DCEM1

Travaux Pratiques de Parasitologie

�Séance 1 : Les Helminthes

�Séance 2 : Les Protozoaires

�Séance 3 : Mycologie et Arthropodes

�Séance 4 : Examen de Travaux Pratiques

Année Universitaire 2008-2009

Séance 1 - Les Helminthes

Séance 1 - Les Helminthes

�Œufs d'oxyures (Enterobius vermicularis) dans un scotch-test

�Œuf de trichocéphale (Trichuris trichiura) à l'examen parasitologique des selles

�Ascaris lumbricoïdesfemelle et mâle (fiche avec deux photos)

�Œufs d'Ascaris lumbricoïdesvus à l'examen parasitologique des selles

�Larve rhabditoïde d'anguillule (Strongyloïdes stercoralis) à l'examen parasitologique

des selles

�Larves enkystées de Trichinella spiralisdans du tissu musculaire

�Microfilaire de Loa loasur un frottis sanguin coloré au May-Grunwald-Giemsa

(M.G.G.)

�Fasciola hepaticaadultes ou grandes douves du foie

�Œuf de Fasciola hepaticadans les selles

�Coupe anatomo-pathologique d'un œuf de Schistosoma mansonientouré de son

granulome bilharzien ou bilharziome

�Biopsie de Muqueuse Rectale (B.M.R.) : présence de nombreux œufs de

schistosomes (Schistosoma haematobium) dont certains sont calcifiés

�Embryophore de Taenia spp.vu à l'examen parasitologique des selles

�Taenia saginata

�Coupe anatomo-pathologique de foie atteint d'Echinococcose alvéolaire (Larve

d’Echinococcus multilocularis) chez le rongeur

Œufs d’oxyures(Enterobius vermicularis)

dans un scotch-test (technique de Graham à la cellophane adhésive)(objectif x40)

Une bande de «scotch» ordinaire est appliquée sur la marge anale d’un sujet supposé infesté, collée sur une lame, puis examinée au microscope ; la préparation est faite ici d’un fragment de ce «scotch», recouvert d’une lamelle pour une meilleure conservation.� Dans un premier temps, repérer à l’œil nu ce fragment.� Puis mettre au point à l’objectif x10 en diaphragmant, car les œufs sont

très clairs.� Observer ensuite à l’objectif x40 : ce sont des œufs de 60 µ de long,

ovales, asymétriques, à coque mince et transparente, contenant la larve infestante repliée en deux.

Les œufs sont émis embryonnés, ils sont directement infestants et expliquent les auto-infestations et les infestations familiales.

Œuf de trichocéphale(Trichuris trichiura )

à l’examen parasitologique des selles(objectif x40)

Caractéristiques:� taille : 50 à 60 microns de long

30 microns de large� coque lisse épaisse brunâtre� forme de citron, bouchons muqueux aux 2 extrémités� oeuf non embryonné, l’embryon se forme lors du séjour dans le milieu

extérieur

NB : Il s’agit d’une lame réalisée à partir d’une suspension de selle parasitée.Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Ascaris lumbricoïdesfemelleVer nématode de grande taille 15 à 20 cm de long

à extrémité postérieure rectiligne

Ascaris lumbricoïdesmâleTaille de 10 à 17 cm de long sur 3 mm de largeavec extrémité postérieure recourbée en crosse

Œufs d’Ascaris lumbricoïdes

vus à l’examen parasitologique des selles(objectif x40)

Caractéristiques:� taille variable : 60 microns de long sur 45 microns de large

parfois 80/90 microns� forme : ovoïde et symétrique� aspect : coque externe épaisse mamelonnée brune� contenu : une cellule germinative, l’œuf doit s’embryonner dans le milieu

extérieur

Attention : les œufs non fécondés ont des caractères atypiques, coque lisse, jaune clair.

NB : Il s’agit d’une lame réalisée à partir d’une suspension de selle parasitée.Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Larve rhabditoïde d’anguillule(Strongyloïdes stercoralis)

à l’examen parasitologique des selles(objectif x40)

Caractéristiques:� taille variable : 250 à 300 microns de long� aspect : œsophage de type rhabditoïde (double renflement)

Ces larves sont visibles lors de l’examen parasitologique des selles et dans la technique d’extraction de Baermann (selles fraîches).

NB : Il s’agit d’une lame réalisée à partir d’une suspension de selle parasitée.Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Larves enkystées de Trichinella spiralis

dans du tissu musculaire

Fragment de diaphragme de souris infestée expérimentalement, renfermant de nombreuses larves de trichine, et coloré en rouge violacé par le carmin. Ces larves ne pourront devenir des adultes que si elles sont dévorées par un autre animal carnivore.

Observer avec l’objectif x10, les larves spiralées sont contenues dans des pseudo-kystes ovalaires de 400 x 250 microns.

L’homme se contamine en mangeant de la viande parasitée insuffisamment cuite contenant des larves enkystées (par ex : porc, sanglier).

C’est une maladie qui survient par épidémie.

Microfilaire de Loa loa

sur un frottis sanguin coloré au May-Grünwald Giemsa (M.G.G.)

Caractéristiques:� périodicité : diurne� taille : 300 microns sur 8 microns� graine : courte, mal colorée au M.G.G.� noyaux : gros, ovoïdes se chevauchant, violets� espace céphalique : long 6 microns� extrémité caudale : effilée, noyaux terminaux� corps interne : non coloré

Rechercher les microfilaires à l’objectif x10 dans les franges du frottis, puis à l’objectif x40 et x100 immersion pour observer leur structure nucléée.

Fasciola hepaticaadultes ou grandes douves du foie

Morphologie:� ver aplati de 2 à 5 cm de long, hermaphrodite� une ventouse buccale, une ventouse ventrale� cuticule épineuse, parasite des canaux biliaires� contamination : ingestion de métacercaires fixées sur des végétaux

Œuf de Fasciola hepatica

dans les selles(objectif x40)

Morphologie:� taille : ce sont des œufs de grande taille : 140 µm x 80 µm� forme : ovale, assez régulier� couleur : brun clair. La coque paraît plus foncée� coque : lisse le plus souvent. Elle est plus épaisse au niveau de l’opercule� opercule : large� contenu : l’œuf est rempli de cellules polyédriques de grande taille qui

constituent une masse vitelline

La recherche se fait dans les selles. Le délai d’apparition des œufs dans les selles est de 3 à 4 mois après l’infestation (peu nombreux).

NB : Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Coupe anatomo-pathologique d’un œuf deSchistosoma mansoni

entouré de son granulome bilharzien ou bilharziome

Le granulome inflammatoire bilharzien est la lésion élémentaire responsable de la pathologie observée au cours des bilharzioses. Les vers femelles pondent leurs œufs dans les vaisseaux sanguins et certains vont se bloquer dans les ramifications hépatiques. Il s’agit ici d’une coupe de foie ; la préparation est à regarder aux objectifs x4 et x10. On voit des œufs coupés sous diverses incidences. Autour d’eux, se développe une réaction inflammatoire à cellules géantes, cellules épithélioïdes et polynucléaires éosinophiles. Cette réaction évoluera vers une transformation fibreuse.

Biopsie de muqueuse rectale : présence de nombreuxœufs de Schistosomes

(Schistosoma haematobium)

dont certains sont calcifiés(objectif x40)

Les vers adultes de Schistosoma haematobiumsont présents dans les vaisseaux des plexus hémorroïdaux et pondent leurs œufs au niveau de la vessie et de la muqueuse rectale. C’est un moyen rapide de diagnostic, on prélève un fragment de muqueuse rectale sous anuscope. De nombreux oeufs possédant un éperon terminal sont observés, le plus souvent calcifiés.

NB : Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Embryophore de Taenia spp.

vu à l’examen parasitologique des selles

(objectif x40)

Caractéristiques:� forme : le plus souvent arrondie ou légèrement ovale� taille : environ 50 µ de diamètre� couleur : marron foncé� coque : elle comprend 2 parties :

� la plus externe rarement présente est mince et séparée de la 2ème par un très grand espace

� la 2èmeest épaisse, très foncée, striée en rayon de roue

� contenu : embryon hexacanthe(6 crochets)� recherche : dans les selles lorsque les anneaux mûrs ont été écrasés.

L’embryophore est morphologiquement identique pour les deux ténias, Taenia saginataet Taenia solium. Ceux de T. saginatasont rarement présents.

La recherche se fait dans les selles. Le délai d’apparition des œufs dans les selles est de 3 à 4 mois après l’infestation.

NB : Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Taenia saginata

Fragment de chaîne de Taenia saginataadulte, constitué d’anneaux qui prennent naissance à partir de la base de la tête ou scolex.

Ce taenia peut atteindre 10 m de long.

Chez le rongeur :Coupe anatomo-pathologique de foie atteint d’Echinococcose alvéolaire

(Larve d’Echinococcus multilocularis)

(objectif x10)

Remarquer:� la disparition du tissu hépatique� la membrane anhiste colorée en rouge� la membrane proligère ou germinative (très fine)� la présence de très nombreux scolex (protoscolex)� des réactions nécrotiques sont observées et l’ensemble évoque des

alvéoles d’où le nom de cette lésion

NB : Rechercher à l’objectif x4, x10 et x40.

Séance 2 - Les Protozoaires

Séance 2 - Les Protozoaires

�Forme végétative et kyste d’Entamoeba histolytica/dispar

�Forme végétative hématophage d'Entamoeba histolytica

�Kystes de Giardia intestinalisvus à l'examen parasitologique des selles

�Oocystes de Cryptosporidium spp: frottis de selles coloré par la technique de Ziehl-

Neelsen modifiée

�Formes végétatives ou tachyzoïtes intra-cellulaires de Toxoplasma gondii

�Kyste cérébral de Toxoplasma gondii

�Frottis sanguin àPlasmodium falciparum: trophozoïtes. Coloration au MGG

�Frottis sanguin àPlasmodium falciparum: gamétocyte. Coloration au MGG

�Formes amastigotes de Leishmaniaintracellulaires dans un frottis de moelle

osseuse : leishmaniose viscérale

Photo 1 Photo 2

Forme végétative et kysted’Entamoeba histolytica/dispar

(objectif x40)

Forme végétative d’Entamoeba histolytica/disparfixée par le MIF (merthiolate-iode-formol).Taille 10 à 12 microns. On voit le noyau très caractéristique.Cette forme végétative, non hématophage, se nourrit de débris alimentaires ou de bactéries.Elle vit en saprophyte dans la lumière colique et elle est présente chez les porteurs «sains».

Le kyste est sphérique de 10 à 13 microns de diamètre. Il présente une coque réfringente.Sur cette photo, on distingue 3 noyaux sur 4, avec une chromatine périphérique et un caryosome central.Ce kyste est la forme infestante pour l’homme, de résistance et de dissémination dans le milieu extérieur.

NB : Rechercher à l’objectif x40.

Ces formes peuvent coexister lors d’un examen parasitologique des selles.

Photo 1

Photo 2

Forme végétative hématophaged’Entamoeba histolytica

(objectif x40)

Forme hématophage fixée par une coloration au Merthiolate Iode Formol (MIF). A l’état frais on peut voir des globules rouges dans le cytoplasme.Taille 20 à 40 microns, on voit nettement le noyau.Caractéristiques : c’est la forme virulente pathogène.La reproduction se fait par simple division asexuée.

NB : Rechercher à l’objectif x40.

Kystes de Giardia intestinalis

vus à l’examen parasitologique des selles(objectif x40)

Les kystes sont ovalaires, de 9 à 15 microns de long sur 6 microns de large. La coque comporte une double paroi lisse. Les noyaux sont au nombre de 4 avec une disposition variable dans le kyste. On observe dans le kyste des «reliquats flagellaires» en forme de «S» très allongé.

NB : Rechercher à l’objectif x40.

Oocystes de Cryptosporidium spp. :

Frottis de selles coloré par la technique de Ziehl-Neelsen modifiée

Observerà l’objectif x40 : sur un fond coloré en rose-violacé ou en bleu-vert selon les préparations, les oocystes de 3 à 6 microns de diamètre, sont colorés en rose vif. Ils ont une paroi épaisse et un cytoplasme granuleux qui contient une vacuole. Le corps résiduel et les sporozoïtes apparaissent en rouge foncé à la périphérie de l’oocyste.

Caractéristiques:Cryptosporidium parvumest responsable de la cryptosporidiose. C’est une zoonose. C’est une parasitose cosmopolite, fréquente en France.Le parasite effectue son cycle évolutif dans les cellules épithéliales de l’intestin, parfois de l’arbre bronchique, ou des voies biliaires.Ce parasite est responsable de diarrhées aiguës mais bénignes chez l’enfant ou l’adulte immunocompétent. Il est responsable de diarrhées aqueuses, rebelles aux traitements chez les sujets immunodéprimés (SIDA).

Formes végétatives outachyzoïtes intra-cellulaires deToxoplasma gondii

(objectif x100 immersion)

Les lames sont réalisées à partir d’une ascite expérimentale de souris. Une goutte est déposée sur chaque lame ; après séchage, elle est fixée au méthanol puis colorée au Giemsa.Etudier aux objectifs x40 et x100 (immersion).On observe :� les toxoplasmes, organismes ovalaires ou en croissant de 5 à 8 microns

sur 2 à 5 microns, avec un cytoplasme bleuté et un noyau rouge� des cellules péritonéales dont certaines sont parasitées� des hématies en quantité variable (parfois ascite hémorragique)

Les tachyzoïtes sont les formes de dissémination dans l’organisme se caractérisant par un fort potentiel de réplication et de lyse cellulaire.

Kyste cérébral de Toxoplasma gondii

(fort grossissement)

Les kystes de Toxoplasma gondiimesurent de 20 à 200 microns. Ils contiennent les bradyzoïtes, formes quiescentes. Ils prédominent dans les tissus nerveux et musculaires de l’hôte.

NB : Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Frottis sanguin àPlasmodium falciparum: trophozoïtes

Coloration au May-Grünwald-Giemsa (M.G.G.)(objectif x100 immersion)

Observer avec l’objectif à immersion (x100) ; sur ce frottis, les parasites sont très abondants ; les hématies peuvent être mono, bi ou pluri-parasiées…; chez Plasmodium falciparumon ne retrouve dans le sang périphérique, que des formes jeunes ou trophozoïtesayant un aspect de «bague à chaton» : leur noyau est coloréen rouge et leur cytoplasme bleu est repoussé à la périphérie par une grosse vacuole. Les schizontes âgés et les corps en rosace sont présents dans le sang des capillaires viscéraux profonds, en particulier cérébraux (ce qui fait la gravité de la maladie), et leur présence dans le sang périphérique est exceptionnelle.

Attention : sur les frottis de sang, en plus des hématies, on retrouve tous les éléments du sang : plaquettes, polynucléaires, lymphocytes dont les noyaux sont colorés en rouge violacé.

Frottis sanguin àPlasmodium falciparum: gamétocyte

Coloration au May-Grünwald-Giemsa (M.G.G.)(objectif x100 immersion)

Les gamétocytes sont des formations allongées, falciformes ou en banane. Ils sont rarement observés.Le cytoplasme est coloré en bleu ou en rose. Le noyau est rouge souvent masqué par le pigment brun (dégradation de l’hémoglobine).Le contour de l’hématie dans laquelle s’est développée le gamétocyte n’est pas toujours visible.

NB : Rechercher les gamétocytes à l’objectif x40 et les observer àl’objectif x100 immersion.

Formes amastigotes deLeishmaniaintracellulaires dans un frottis de moelle osseuse : leishmaniose

viscérale(fort grossissement)

Observer à l’objectif x100. Les leishmanies sont des organismes de 2 à 6 microns, avec un noyau rouge et un kinétoplaste qui est l’organe flagellaire rudimentaire. Certaines cellules parasitées éclatent au moment de la préparation libérant les leishmanies.

Formes amastigotes de Leishmania Formes amastigotes de Leishmania dans une cellule

kinétoplastenoyau

Séance 3 - Mycologie et Arthropodes

Séance 3 - Ectoparasites et Arthropodes

�Spores et filaments de Malassezia furfurdans des squames cutanées

�Aspect microscopique d'une culture de Microsporum canis

�Poil parasité par un champignon dermatophyte de type microsporique

�Spores et filaments mycéliens dans un prélèvement vaginal

�Cryptococcus neoformans: levures encapsulées. Examen direct à l'encre de Chine

�Têtes aspergillaires en culture (Aspergillus fumigatus)

�Sarcopte de la gale (Sarcoptes scabiei)

�Pediculus humanus capitis: pou

�Lentes de Pediculus humanus capitis

�Phtirus pubis(P. inguinalis) (pou du pubis, morpion)

�Aspect général d'une puce

�Ixodes ricinus(tiques)

Spores et filaments deMalassezia furfur

dans des squames cutanées à l’examen direct

(technique du scotch-test)

(objectif x40)

Le fragment de scotch est appliqué sur la peau et collé sur la lame. Dans les squames sont observés :� des amas de blastospores rondes à ovales, très réfringentes avec un

double contour donnant un aspect en « grappe de raisin»

� ainsi que des filaments courts, épais, droits ou incurvés

Cet aspect suffit pour poser le diagnostic de Pytiriasis versicolor.

Aspect microscopique d’une culture de

Microsporum canis

Coloration au bleu de lactophénol

(objectif x40)

� nombreuses macroconidies d’aspect caractéristique : fuseaux en forme de «quenouille» avec des parois épaisses, des cloisons multiples et des extrémités pointues

� nombreux filaments

� des microconidies (absentes sur la photo)

NB : Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Poil parasité par un champignon dermatophytetype microsporique

(objectif x40)

On observe autour du cheveu ou du poil une véritable gaine de petites spores, très compactes, adhérentes au cheveu ou au poil, mesurant 2 microns de diamètre. Les filaments sont rarement observés.

Spores et filaments mycéliens

dans un prélèvement vaginal(objectif x40)

Lors d’unprélèvement mycologique chez une patiente, on observe des spores et des filaments. Pour identifier le champignon responsable, il faut mettre en culture ces filaments et spores sur un milieu de Sabouraud.

Quand la culture s’est développée (de 1 à plusieurs jours), des tests spécifiques d’identification sont pratiqués afin de préciser le genre et l’espèce.

Dans ce cas précis, la levure Candida albicanssera identifiée.

Cryptococcus neoformans: levures encapsulées

Examen direct à l’encre de Chine(objectif x40)

Dans la mise en évidence de Cryptococcus neoformanspar la technique àl’encre de Chine, les levures apparaissent distinctement en négatif, le colorant respectant la capsule mucopolysaccharidique qui forme un halo incolore.

En microscopie optique, on observe :� une levure réfringente de 3 à 7 µm� un cytoplasme granuleux� des éléments bourgeonnants, uniques ou multiples, accolés à la levure

On note aucune filamentation.

La crytococcose est une mycose cosmopolite, essentiellement opportuniste, due à une levure encapsulée : Cryptococcus neoformans.

Le mode de contamination le plus fréquent est l’inhalation de spores. Il existe également une contamination cutanée et digestive.

Têtes aspergillaires en culture

(Aspergillus fumigatus)

(objectif x40)

� Conidiophore long, lisse

� Vésicule hémisphérique, aplatie au sommet

� Une rangée de phialides très serrée sur les ¾ de la vésicule (sur le haut)

� Conidies (spores) arrondies, rugueuses à échinulées

Les spores se détachent très facilement de ces organes reproducteurs, elles sont véhiculées par l’air et sont à l’origine des contaminations.

Sarcopte de la gale(Sarcoptes scabiei)

(objectif x10)

C’est un acarien globuleux de 300 à 400 microns de long qui vit dans l’épiderme ; il possède 4 paires de pattes très courtes (3 paires chez les larves), insérées en 2 groupes, l’un antérieur, l’autre postérieur. Leurs tarses sont terminés par de longues soies.

La femelle ovigère habite le fond de la galerie, qu’elle creuse à la vitesse de 2 à 3 mm par 24 heures, dans l’épaisseur de l’épiderme dont elle se nourrit. Le mâle vit soit dans le sillon, soit plus souvent en dehors des sillons sous l’épiderme, où il apparaît comme un point brunâtre.

Les œufs sont pondus au rythme de 4 ou 5 par jour. De l’œuf, sort une larve hexapode qui se transforme en nymphe octopode, donnantbientôt des mâles et des femelles pubères.

NB : Rechercher à l’objectif x10 et x40.

Pediculus humanus capitis: pou de tête

(objectif x10)

Caractéristiques:� petit insecte de 1 à 3 mm de long� corps aplati dorso-ventralement, de teinte grise� les mâles sont plus petits que les femelles� il n’y a pas d’ailes� les pattes sont fortes, trapues, armées de griffes puissantes qui permettent à ces

insectes de s’accrocher aux cheveux et aux poils� les poux sont des parasites hématophages et très voraces� les deux sexes piquent. Leur durée de vie est de 2 mois� la femelle pond durant sa vie une centaine d’œufs ou lentes, qu’elle fixe sur les

cheveux et y sont maintenus à l’aide d’une sécrétion spéciale� le jeune pou sort 6 jours après la ponte. 18 jours après sa naissance, il est capable de

se reproduire. Sa température d’élection est de 32°C

NB : Rechercher à l’objectif x4 et x10.

Lentes de Pediculus humanus capitis

(objectif x10)

Les femelles pondent des œufs appelés lentes qu’elles fixent sur les cheveux à l’aide d’une sécrétion qui se solidifie.

Contrairement aux pellicules, ces lentes adhèrent fortement aux cheveux.

L’œuf éclot en 6 jours ; les jeunes poux donnent des adultes en 18 jours.

NB : Rechercher à l’objectif x4 et x10.

Phtirius pubis(P. inguinalis)(pou du pubis, morpion)

(objectif x10)

Morphologie:� taille : arthropode de 1 à 3 mm� tête : porte des antennes, des yeux, et une trompe� corps : de forme trapézoïdale� pattes : sont munies de griffes puissantes

Mode de vie:� Phtirius pubisvit au niveau du pubis, mais peut envahir les poils des

cuisses, du thorax, des creux axillaires, des cils et sourcils� le mâle et la femelle sont hématophages� la femelle pond des œufs (lentes) accrochés aux poils ; le cycle dure 18

jours� la transmission se fait le plus souvent par contact vénérien

Pouvoir pathogène:� il détermine un prurit avec présence de papules� ne transmet aucune affection

NB : Rechercher à l’objectif x4 et x10.

Aspect général d’une puce

(objectif x10)

Insecte de petite taille (2 mm) ne possédant pas d’aile, aplati latéralement.

Ses deux pattes postérieures sont puissantes ce qui lui permet d’effectuer des sauts.

C’est un insecte hématophage.

La différenciation de genre et d’espèces se fait d’après différents critères morphologiques.

NB : Rechercher à l’objectif x4 et x10.

Ixodes ricinus(tiques)

(faible grossissement)

Ce sont des arachnides piqueurs, hématophages à tous les stades de

leur développement. Les adultes sont octopodes.

Ils transmettent par morsure :� la maladie de Lyme due àBorrelia bugdorferi

� les piroplasmoses ou babesioses dues àPiroplasma

� les fièvres typho-exanthématiques régionales dues àRickettsia

� la paralysie ascendante à tiques