Spectrométrie de Spectrométrie de massemasse
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chromatographie-MS »chromatographie-MS »
1. Ions moléculaire et pseudo-1. Ions moléculaire et pseudo-moléculairemoléculaire
2. Massifs isotopiques2. Massifs isotopiques
3. Résolution3. Résolution
4. Fragmentations et règle de l’azote4. Fragmentations et règle de l’azote
5.5. Ions pseudo-moléculaires Ions pseudo-moléculaires multichargés multichargés et formation d’adduitset formation d’adduits
Analyse de SM issus du Analyse de SM issus du couplage chromatographie-MScouplage chromatographie-MS
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse33
Ion moléculaireIon moléculaire = radical-cation* provenant de l’arranchement d’un = radical-cation* provenant de l’arranchement d’un
électron à la molécule neutre : Mélectron à la molécule neutre : M+ + (masse M, charge +1)(masse M, charge +1)
Ion moléculaire ou pseudo-moléculaireIon moléculaire ou pseudo-moléculaire
Source Source
d’ionisation :d’ionisation :Impact Impact
électronique (EI)électronique (EI)
Ion pseudo-moléculaireIon pseudo-moléculaire : :
En mode positif : ajout d’un proton sur M : (M+H)En mode positif : ajout d’un proton sur M : (M+H)+ + (masse : M+1, charge+1)(masse : M+1, charge+1)
En mode négatif : perte d’un proton : (M-H)En mode négatif : perte d’un proton : (M-H) -- (masse : M-1, charge -1) (masse : M-1, charge -1)
Ions pseudo-moléculaires multichargésIons pseudo-moléculaires multichargés (voir plus loin) (voir plus loin)
!! Le pic à rechercher diffère selon la source!! Le pic à rechercher diffère selon la source d’ionisationd’ionisation
La plupart desLa plupart dessources sources
(CI, APCI, ..)(CI, APCI, ..)
ElectrosprayElectrospray (ESI)(ESI)
* La notation M* La notation M+ + signifie qu’il s’agit de la molécule entière (après perte d’un électron), qu’elle est signifie qu’il s’agit de la molécule entière (après perte d’un électron), qu’elle est
chargée positivement (+), et qu’elle comporte un électron non apparié (chargée positivement (+), et qu’elle comporte un électron non apparié ())
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse44
Ion pseudo-moléculaire :Ion pseudo-moléculaire :
Exemple : analyse HPLC/APCI d’un mélange de 5 benzodiazépinesExemple : analyse HPLC/APCI d’un mélange de 5 benzodiazépines
(Solvant = CH(Solvant = CH33CN-HCN-H22O)O)
287
300
271
309
285
1. Ions moléculaire et pseudo-moléculaire1. Ions moléculaire et pseudo-moléculaire
2. Massifs isotopiques 2. Massifs isotopiques
3. Résolution3. Résolution
4. Fragmentations et règle de l’azote4. Fragmentations et règle de l’azote
5.5. Ions pseudo-moléculaires multichargés Ions pseudo-moléculaires multichargés et et formation d’adduitsformation d’adduits
Analyse de SM issus du Analyse de SM issus du couplage chromatographie-MScouplage chromatographie-MS
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse66
1. Massifs isotopiques1. Massifs isotopiques
Isotopes : Isotopes : atomes d’un même élément qui contiennent un nombre identique de protons atomes d’un même élément qui contiennent un nombre identique de protons
mais un nombre différent de neutronsmais un nombre différent de neutrons
Abondance isotopique = pourcentage des isotopes d’un élément dans la natureAbondance isotopique = pourcentage des isotopes d’un élément dans la nature
Masse moyenne pondérée (MM) = Masse atomique apparaissant sur le tableau périodique Masse moyenne pondérée (MM) = Masse atomique apparaissant sur le tableau périodique
et qui tient compte des isotopes et de leur abondanceet qui tient compte des isotopes et de leur abondance
Exemple : nbre de nbre deprotons : nucléons :
nbre nbre de nbre masse abondance abondanceatomique masse neutrons isotopique en % (1) relative(2)
Chlore-35 17 35 35-17 = 18 34,97 75,8% 100Chlore-37 17 37 37-17 = 20 36,97 24,2% 32,5
Masse moyenne pondérée du chlore = (0,758 * 34,97 uma) + (0,242 * 36,97 uma) = 35,454 uma
(1) = nombre moyen d’isotope cité pour 100 atomes de l’élément(2) = nombre moyen d’isotope cité pour 100 isotopes majoritaires
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse77
Principaux isotopes en chimie organiquePrincipaux isotopes en chimie organique
N.B. Pour une liste complète des isotopes de tous les éléments : voir fichier « excel » sur www.ipl.be
ElémentElément isotopisotopee
%% Masse Masse isotopiqisotopiq
ueue
isotopisotopee
%% Masse Masse isotopiqueisotopique
isotopisotopee
%% Masse Masse isotopiquisotopiqu
ee
Masse Masse moyennemoyenne
CC 1212CC 100100 12.000012.0000 1313CC 1.11.1 13.003313.0033 12.01112.011
HH 11HH 100100 1.00781.0078 22HH0.010.01
552.01402.0140 1.00791.0079
NN 1414NN 100100 14.003114.0031 1515NN 0.370.37 15.000115.0001 14.006714.0067
OO 1616OO 100100 15.994915.9949 1717OO 0.040.04 16.999116.9991 1818OO 0.200.20 17.999217.9992 15.999415.9994
SS 3232SS 100100 31.972131.9721 3333SS0.780.78
9932.971532.9715 3434SS 4.444.44 33.967933.9679 32.06632.066
FF
ClCl
1919FF
3535ClCl
100100
100100
18.998418.9984
34.968834.9688 3737ClCl31.931.9
8836.965936.9659 35.45335.453
BrBr 7979BrBr 100100 78.918378.9183 8181BrBr 97.297.288
80.916380.9163 79.90479.904
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse88
Calcul de masses exactesCalcul de masses exactes
Masse moyenne :
(20 * 12.011)
+ (42 * 1.0079)
= 282,55
282
nbre masse masse A isotopique moyenne
Hydrogène-1 1 1.0078 1.0079Hydrogène-2 2 2.0140
Carbone-12 12 12.0000 12.011Carbone-13 13 13.0034
Soit la molécule
d’eicosane C20H42 :
Masse exacte M : (12C20
1H42)
(20 * 12.000)
+ (42 * 1.0078)
= 282,33
Masse exacte M+1
avec un 13C :
(19 * 12.000)
+ (1 * 13.0034)
+ (42 * 1.0078)
= 283,33
Masse exacte M+1
avec un 2H :
(20 * 12.000)
+ (41 * 1.0078)
+ (1 * 2.0140)
= 283,33
N.B. Pour le calcul de masse moyenne et exacte : voir fichier « excel » sur www.ipl.be
La différence entre masse exacte M et masse moyenne MM augmente avec la taille de la molécule : entre MM et M = 1 Da / 1500 Da
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse99
Calcul de l’abondance relative des satellites Calcul de l’abondance relative des satellites isotopiques M+1, M+2 pour des petites isotopiques M+1, M+2 pour des petites
moléculesmolécules
Typed’élément Caractéristiques Exemple Abondance relative du 2ème isotope*
1! Isotope ou F - Q plusieurs isotopes I -
dont un est majoritaire P -(A > 99,9%) H 0,015
Q+1 Isotope M+1 C 1,08
non négligeable N 0,37
O 0,2 Q+2 Isotope M+2 S 4,43
non négligeable Cl 31,98Br 97,28
* Abondance
de l’isotope
majoritaire
= 100
M+1 (1,08 . Nombre de C) + ( 0,37 . Nombre de N )M
M+2 (31,98 . Nombre de Cl) + ( 4,43 . Nombre de S ) + ……M
Satellite M+1 :
Satellite M+2 :
100
100
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1010
Exemple 1 : soit l’eicosane C20H42
Estimation du rapport M+1 / M : 20 x 1,08 % = 21,6 / 100
M282,3
M+1283,3
Abondance des satellites isotopiquesAbondance des satellites isotopiques
Exemple 2 : soit un pic de masse 282 dont M+1 / M = 11%.
Ce pic ne peut correspondre qu’à une molécule de maximum 10 C
(ou moins de 10 C et d’autres éléments Q+1 tels que N)
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1111
Massifs isotopiques complexesMassifs isotopiques complexes
Si la molécule contient plusieurs atomes d’un même élément dont le 2ème isotope a
une abondance non négligeable (ex : plusieurs Cl ou plusieurs Br)
Ou si la molécule a une masse élevée (> 500 Da) :
La probabilité d’avoir 2 ou >2 isotopes minoritaires dans une même molécule devient
non négligeable. Cette probabilité augmente avec la masse de la molécule.
Présence de satellites isotopiques M+3, M+4, …..
Le massif isotopique se complexifie*
Exemple 1 : Allure du massif isotopique de molécules contenant 2 Cl, 3 Cl, 4 Cl
* Le détail des calculs de ces massifs complexes dépasse le cadre de cet exposé.
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1212
Exemple 2Exemple 2 : Allure du massif isotopique de molécules contenant un nombre croissant : Allure du massif isotopique de molécules contenant un nombre croissant d’atomes de carbone.d’atomes de carbone.
Si le nombre de C augmente, la probabilité de trouver plusieurs Si le nombre de C augmente, la probabilité de trouver plusieurs 1313C dans une même C dans une même molécule augmente molécule augmente le nombre de satellites isotopiques augmente le nombre de satellites isotopiques augmente
Molécule à 50 C : à côté du M+1, apparition de satellites M+2, M+3,… non négligeables
Rapport M / M+1 pour
C 50 H 102
( MM = 703,3 )
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
702 703 704 705 706 707
m/z
ab
on
dan
ce
Rapport
M / M+1 pour C 100 H 202
( MM = 1404,7 )
01402 1405 1408 1411
m/z
ab
on
dan
ce
Rapport M / M+1 pour C 500 H 1002
( MM = 7015,4 )
07008 7015 7022 7029
m/z
ab
on
dan
ce
Rapport M / M+1 pour C 1000 H 2002
( MM = 14 028,8 )
014017 14028 14039
m/z
ab
on
dan
ce
Molécule à 1000C : la valeur de masse moyenne (MM) s’éloigne de celle de M – Distribution gaussienne des satellites - Le plus abondant a une masse proche de la masse moyenne
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1313
Table de massifs isotopiquesTable de massifs isotopiques
Chaque formule brute est associée à un massif isotopique qui lui est
propre et dont l’allure (masse et abondance des satellites) peut être
calculée à priori.
Programmes de calcul à partir d’une formule brute : Excel (voir fichier sur Programmes de calcul à partir d’une formule brute : Excel (voir fichier sur
www.ipl.be), Xcalibur, www.ipl.be), Xcalibur, http://www.webelements.com/http://www.webelements.com/ , , http://www.chemcalc.org/http://www.chemcalc.org/, …, …
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1414
En Conclusion :En Conclusion :
Chaque formule brute est associée à un massif isotopique qui lui est propre
Pour des molécules de masse < 500 Da :
L’abondance des pics « M+1 » renseigne sur le nombre d’éléments Q+1 :
M+1/M (1,08 . Nombre de C) + ( 0,37 . Nombre de N ) /100
L’abondance des pics « M+2 » et suivants renseigne sur la présence d’éléments
Q+2 (S, Si, Se, Cl, Br) ainsi que le nombre de ces atomes :
M+2/M (31,98 . Nombre de Cl) + ( 4,43 . Nombre de S ) + …… /100
Un pic « M+1 » anormalement faible peut être le signe de la présence d’éléments
monoisotopiques (éléments Q) : P, I, F
Pour des molécules de masse > 500 Da
Le nombre de satellites isotopiques augmente le massif isotopique se complexifie !
Le pic le plus abondant d’un massif isotopique a une masse qui se rapproche de la
masse moyenne. Selon la résolution, le massif isotopique peut apparaître sous
forme d’une bande dont le maximum est la masse moyenne.
1. Ions moléculaire et pseudo-moléculaire1. Ions moléculaire et pseudo-moléculaire
2. Massifs isotopiques 2. Massifs isotopiques
3. Résolution3. Résolution
4. Fragmentations et règle de l’azote4. Fragmentations et règle de l’azote
5.5. Ions pseudo-moléculaires multichargés Ions pseudo-moléculaires multichargés et et formation d’adduitsformation d’adduits
Analyse de SM issus du Analyse de SM issus du couplage chromatographie-MScouplage chromatographie-MS
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1616
Formules brutes* contenant Formules brutes* contenant 1212C, C, 11H, H, 1414N et N et 1616OO entre 180.000 et 180.200 :entre 180.000 et 180.200 :
! Le nombre de formules brutes dont la masse est
comprise entre deux valeurs données augmente avec la
masse de l’entité
Formules brutes* Formules brutes*
contenant contenant 1212C, C, 11H, H, 1414N et N et 1616O O
entre 28.000 et 28.200 :entre 28.000 et 28.200 :
CO : 28.000
N2 : 28.006
CH2N : 28.019*
C2H4 : 28.031
La capacité d’un spectromètre à distinguer une masse x d’une masse y dépend
de la résolution …
* Certaines de ces formules brutes ne correspondent à aucune molécule : ex : C15 ou CH2N
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1717
RésolutionRésolution = m / = m / mm
Deux pics sont séparés si la profondeur de la vallée qui
les sépare ne dépasse pas une fraction donnée de la
hauteur du pic le moins intense (généralement 10% pour
la haute résolution et 50% pour la basse résolution)
Autre définition (pour un pic isolé) = résolution FWHM :
m = largeur à mi-hauteur. Définition plus flatteuse :
résolution FWHM / résolution à 10% = 2,2
Si la résolution est suffisante, on peut alors associer une masse donnée à une seule
formule brute
Remarque : Un autre paramètre important de l’analyseur est l’exactitude en masse càd la
précision, ou plus exactement la justesse des rapports m/z mesurés. Elle dépend de la stabilité
et du pouvoir de résolution de l’analyseur.
m = différence de masse correspondant à deux pics adjacents tout juste séparés
m = masse du premier pic (ou moyenne des masses des deux pics)
Dès lors, un spectromètre dont la résolution est de 2000 peut séparer des pics
situés à des valeurs m/z de 2000 et 2001 (ou de 200 et 200,1 ou de 20,00 et 20,01)
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1818
Basse Résolution et Haute RésolutionBasse Résolution et Haute Résolution
Formule Brute : Masse exacte M12C
1H4 16,031313C
1H4 17,0346
12C2571H383
14N6516O77
32S6* 5 803,6377
13C12C2561H383
14N6516O77 32S6
* 5 804,6401
14N2 28,0061512C2 1H4 28,0312
12C9 14N4
16O 180,007312C11
1H2 14N 16O2 180,0085
12C2571H383
14N6516O77
32S6* 5 803,6377
12C2591H385
14N6216O78 32S6 5 803,6390
m R = m/m
1,0033 16
1,0033 6 000
0,025 1 100
0,0013 140 000
0,0013 4 500 000
* Insuline
Les spectromètres commerciaux actuels peuvent avoir une résolution allant jusque 500 000
HR = haute résolution : R de l’ordre de 104 -105 - BR = Basse résolution : R de l’ordre de 103
SpectromètreHR ou BR ?
BR
HR
BR
HR
Impossibleà séparer
Entités ≠ mais de masses
très proches
Entitésidentiques dont l’une
contient un 13C
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse1919
Résolution : exemple :Résolution : exemple :
Spectre de masse de l’insuline :
Masse moyenne : 5807,2222 ; Masse exacte du satellite le plus léger : 5803,6377
Résolution : 6000 500
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse2020
En Conclusion :En Conclusion :
La résolution détermine la capacité d’un spectromètre de masse à différencier
deux masses : R = m / m
Pour des molécules de masse < 1000 Da :
Les spectromètres à haute résolution permettent d’associer une masse donnée à
une formule brute
Pour des molécules de masse > 1000 Da
Ce n’est plus le cas. A haute résolution et selon la taille de la molécule, on peut
parfois distinguer les satellites isotopiques (m = 1)
Remarque : Les journaux de l’ « American Chemical Society » accepte la masse à
haute résolution (R > 200000) comme étant une preuve d’existence du produit
NB : N’oubliez pas que l’analyse des massifs isotopiques est une aide précieuse dans l’attribution d’une formule brute
1. Ions moléculaire et pseudo-moléculaire1. Ions moléculaire et pseudo-moléculaire
2. Massifs isotopiques 2. Massifs isotopiques
3. Résolution3. Résolution
4. Fragmentations et règle de l’azote4. Fragmentations et règle de l’azote
5.5. Ions pseudo-moléculaires multichargés Ions pseudo-moléculaires multichargés et et formation d’adduitsformation d’adduits
Analyse de SM issus du Analyse de SM issus du couplage chromatographie-MScouplage chromatographie-MS
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse2222
FragmentationFragmentation
La fragmentation dans la source du pic moléculaire (ou pseudo-moléculaire)
génère des pics de masse inférieure à M (ou MH+)
Source : APCI, Détecteur : ion-trap
L’abondance, le nombre, la distribution des fragments obtenus dans des
conditions d’analyse données sont caractéristiques de la molécule analysée.
MH+ molécule neutre + cation
m/z = 300.1
Invisible dans le spectre m/z =
227.1
Déduction
M = 73
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse2323
Analyse des fragmentsAnalyse des fragments
1./1./ Il existe des “règles de fragmentation” qui permettent d’identifier une substance inconnue à partir de l’étude de sa Il existe des “règles de fragmentation” qui permettent d’identifier une substance inconnue à partir de l’étude de sa fragmentation. fragmentation.
Si on travaille en EI (Impact Electronique), ces règles reposent sur les principes suivants :Si on travaille en EI (Impact Electronique), ces règles reposent sur les principes suivants :
- Toutes les liaisons n’ont pas la même prédisposition à se couper;Toutes les liaisons n’ont pas la même prédisposition à se couper;
- Deux facteurs principaux favorisent le processus de fragmentation :Deux facteurs principaux favorisent le processus de fragmentation :
- Les liaisons les plus faibles se coupent plus facilement;Les liaisons les plus faibles se coupent plus facilement;
- Les fragments stables ont plus tendance à se formerLes fragments stables ont plus tendance à se former
En ionisation chimique, les ions pseudo-moléculaires MHEn ionisation chimique, les ions pseudo-moléculaires MH+ + donnent seulement quelques ions fragments et ces ions sont donnent seulement quelques ions fragments et ces ions sont différents de ceux obtenus sous impact électronique. différents de ceux obtenus sous impact électronique.
2./ Il existe des tables 2./ Il existe des tables
- de compositions possibles d’ions fragments fréquemment observés dans les spectresde compositions possibles d’ions fragments fréquemment observés dans les spectres
- de compositions possibles de molécules neutres formées lors de la fragmentationde compositions possibles de molécules neutres formées lors de la fragmentation
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse2424
Règle de l’azoteRègle de l’azote
Une molécule de masse impaire Nombre impair d’atomes d’azote
Règle valable pour tous les composés contenant du carbone, de l’hydrogène, de l’oxygène, de l’azote, du soufre, des halogènes, du phosphore, du bore, du silicium, de l’arsenic et des alcalino-terreux.
Une molécule de masse paire Nombre pair d’atomes d’azote(ou aucun atome d’azote)
Rem : L’ion pseudomoléculaire (M+H)+ correspondant à une molécule de masse
impaire protonée sera de masse paire et inversément.
1. Ions moléculaire et pseudo-moléculaire1. Ions moléculaire et pseudo-moléculaire
2. Massifs isotopiques 2. Massifs isotopiques
3. Résolution3. Résolution
4. Fragmentations et règle de l’azote4. Fragmentations et règle de l’azote
5.5. Ions pseudo-moléculaires multichargés Ions pseudo-moléculaires multichargés et et formation d’adduitsformation d’adduits
Analyse de SM issus du Analyse de SM issus du couplage chromatographie-MScouplage chromatographie-MS
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse2626
Ion moléculaireIon moléculaire = radical-cation* provenant de l’arranchement d’un = radical-cation* provenant de l’arranchement d’un
électron à la molécule neutre : Mélectron à la molécule neutre : M+ + (masse M, charge +1)(masse M, charge +1)
Ion moléculaire ou pseudo-moléculaireIon moléculaire ou pseudo-moléculaire
Source Source
d’ionisation :d’ionisation :Impact Impact
électronique (EI)électronique (EI)
Ion pseudo-moléculaireIon pseudo-moléculaire : :
En mode positif : ajout d’un proton sur M : (M+H)En mode positif : ajout d’un proton sur M : (M+H)+ + (masse : M+1, charge+1)(masse : M+1, charge+1)
En mode négatif : perte d’un proton : (M-H)En mode négatif : perte d’un proton : (M-H) -- (masse : M-1, charge -1) (masse : M-1, charge -1)
Ions pseudo-moléculaires multichargésIons pseudo-moléculaires multichargés : :
En mode positif : ajout de z protons sur M : (M+zH) En mode positif : ajout de z protons sur M : (M+zH) z+z+ (masse : M+z, charge +z) (masse : M+z, charge +z)
En mode négatif : perte de z protons sur M : (M-zH) En mode négatif : perte de z protons sur M : (M-zH) z-z- (masse : M-z, charge –z) (masse : M-z, charge –z)
! Plusieurs pics pseudo-moléculaires ! Plusieurs pics pseudo-moléculaires déconvolution déconvolution
La plupart desLa plupart dessources sources
(CI, APCI, ..)(CI, APCI, ..)
ElectrosprayElectrospray (ESI)(ESI)
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse2727
Exemple : spectre ESI du lysozyme Exemple : spectre ESI du lysozyme
M + 17H+ = (M + 17)17+ 1049.8 = ( 17 825 + 17 ) / 17
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse2828
ESI : Déconvolution d’iESI : Déconvolution d’ions pseudo-moléculaires ons pseudo-moléculaires
multichargésmultichargés : (M+nH)(M+nH)n+n+ ou (M-nH)ou (M-nH)n-n-
0 2000 m/z Da
m/z = 901 M = 18.000 Da
(M + 20 H)20+
n = 20
m/z = (M + 20) / 20
ACQUIRED spectrum DECONVOLUTED spectrum
2
22 n
nMm
1
11 n
nMm
2n
1n21
12
mm
nn
m/z
[1]
[2]
21
12
1
mm
mn
11 .)1( nmM
[1]+[2]
et
n2 = n1+ 1 [3] + [3]
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse2929
Déconvolution du spectre ESI+ d’un Déconvolution du spectre ESI+ d’un mélange de 2 protéines : cytochrome C + mélange de 2 protéines : cytochrome C +
glucagonglucagon
Remarque : la charge courante des protéines est au environ de « 1 proton » / 1000 Da
Glucagon : hormone secrétée par le pancréas qui exerce un rôle dans le métabolisme des sucres, peptide de 29AA – MM 3483Cytochrome C : protéine hèmique qui joue un rôle dans la chaîne respiratoire cellulaire
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse3030
Dimère, Trimère : 2M + HDimère, Trimère : 2M + H++, …, …
Molécule - Solvant : M + S + HMolécule - Solvant : M + S + H++
Molécule - Ion : Molécule - Ion :
En mode positif : M + NaEn mode positif : M + Na++, M + K, M + K+ + , M + NH, M + NH44+ + , …, …
En mode négatif : M + ClEn mode négatif : M + Cl--, M + CH, M + CH33COCO22- - , …., ….
En ESI+ : (M + nH + mNa) En ESI+ : (M + nH + mNa) (m+n)+(m+n)+ , … , …
En ESI- : (M – nH + mNa) En ESI- : (M – nH + mNa) (n-m)-(n-m)- (avec n > m),(avec n > m), …. ….
Molécule – Ion – Solvant : M + S + NaMolécule – Ion – Solvant : M + S + Na++
Sources ESI, APCI, ... : Formations d’adduitsSources ESI, APCI, ... : Formations d’adduits
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse3131
Exemple 1 : Spectre ESI+ de la dicentrine : M = 339Exemple 1 : Spectre ESI+ de la dicentrine : M = 339
d63-3 #5-27 RT:0.06-0.40 AV: 23 NL:2.74E9F:+ c Full ms [ 50.00-1000.00]
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000m/z
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
85
90
95
100
Rel
ativ
e A
bu
nda
nce
702.2
341.5
703.2309.4 342.5
678.3 717.0 765.8279.5 362.3 618.1 978.6420.3 893.6832.2 935.5606.0533.1251.5 481.8178.2127.766.3
340
362
[M + H]+
[M + Na ]+
679[2M + H ]+
701
717 [2M + K]+
[2M + Na ]+
N
OCH3
CH3O
CH3O
O
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse3232
Eau-Aceto-2 #8-10 RT: 0.12-0.16 AV: 3 NL: 1.20E8T: + c Q1MS [ 50.00-300.00]
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300m/z
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
85
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95
100
Re
lativ
e A
bu
nd
an
ce
220.97
179.98
202.98162.00
83.13242.96 278.97
143.96 189.9472.15 233.8084.13 126.01 171.04 267.00212.92 286.9298.15 117.03 258.93 295.9660.20
Exemple 2 : Spectre ESI+ de la D-glucosamine :Exemple 2 : Spectre ESI+ de la D-glucosamine : M = 179M = 179
O
CH2OH
H
NH2
HOH
H
HO
H OH
H
180 [M + H]+
221 [M + CH3CN + H]+
243
Solvant : H2O + CH3CN (Masse CH3CN = 41)
-H2O-H2O
[M + CH3CN + Na]+
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse3333
Exemple 3 : Analyse HPLC-APCI (mode négatif) Exemple 3 : Analyse HPLC-APCI (mode négatif)
d’un mélange de glucoconjugués d’un mélange de glucoconjugués
Pas de pic de l’ion
pseudo-moléculaire (M-H)-.
La masse moléculaire M = 387
est déduite des adduits
35
analyse de spectres de masseanalyse de spectres de masse3434
Récapitulatif sur Récapitulatif sur l’identification l’identification d’un composé à partir d’un SMd’un composé à partir d’un SM
Formuledéveloppée**
Formulebrute*
MM
Identification dupic moléculaire(ou apparenté)
Identification dupic moléculaire (ou apparenté)
à haute résolution
Analyse des satellites
isotopiques
Analyse des fragments
* Formule brute : Nombre et nature des atomes de la molécule
** Formule développée = structure :
Façon dont les atomes sont agencés
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