S82 Nutrition clinique et métabolisme 27 (2013) S57–S175 / Cahiers de nutrition et de diététique 48 (2013) S57–S175

sionnable (SEDDS) et de l’évaluer sur cellules endothéliales aor-

tiques bovines (BAEC).

Matériel et méthodes. – Trois SEDDS ont été développés et éva-

lués. La capacité d’auto-émulsification in-vitro, la taille des glo-

bules et le potentiel Zêta des microémulsions (ME) obtenues après

dispersion dans l’eau ont été étudiés. La captation du RES par les

BAEC a été évaluée en incubant les cellules en milieu DMEM

enrichi ou non en RES (25 μm) sous forme d’une solution éthano-

lique à 1 %, ou d’une ME, durant 20, 40, 60 et 180 minutes. Après

chaque temps, les fractions membranaires et cytosoliques ont été

séparées et les concentrations intracellulaires et membranaires de

RES ont été mesurées par HPLC. La localisation du RES dans les

BAEC a été confirmée par observation en microscopie confocale

grâce aux propriétés d’autofluorescence du RES (λεxc 355 nm, λem

488 nm) et après marquage des noyaux cellulaires par le TOPRO3

(λexc 642 nm, λem 661 nm). L’effet protecteur du RES contre le stress

oxydant a été évalué en pré-incubant les BAEC avec du DMEM

+ RES (25 μM), en solution éthanolique ou en ME, puis en les expo-

sant à des concentrations croissantes de H2O2 (750, 1000 et

1500 μM) durant 24 h. La viabilité cellulaire a été estimée par un

test au rouge neutre. Les résultats (moyennes ± ET) ont été analysés

par un test de Student et les différences ont été considérées comme

significatives pour p < 0,05.

Résultats. – Une formulation auto-émulsionnable optimale

(20 % Miglyol®812 ; 70 % Tween®80 ; 10 % Ethanol) a permis

d’obtenir une ME de granulométrie 103 ± 14 nm et de potentiel zêta

– 14,7 ± 2,0 mV. Atoxique sur BAEC, cette ME a été comparée à

une solution éthanolique :

Conclusion. – Cette étude a permis de mettre au point un sys-

tème auto-émulsionnable stable de RES, qui accroit significative-

ment sa captation par les BAEC et son activité anti-oxydante dans

un contexte de stress oxydant.

Référencesþ:1. M. Das, D.K. Das. Resveratrol and cardiovascular health. Mol. Aspects Med.

31 (2010) 503-512.

2. A. Amri et al. Administration of resveratrol : What formulation solutions tobioavailability limitations ? J. Control. Release 158 (2012) 182-193.

P051Le régime cétogénique augmente rapidement les acides aminés branchés dans le foie: étude par spectroscopie 1 H HRMAS chez le ratM.-C. Beauvieux1,*, J. Naulin1, D. El Hamrani1, M. Roy2, A.-K. Bouzier-

Sore1, J.-L. Gallis1, S. Cunnane2

1Résonance Magnétique des Systèmes Biologiques, UMR5536CNRS UNIVERSITÉ BORDEAUX SEGALEN, Bordeaux, France,

2Centre de Recherche sur le Vieillissement, Université de Sher-brooke, Sherbrooke, Canada

Introduction et but de l’étude. – L’oxydation hépatique des

acides gras libres (AGL) génère des corps cétoniques exportés vers

les tissus tels que le cerveau à des fins énergétiques. Le régime céto-

génique (RC), riche en lipides (L), pauvre en glucides+protides

(G+P), est proposé en 1921 chez les enfants souffrant d’épilepsie

réfractaire au traitement médicamenteux (KossoffEH, Epilepsia

2009;50); les mécanismes de son action cérébrale restent sujets à

question (RoyM, BrainRes 2012;1488). Le RC induit un profil

unique de l’expression génique du foie (KennedyAR, AmJPhysiol

2007;292). Chez la souris, un RC de 12 sem induit une stéatose

(GarbowJR, AmJPhysiol2011;300) alors que 7 sem suffisent à la

prévenir chez la souris juvénile ob/ob (OkudaT, NutrDiabetes2012;2),

ce qui est aussi observé chez l’Homme après 6 mois de régime (Ten-

dlerT, DigDisSci2007;52). Les études sont rares sur les effets du RC

dans le foie ; nous explorons le profil métabolique précoce chez des

rats soumis à 1 sem de RC.

Matériel et méthodes. – Des rats mâles Sprague-Dawley (160 g

à T0) sont répartis en 2 groupes 1/ contrôle « Ct » ; L:G+P 1:12,6

(n = 16) et 2/ « RC » soumis à 48 h de jeûne avant le régime (L:G+P

3,7:1) (n = 16). Les régimes (SAFE France) sont donnés durant 7jrs

(10 g/jr*100 g poids corporel). Un prélèvement sanguin est fait

avant euthanasie par ondes focalisées (5 kW, 1 sec, 2,45GHz,

Sacron8000 France). Les foies (stockés – 80 °C) sont analysés par

RMN 1H-HRMAS (Bruker AVANCE500 11,7T ; 6 min

d’acquisition ; séquence écho CPMG : n = 16, TE = 1ms).

Résultats. – Le RC induit la cétose modérée attendue

(βOHbutyrate = 0,8 ± 0,2 mM vs 0,2 ± 0,0 mM, p = 0,0087 chez

Ct). En fin de régime, les rats RC sont plus légers vs Ct (240,6 g

± 13,7 vs 270,5 ± 21,0 g, respectivement, p < 0,0001). L’insuliné-

mie est inférieure chez les RC (61,3 ± 10,4mUI/L vs Ct 103,4

± 13,7mUI/L ; p < 0,05). RC ne modifie pas le contenu en acides

gras du foie mais augmente leur degré d’insaturation (p < 0,0001) ;

RC abaisse Choline/Pcholine (0,64 ± 0,05) vs Ct (0,87 ± 0,05 ;

p = 0,004). Le pic de résonance (leucine+isoleucine) est totalement

absent chez Ct, et systématiquement mesuré en RC (p = 6,10-5).

Conclusion. – RC induit l’apparition de leucine+isoleucine,

acides aminés branchés cétogéniques (AABC). Ce régime succé-

dant à un jeûne de 48 h peut se comparer à une restriction, connue

pour libérer les AABC du foie (HolecekM, PhysiolRes2001;50).

Rapidement transportés dans le système nerveux central, les AABC

sont source majeure de glutamate, lui-même précurseur du GABA

dont la concentration diminue dans l’épilepsie réfractaire (WangZJ,

MagnResMed2003;49). L’administration de 15N leucine chez la

souris RC avait déjà montré un marquage du GABA (YudkoffM,

JNeurosciRes2001;66). La cétose favoriserait la présence cérébrale

de glutamine dont les transporteurs de la barrière hémato encépha-

lique échangent avec la leucine sanguine (YudkoffM, Prostaglan-

dins LeukotEssentFattyAcids 2004;70). Notre étude met en

évidence un effet très précoce du RC sur le foie qui occupe une place

importante dans les réponses métaboliques et adaptatives à ce

régime.

P052La modulation in vitro du statut oxydatif par la leptine est dépendante du stade néoplasique des cellules épithéliales mammairesS. Mahbouli1,*, A. Rossary1, S. Rougé1, M.-P. Vasson1,2

1UMR 1019, Unité de Nutrition Humaine, Clermont Université,Université d’Auvergne, CRNH-Auvergne, Clermont-Ferrand,

Ethanol-RES (25 μM) ME-RES (25 μM) p

Captation à 180 min

(nmol/mg prot)

Membranaire 0,033 ± 0,009 0,074 ± 0,012 < 0,05

Intracellulaire 0,075 ± 0,022 0,160 ± 0,014 < 0,05

Viabilité (%)

après stress oxydant

750 μM 58 ± 4 71 ± 8 < 0,05

1000 μM 49 ± 7 66 ± 4 < 0,05

1500 μM 38 ± 5 55 ± 6 < 0,05

Nutrition clinique et métabolisme 27 (2013) S57–S175 / Cahiers de nutrition et de diététique 48 (2013) S57–S175 S83

2Unité de Nutrition, CHU Clermont-Ferrand, Centre Jean Perrin,Clermont-Ferrand, France

Introduction et but de l’étude. – La leptine est connue pour

avoir de multiples effets métaboliques tels que l’augmentation de la

survie et de la croissance cellulaire, la régulation de la balance éner-

gétique, ainsi que l’augmentation de la synthèse de cytokines et de

prostaglandines. Toutefois peu de travaux se sont intéressés à

l’impact potentiel de la leptine dans le métabolisme oxydatif cellu-

laire. Ainsi, cette étude in vitro a pour but de déterminer les effets

de la leptine sur le statut oxydatif de cellules épithéliales.

Matériel et méthodes. – La balance pro- et anti-oxydante de 3

types de cellules humaines (HMEC : cellules primaires saines ;

MCF-7 : lignée issue de tumeur canalaire invasive ; MDA-MB-

231 : lignée issue de métastases d’adénocarcinome mammaire inva-

sif) mises en culture en présence de 10 et 100 ng/ml de leptine, a été

évaluée en cinétique :

– pour le versant pro-oxydant par la production à court terme (0

à 2 h) des espèces réactives de l’oxygène (ERO) en cytométrie et

fluorimétrie et par la mesure des hydroperoxydes lipidiques

(HPLip) à 24 h ;

– pour le versant anti-oxydant par la quantification du glutathion

intracellulaire et par la mesure de l’expression génique (RT-qPCR)

et de l’activité catalytique à 1 h, 6 h et 24 h des enzymes anti-oxy-

dantes (glutathion peroxydases (GPX), hème oxygénase (HMOX)).

Résultats. – Pour le versant pro-oxydant : quelque soit sa

concentration, la leptine augmente précocement et de façon simi-

laire, de 0 à 30 min, la production des ERO des 3 types cellulaires :

HMEC 0,85 ± 0,01 vs ± 0,71 0,01 ; MCF-7 0,95 ± 0,02 vs 0,89

± 0,02 ; MDA-MB-231 1,18 ± 0,07 vs 0,93 ± 0,03 (UA, leptine 10

vs 0 ng/ml (p < 0,05)) . À 24 h la production d’HPLip reste stable

pour les HMEC (0,68 ± 0,25 mmol/l) alors qu’elle augmente pour

les cellules MCF-7 : 1,01 ± 0,21 vs 0,52 ± 0,23 et MDA-MB-231 :

1,02 ± 0,13 vs 0,64 ± 0,38 (mmol/l, leptine 10 vs 0 ng/ml).

Pour le versant anti-oxydant, il est observé :

– dans les HMEC une augmentation de l’expression des ARNm

à 1 h et de l’activité à 6 h des enzymes anti-oxydantes GPX et

HMOX quelque soit la concentration de leptine ;

– dans les MCF-7 et uniquement pour 10 ng/ml de leptine, une

induction de l’expression des ARNm à 1 h et de l’activité cataly-

tique à 6 h de GPX et HMOX ;

– pour les MDA-MB-231, quelque soit la concentration de

leptine, aucune modification de la réponse anti-oxydante n’est

observée.

Conclusion. – La leptine maintient à court terme l’équilibre du

statut oxydatif dans les cellules épithéliales mammaires saines. En

revanche dans les cellules tumorales, elle induit un stress oxydant

consécutif à une moindre réponse anti-oxydante, dépendante du

stade néoplasique. Cette moindre sensibilité des cellules à la modu-

lation leptinique peut contribuer aux altérations oxydatives asso-

ciées au processus néoplasique.

P053Activités anti-inflammatoires des polyphénols de Morus alba sur des cultures de cellules microglialesS. Krisa1, C. Rivière2, M. Nassra1, L. Péchamat1, J.-C. Delaunay1,

A. Marchal3, P. Waffo-Téguo1, J.-M. Mérillon1,*

1GESVAB, ISVV, Université de Bordeaux, Bordeaux,

2UDSL, EA GRIIOT, Université Lille Nord de France, Lille,3Unité de Recherche Oenologie, EA 4577, ISVV, Université de Bor-

deaux, Bordeaux, France

Introduction et but de l’étude. – Les processus neuro-inflam-

matoires sont impliqués dans la pathogenèse de nombreux troubles

neurodégénératifs1. Les cellules microgliales, principales cellules

immunitaires du système nerveux central, représentent ainsi une

cible d’intérêt pour rechercher des molécules d’origine naturelle

aux propriétés anti-inflammatoires. Dans notre étude, nous avons

évalué les propriétés anti-inflammatoires de polyphénols purifiés

dans les tiges du Morus alba. Cette espèce, connue sous le nom de

murier blanc, est une plante fréquemment étudiée en raison de son

usage alimentaire et de son utilisation dans la médecine tradition-

nelle asiatique2.

Matériel et méthodes. – La purification des polyphénols des

tiges du Morus alba est effectuée par différentes techniques chro-

matographiques (chromatographie de partage centrifuge et CLHP

préparative) et leur identification par des analyses spectroscopiques

dont la RMN bi-dimensionnelle. Puis, la mesure de leur potentiel

effet sur l’inflammation cérébrale est réalisée sur des cellules micro-

gliales BV-2 activées par le LPS3.

Résultats. – Huit polyphénols sont purifiés dont 2 sont nouvelle-

ment identifiés dans les tiges du Morus alba. Ce sont : le (E)-resvé-

ratrol, l’(E)-oxyresvératrol, la moracine M, la steppogénine, la

dihydromorine, le (E)-mulberroside A et 2 nouveaux hétérosides,

un glycoside de coumarine, l’isoscopoletine 6-(6-O-β-D-apiofura-

nosyl-β-D-glucopyranoside) et un glycoside de flavanolol, la dihy-

dromorine 7-O-β-glucopyranoside. Cinq polyphénols inhibent

significativement la libération de monoxyde d’azote par les cellules

microgliales dès la concentration de 25 μM et de façon dose dépen-

dante. De plus, nous avons mis en évidence que la moracine M

inhibe la production d’autres médiateurs inflammatoires, le TNF-αet l’IL-1β.

Conclusion. – Ainsi, la moracine M pourrait être un candidat

potentiel pour prévenir l’inflammation impliquée dans les maladies

neurodégénératives.

Référencesþ:1. Block ML, Zecca L, Hong JS. 2007. Microglia-mediated neurotoxicity: un-

covering the molecular mechanisms. Neuroscience. 8, 57-69.

2. Zafar MS, Muhammad F, Javed I, Akhtar M, Khaliq T, Aslam B, Waheed A,Yasmin R, Zafar H. 2013. White mulberry (Morus alba): A brief phytoche-mical and pharmacological evaluations account. Int. J. Agr. Biol. 15, 612-620.

3. Nassra M, Krisa S, Papastamoulis Y, Kapche GD, Bisson J, André C, Kons-man JP, Schmitter JM, Mérillon JM, Waffo-Téguo P. 2013 Inhibitory Activ-ity of Plant Stilbenoids against Nitric Oxide Production byLipopolysaccharide-Activated Microglia. Planta Med. 11, 966-970.

P054L’apport d’AGPI n-3 sous forme de phospholipides ou de triglycérides induit des effets différents sur l’adiposité et sur l’inflammation induites par un régime hyperlipidiquechez la sourisM. Awada1, A. Meynier2, C. Soulage3, A. Géloën3, M. Guichardant3,

C. Genot2, M.-C. Michalski1,*

1CarMeN, INRA U1362, INSERM U1060, INRA, Villeurbanne,2BIA, UR1268, INRA, Nantes,3CarMeN, INRA U1362, INSERM U1060, INSA-Lyon, Villeur-

banne, France