. Analyse de spectres (de transmission)
Vidberg et al. Sensors and Actuators B 2011
Wacogne et al. Laser Phys Lett 2013
500 µm
140 µm
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Qualification non délétère des ovocytes
3. Caractéristiques mécaniques
Abadie et al., Sensors and Actuators B, 2014
Mesure de microforces
et de nanoforces
essais de divers capteurs :
- déformation de micropoutrelles
en SU-8
- …
- capteurs magnétiques
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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation
Qualification non délétère des ovocytes
Intégration des dispositifs de caractéristiques des ovocytes
à une station de micromanipulation d’ICSI dans le laboratoire du
centre d’AMP
- analyse multimodale à la recherche de facteurs prédictifs de
grossesse et de naissance
Wacogne et al., Laser Phys Lett 2013
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– AMIOT Clotilde
– BERDIN Aurélie
– FRONTCZAK Sophie
– MOULOUNGUI Elodie
– PRETALLI Jean Baptiste
– ROUX Christophe
– ZVER Tristan
…
– ABADIE Joël
– GANA Racha
– PIAT Emmanuel
– PIERALLI Christian
– WACOGNE Bruno
…
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