Microbiologie

Compétences TechniquesCompétences Techniques

CompétencesCompétences

Préparation de solutionsPréparation de solutions Travailler avec les concentrationsTravailler avec les concentrations DilutionsDilutions Dilutions en sDilutions en sérieérie

Préparation des Préparation des SolutionsSolutions

DéfinitionsDéfinitions

SolutionSolution Mélange de 2 substances ou plus dans Mélange de 2 substances ou plus dans

une phase uniqueune phase unique Solution composée de deux composantesSolution composée de deux composantes

SolutéSoluté– Partie qui est dissoute ou diluée – Habituellement la Partie qui est dissoute ou diluée – Habituellement la

plus petite quantitéplus petite quantité Solvant (OU Diluent)Solvant (OU Diluent)

– Partie de la solution dans laquelle le soluté est Partie de la solution dans laquelle le soluté est dissout – Habituellement le plus grand volumedissout – Habituellement le plus grand volume

Concentration = Quantité de soluté Quantité de solution (Pas

solvant)

Trois façons d’exprimer les concentrations: Concentration Molaire (Molarité) Pourcentages Masse par volume

ConcentrationsConcentrations

Molarité

No de Moles de soluté/Litre de solution

Masse de soluté/PM de soluté = Moles de

soluté

Moles de soluté/vol en L de solution =

Molarité

PourcentagesPourcentages

Les concentrations en pourcentage Les concentrations en pourcentage peuvent être exprimé en tant que :peuvent être exprimé en tant que : V/V – volume de soluté/100 mL de solutionV/V – volume de soluté/100 mL de solution M/M – Masse de soluté/ 100g de solutionM/M – Masse de soluté/ 100g de solution M/V – Masse de soluté/100 mL de solutionM/V – Masse de soluté/100 mL de solution

Tous représentent Tous représentent des fractions de des fractions de 100100

Pourcentages Pourcentages (suite)(suite)

%V/V%V/V Ex. 4.1L soluté/55L solution =7.5%Ex. 4.1L soluté/55L solution =7.5%

Doit avoir les mêmes unités en haut et en Doit avoir les mêmes unités en haut et en bas!bas!

%M/V%M/V Ex. 16g soluté/50mL solution =32%Ex. 16g soluté/50mL solution =32%

Dois avoir des unités du même ordre de Dois avoir des unités du même ordre de grandeur en haut et en bas!grandeur en haut et en bas!

% M/M% M/M Ex. 1.7g soluté/35g solution =4.9%Ex. 1.7g soluté/35g solution =4.9%

Dois avoir les mêmes unités en haut et en Dois avoir les mêmes unités en haut et en bas!bas!

Masse par volume

Une quantité de masse par un volume Ex. 1kg/L Connaître la différence entre une

quantité et une concentration! Dans l’exemple ci-dessus 1 litre contient

1kg (une quantité)– Quelle quantité retrouverait-on dans 100ml?– Quel est le pourcentage de cette solution?

Les DilutionsLes Dilutions

Réduire une Réduire une ConcentrationConcentration

Une FractionUne Fraction

DilutionsDilutions

Dilution = produire des solutions Dilution = produire des solutions plus faibles à partir de solutions plus faibles à partir de solutions plus fortesplus fortes

Exemple : Faire du jus d’orange à Exemple : Faire du jus d’orange à partir de concentré. Mélanger une partir de concentré. Mélanger une cannette de concentré de jus cannette de concentré de jus d’orange congelé avec trois (3) d’orange congelé avec trois (3) cannettes d’eaucannettes d’eau

Dilutions (suite)Dilutions (suite) Les dilutions sont exprimées comme Les dilutions sont exprimées comme

le volume de la solution étant diluée le volume de la solution étant diluée par le volume total final de la dilutionpar le volume total final de la dilution

Dans l’exemple du jus d’orange, la Dans l’exemple du jus d’orange, la dilution serait exprimée comme 1/4, dilution serait exprimée comme 1/4, pour une cannette de jus à un TOTAL pour une cannette de jus à un TOTAL de quatre cannettes de jus dilué. de quatre cannettes de jus dilué. Quand on parle de la dilution, vous Quand on parle de la dilution, vous diriez pour l’exemple du jus : « un diriez pour l’exemple du jus : « un dans quatre ».dans quatre ».

Dilutions (suite)Dilutions (suite)

Un autre exemple :Un autre exemple : Si vous diluez 1 ml de sérum avec Si vous diluez 1 ml de sérum avec

9 ml de salin, la dilution serait 9 ml de salin, la dilution serait écrite 1/10 ou dite « un dans dix », écrite 1/10 ou dite « un dans dix », car vous exprimez le volume de la car vous exprimez le volume de la solution étant diluée (1 ml de solution étant diluée (1 ml de sérum) par le volume final TOTAL sérum) par le volume final TOTAL de la dilution (10 ml totaux).de la dilution (10 ml totaux).

Dilutions (suite)Dilutions (suite)

Un autre exemple :Un autre exemple : Une (1) partie d’acide concentré Une (1) partie d’acide concentré

est diluée avec 100 parties d’eau. est diluée avec 100 parties d’eau. Le volume total de solution est 101 Le volume total de solution est 101 parties (1 partie d’acide + 100 parties (1 partie d’acide + 100 parties d’eau). La dilution est parties d’eau). La dilution est écrite comme 1/101 ou dite “un écrite comme 1/101 ou dite “un dans cent un ”.dans cent un ”.

Dilutions (suite)Dilutions (suite)

Remarquez que les dilutions N’ONT Remarquez que les dilutions N’ONT PAS d’unités (cannettes, ml, ou PAS d’unités (cannettes, ml, ou parties) mais sont plutôt parties) mais sont plutôt exprimées comme un nombre par exprimées comme un nombre par rapport à un autre nombrerapport à un autre nombre Exemple : 1/10 ou « un dans dix»Exemple : 1/10 ou « un dans dix»

Dilutions (suite)Dilutions (suite)

Les dilutions sont toujours exprimées Les dilutions sont toujours exprimées avec la substance originale étant avec la substance originale étant diluée comme étant un (1). Si plus diluée comme étant un (1). Si plus d’une partie de la substance d’une partie de la substance originale est initialement utilisée, il originale est initialement utilisée, il est nécessaire de convertir la partie est nécessaire de convertir la partie de la substance originale à un (1) de la substance originale à un (1) quand la dilution est exprimée.quand la dilution est exprimée.

Dilutions (suite)Dilutions (suite)Exemple:Exemple:

Deux (2) parties d’un colorant sont diluées avec huit (8) Deux (2) parties d’un colorant sont diluées avec huit (8) parties de diluant. Le volume total de solution est 10 parties de diluant. Le volume total de solution est 10 parties (2 parties de colorant + 8 parties de diluent). La parties (2 parties de colorant + 8 parties de diluent). La dilution est initialement exprimée comme 2/10, mais la dilution est initialement exprimée comme 2/10, mais la substance originale doit être exprimée comme étant un substance originale doit être exprimée comme étant un (1). Pour convertir le volume original à un (1), utiliser (1). Pour convertir le volume original à un (1), utiliser une équation de rapport et de proportion. Rappelez-une équation de rapport et de proportion. Rappelez-vous que les dilutions sont exprimées en terme de 1 à vous que les dilutions sont exprimées en terme de 1 à quelque chose :quelque chose :

____2 parties de colorant 2 parties de colorant = ___ = ___1.0___1.0___ Volume total de 10 parties xVolume total de 10 parties x

2 x = 102 x = 10 x = 5x = 5

La dilution est exprimée comme étant 1/5.La dilution est exprimée comme étant 1/5.

Dilutions (suite)Dilutions (suite)La dilution n’est pas toujours comme des nombres La dilution n’est pas toujours comme des nombres

entiers.entiers.Exemple:Exemple:Deux parties (2) de sang sont diluées avec cinq (5) Deux parties (2) de sang sont diluées avec cinq (5) parties de saline. Le volume total de solution est sept parties de saline. Le volume total de solution est sept (7) parties (2 parties de sang + 5 parties de saline). La (7) parties (2 parties de sang + 5 parties de saline). La dilution serait 2/7, ou plus précisément 1/3.5. Encore dilution serait 2/7, ou plus précisément 1/3.5. Encore une fois, ceci est calculé en utilisant une équation de une fois, ceci est calculé en utilisant une équation de rapports et de proportions. Rappelez-vous que les rapports et de proportions. Rappelez-vous que les dilutions sont exprimées en terme de 1 à quelque dilutions sont exprimées en terme de 1 à quelque chose: chose:

____2 parties de sang_____2 parties de sang_____ = ___ = ___1.0___1.0___ Volume total de 7 parties xVolume total de 7 parties x

2 x = 72 x = 7 x = 3.5x = 3.5

La dilution est exprimée comme 1/3.5La dilution est exprimée comme 1/3.5

Qu’est que cela veut Qu’est que cela veut dire??dire??

Si une solution possède une dilution de 1/10 Si une solution possède une dilution de 1/10 le nombre représente 1 partie de le nombre représente 1 partie de l’échantillon ajouté à 9 parties de diluant. l’échantillon ajouté à 9 parties de diluant.

Donc les volumes utilisés seraient 10-1= 9. Donc les volumes utilisés seraient 10-1= 9. Ceci représente 1 partie d’échantillon Ceci représente 1 partie d’échantillon

ajoutée à 9 parties de diluant.ajoutée à 9 parties de diluant. Comment est-ce que vous ferriez une Comment est-ce que vous ferriez une

dilution de 1/10 dans un volume final de 3 dilution de 1/10 dans un volume final de 3 ml?ml?

DilutionsDilutions

Si une dilution de 1/8 d’une Si une dilution de 1/8 d’une solution mère est faite suivie par solution mère est faite suivie par une dilution de 1/6 quelle est la une dilution de 1/6 quelle est la dilution finale.dilution finale.

La dilution finale est: 1/8 x 1/6 = La dilution finale est: 1/8 x 1/6 = 1/481/48

Facteur de DilutionFacteur de Dilution EXEMPLE: Quel est le facteur de dilution EXEMPLE: Quel est le facteur de dilution

si vous ajoutez 0.1 mL d’un spécimen à si vous ajoutez 0.1 mL d’un spécimen à 9.9 mL de diluant?9.9 mL de diluant? Le volume final est égal au volume de Le volume final est égal au volume de

l’échantillon PLUS le volume du diluent: l’échantillon PLUS le volume du diluent: 0.1 mL + 9.9 mL = 10 mL0.1 mL + 9.9 mL = 10 mL

Le facteur de dilution est égal au volume Le facteur de dilution est égal au volume final diviser par le volume de l’échantillon : final diviser par le volume de l’échantillon : 10 mL/0.1 mL = Facteur de dilution de 100X 10 mL/0.1 mL = Facteur de dilution de 100X

Exemple d’un ProblèmeExemple d’un Problème

Quel est le facteur de dilution Quel est le facteur de dilution quand 0.2 mL est ajouté à 3.8 mL quand 0.2 mL est ajouté à 3.8 mL de diluant? de diluant?

Établir le ProblèmeÉtablir le Problème

Facteur de dilution = Volume Facteur de dilution = Volume final/Volume d’échantillonfinal/Volume d’échantillon

0.2 +3.8 = 4.0 volumes totaux0.2 +3.8 = 4.0 volumes totaux 4.0/0.2 = Facteur de dilution de 20X 4.0/0.2 = Facteur de dilution de 20X

DilutionsDilutions

Moyen de réduire une concentrationMoyen de réduire une concentration Dilution: Une fraction du facteur de dilutionDilution: Une fraction du facteur de dilution

Ex. Vous avez une solution de 25 mg/mL et désirez une solution de 5mg/mL

Facteur de dilution = Conc. que j’ai Conc. que je veux

Facteur de dilution = 25mg/mL 5mg/mL

= 5X

Dilution = 1/le facteur de dilution = 1/5 = 1 partie/5 parties Totales

ExempleExemple

Préparer 25mL d’une solution de 2mM à Préparer 25mL d’une solution de 2mM à partir d’un stock de 0.1Mpartir d’un stock de 0.1M

Facteur de dilution = 100mM/2mM=50XFacteur de dilution = 100mM/2mM=50X Dilution = 1/50 partiesDilution = 1/50 parties Donc un 1/50Donc un 1/50ee de la solution doit être de la solution doit être

représenté par la solution stockreprésenté par la solution stock 1/501/50ee de 25mL=25/50=0.5 de 25mL=25/50=0.5

Donc = 0.5mL soluté + 24.5mL solvantDonc = 0.5mL soluté + 24.5mL solvant

Les Dilutions en Les Dilutions en SérieSérie

Dilutions en SérieDilutions en Série

Une dilution en série est n’importe quelle dilution ou la concentration diminue par une quantité donnée dans chaque étape successive.

Les dilutions sont multiplicatives.

Les Dilutions en Série – Les Dilutions en Série – des Fractions en Sériedes Fractions en Série

• The fraction = The dilution– A1: 1/10– A2: 1/4– A3: 0.5/1.5 = 1/3– The final dilution of the series = (A1 X A2 X A3) = 1/120

Exemple

• La fraction = La dilution– A1: 1/10– A2: 1/4– A3: 0.5/1.5 = 1/3– La dilution finale de la série = (A1 X A2 X A3) = 1/120

1mL 1mL 0.5mL

9mL 3mL 1mL

DilutionsDilutions

Si une dilution de 1/8 d’une solution mère est faite suivi par une dilution de 1/6 quelle est la dilution finale.

La dilution finale est: 1/8 x 1/6 = 1/48

Les Dilutions en SérieLes Dilutions en Série

Rappelez-vous que les dilutions en série sont multiplicative et sont faites et sont faites en prenant une quantité donnée en prenant une quantité donnée d’une dilution initiale et de l’ajouter d’une dilution initiale et de l’ajouter de façon successive à des tubes de de façon successive à des tubes de diluentdiluent

Donc chaque dilution successive serait multipliée par le prochain facteur de dilution

Exemple de Dilutions en Exemple de Dilutions en SérieSérie

Tube 1 2 3 4

Aliquot 0.2 0.2 0.2 0.2

Diluent

3.8 3.8 3.8 3.8

Math 4/0.2 1/20x1/20 1/400x1/20

1/8000x1/20

Dilution

1/20 1/400 1/8000 1/160,000

Exemple d’un ProblèmeExemple d’un Problème

Tube 1 2 3 4

Aliquot 0.2 0.2 0.1 0.2

Diluent

3.8 3.8 3.8 4.8

Math

Dilution