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CTI

EUSE

S

EN DEHORS DES ÉTATS-UNIS ET

DU CANADA

DOSAGES SÉROLOGIQUES LIAISON® SARS-CoV-2Des dosages combinés pour la détection des anticorps anti-SARS-CoV-2

MI

Protéine d’enveloppe

Nucléocapside

Protéine de Spicule

Protéine de membrane

ARN

LIAISON® SARS-CoV-2 La valeur des tests DiaSorinDiaSorin fournit aux laboratoires d’analyses médicales 2 dosages sérologiques pour le SARS-CoV-2 : • LIAISON® SARS-CoV-2 IgM• LIAISON® SARS-CoV-2 S1/S2 IgGLa solution consiste en :• 2 tests complètement automatisés à réaliser sur le LIAISON® XL• 2 résultats à partir d’un seul échantillon • La sélection de la protéine de Spicule pour les 2 tests, reconnue comme cible

potentielle pour les futurs candidats vaccins et des anticorps neutralisants• Sensibilité et spécificité élevées pour assurer des résultats précis tout au long de la

fenêtre sérologiqueSéroconversion

La sélection d’antigènes pour

les dosages : la valeur de la 

protéine de Spicule

Les 2 dosages sont basés sur la protéine de Spicule coatée sur la phase solide.

MI

La cinétique de la séroconversion est un facteur clé pour établir la fenêtre de temps appropriée à l’utilisation des tests sérologiques. La séroconversion peut être observée dès 5 jours après l’apparition des symptômes pour les IgM et entre 5 à 7 jours pour les IgG. (1, 2) En fonction de la méthode appliquée, la séroconversion médiane est observée 10 à 13 jours après l’apparition des symptômes pour les IgM et 12 à 14 jours pour les IgG. (3, 4)

La variation estimée au cours du temps des tests de diagnostic pour la détection de l’infection par le SARS-CoV-2 par rapport à l’apparition des symptômes peut être décrite à des fins d’illustration comme suit. (5)

Anticorps IgM Anticorps IgGEcouvillon nasopharyngé PCR

Isolement du virus dans les voies respiratoires

Exposition au SARS-CoV-2

Avant l’apparition des symptômes Après l’apparition des symptômes

Semaine -2 Semaine -1 Semaine 1 Semaine 2 Semaine 3 Semaine 4 Semaine 5 Semaine 6

Apparition des symptômes

Augm

enta

tion

de la

pro

babi

lité

de d

étec

tion

Détection peu probable PCR - positive probable PCR - négative probable

Détection des anticorps

De plus, étant donné que l’ARN viral peut être détecté chez des patients après 20 jours ou plus (6), un résultat IgG positif ne doit pas être interprété comme un signe qu’un patient a cessé d’être infectieux.

Le test IgM utilise S1-RBD comme antigène : plus de 10 antigènes ont été testés et S1-RBD a fourni la meilleure combinaison de spécificité et de sensibilité.

Le test IgG utilise S1 et S2, sous-unités de la protéine de Spicule.

Ces protéines sont responsables de la liaison (S1) et de la fusion (S2) du virus à la cellule.

La protéine de Spicule est la cible des anticorps neutralisants et la plus prometteuse cible pour les vaccins. (7)

Les protéines virales internes, telles que la nucléocapside, ne sont pas exposées directement aux anticorps et sont peu susceptibles d’être neutralisées. (8, 9)

Ac neutralisants

Anticorps neutralisants inhibant la liaison du SARS-CoV-2

ACE2

Protéine de Spicule SARS-CoV-2

Cellule

Ac neutralisants

ACE2

Protéine de Spicule SARS-CoV-2

Liaison du SARS-CoV-2 à ACE2

Cellule

L’intérêt de combiner les

tests IgM et IgG : la fenêtre 

sérologique

La détection combinée d’IgM et d’IgG peut être utilisée pour évaluer le statut immunitaire des patients exposés et infectés par le SARS-CoV-2.L’utilisation combinée d’IgG et d’IgM peut aider à raccourcir la fenêtre de diagnostic en améliorant la détection de la séroconversion jusqu’au 15ème jour après la PCR positive.

Sensibilité diagnostique

combinée

Nombre de résultats positifs LIAISON® IgG et/ou IgM

Sensibilité (IC Wilson 95%)

≤ 7 jours 73 / 105 69,5% (60,2% - 77,5%)

8-14 jours 43 / 47 91,5% (80,1% - 96,6%)

15-30 jours 114 / 116 98,3% (93,9% - 99,5%)

Spécificité diagnostique

combinée

500 échantillons présumés négatifs pour le SARS-CoV-2 ont été testés avec LIAISON® SARS-CoV-2 S1/S2 IgG et LIAISON® SARS-CoV-2 IgM. Une spécificité clinique combinée de 99,2% (496/500, IC 95%: 98,0% - 99,7%) a été observée.

La sensibilité a été évaluée sur 268 échantillons prélevés au cours du temps chez 233 patients européens. L’infection par le SARS-CoV-2 a été confirmée par un test de RT-PCR au moment du diagnostic.Les tests LIAISON® SARS-CoV-2 IgM et S1/S2 IgG ont été réalisés sur des échantillons prélevés au moment de l’admission et jusqu’à 30 jours. Le panel comprenait des patients hospitalisés avec des symptômes modérés, des patients admis en réanimation avec des symptômes sévères et des patients non hospitalisés sans symptômes ou avec des symptômes légers.Le tableau suivant décrit la sensibilité diagnostique combinée dans trois groupes, en fonction du temps de réalisation des tests sérologiques après que le diagnostic virologique ait été établi : échantillons prélevés moins de 7 jours après le diagnostic, échantillons prélevés entre 8 et 14 jours après le diagnostic, et échantillons prélevés 15 à 30 jours après le diagnostic.

Les plages de lyse sont généralement comptées manuellement et les résultats, en association avec le facteur de dilution utilisé pour préparer la plage, servent à calculer le nombre d’unités de plages formées par volume d’unité d’échantillon.Ce résultat représente le nombre de particules infectieuses dans l’échantillon et est basé sur l’hypothèse que chaque plage formée est représentative d’une particule virale infectieuse.

La concentration de sérum pour réduire le nombre de plages de 90% par rapport au virus sans sérum donne la mesure de la quantité d’anticorps présente ou de son efficacité. Cette mesure est désignée par la valeur PRNT90.

La science derrière PRNT90 :Le test de neutralisation par réduction de plages de lyse détermine les concentrations relatives spécifiques du virus (SARS-CoV-2) qui permettent de neutraliser les anticorps dans un échantillon de sérum en mesurant le titre auquel un échantillon de sérum produit 90% de réduction par rapport à un contrôle sans sérum.Le protocole doit être effectué dans un laboratoire de niveau 3 de sécurité biologique.

Sérums de patient dilués à différents titres(ex. de 1/10è à 1/640è)

Solution virale

Charge virale connue

Incubation

1-2 h à 37 °C

les cellules utilisées sont spécifiques du virus

DILUTIONS  DES SÉRUMS

DISTRIBUTION SUR CELLULE MONOCOUCHE

Incubation

1-7 j à 37 °C

PRNT90CALCUL DES TITRES  EN POINT FINAL

Les échantillons de sérum testés sont généralement

soumis à des dilutions en série avant d’être mélangés avec une quantité standardisée

de virus

La concentration de virus est maintenue

constante de telle sorte que lorsqu’il est ajouté à des cellules sensibles et superposé avec des milieux semi-solides, les plages

individuelles peuvent être discernées et comptées

Des titres en point final PRNT90 peuvent être calculés

pour chaque échantillon à chaque pourcentage

de réduction de l’activité du virus

L’intérêt de détecter les anticorps neutralisants :

• Les anticorps neutralisants sont définis comme des anticorps qui défendent une cellule contre un pathogène ou une particule infectieuse en neutralisant tout effet biologique qu’il peut avoir.

• La présence d’anticorps neutralisants est généralement considérée comme un signe de protection contre un agent pathogène, même s’il est à noter que les données scientifiques actuelles ne permettent pas encore de déterminer si les anticorps IgG neutralisants contre le SARS-CoV-2 fournissent une immunité à long terme contre le virus ni si ils protègent les patients contre une réinfection.

Le test LIAISON® SARS-CoV-2 S1/S2 IgG présente une corrélation avec le test de neutralisation par réduction de plages de lyse (PNRT90) 

Un test PRNT (test de séroneutralisation par réduction de plages de lyse) mesure l’efficacité des anticorps des patients à empêcher le virus d’infecter les cellules.

Concordance du LIAISON®

SARS-CoV-2 S1/S2 IgG avec le test PRNT90

La comparaison avec PRNT90 a été effectuée sur 87 échantillons prélevés pendant l’épidémie chez des sujets dont le résultat PRNT90 était disponible : 69 étaient négatifs au test PRNT et 18 étaient positifs au test PRNT (titre> 1:40).

LIAISON® SARS-CoV-2 S1/S2 IgGTitres PRNT

Totalnégatifs positifs

Négatifs (< 12 UA/ml) 68 1 69

Équivoque (12–15,0 UA/ml) 0 0 0

Positifs (≥ 15 UA/ml) 1 17 18

Total 69 18 87

Une concordance positive élevée (94,4%) a été observée entre le test LIAISON® SARS-CoV-2 S1/S2 IgG à la valeur seuil et le PRNT90 au ratio 1/40, ce qui indique la présence d’anticorps neutralisants.

Utilisation possible sur le don

de plasma (3): 

• Les anticorps neutralisants sont généralement considérés comme protecteurs (*) et le test DiaSorin présente une concordance positive de 94,4% avec le test PRNT90.

• Bien que le rôle des anticorps neutralisants contre le SARS-CoV-2 soit encore à l’étude, l’information concernant leur présence peut être importante d’un point de vue épidémiologique.

• Le test DiaSorin peut être un outil précieux pour le dépistage des dons de plasma.• S1 et S2, les antigènes que DiaSorin utilise dans son test IgG, sont les plus prometteurs

pour le développement d’un vaccin. (7)

(*) Rappel :Il est à noter que les données scientifiques disponibles à l’heure actuelle ne permettent pas encore de déterminer si la neutralisation du SARS-CoV-2 par les IgG confère une immunité à long terme contre le virus ni si les patients sont protégés contre une réinfection. En bloquant l’entrée du virus dans la cellule, les anticorps neutralisants peuvent bloquer la réplication virale : cela ne remplace pas l’utilité de réaliser un test PCR pour vérifier si le patient est encore infectieux.REMARQUE: les anticorps neutralisants sont produits via un processus de maturation, et peuvent prendre plus de temps à être produits que les anticorps non neutralisants. (6)

• Diminuer la fenêtre sérologique (utilisation combinée IgM + IgG).• Un test IgM pour aider à différencier les patients qui ont une infection récente de

ceux qui ont une infection ancienne.• Un test IgG pour identifier les donneurs potentiels de plasma hyper-immuns, grâce

à la corrélation avec les anticorps neutralisants.• De plus, la protéine de Spicule semble être la cible la plus prometteuse pour le

développement de vaccins.

Utilisation potentielle

des dosages sérologiques :

FOCUS sur l’intérêt de la corrélation

avec les anticorps neutralisants

• Le titre 1/160ème du test PRNT90 est un seuil possible pour sélectionner des sérums de donneurs pour la plasmaphérèse en Italie et selon le CDC, par exemple les dons de sang hyper-immuns.

• À la valeur de 80 UA/ml avec le test LIAISON® IgG, une concordance positive de 100% a été observée avec le test PRNT90 au 1/160ème.

• Notre test peut être utilisé comme outil de pré-dépistage : tout d’abord on utilise le test LIAISON® IgG pour identifier les donneurs > 80 UA/ml, puis on réalise le protocole classique (PRNT, dépistage des pathogènes du sang, etc.).

Références produits et descriptions – réactifs

LIAISON®Control SARS-CoV-2 S1/S2 IgG311451

SARS-CoV-2 IgM311471

CONDITIONNEMENT 2 flacons de 2 niveaux (jusqu’à 40 runs)STABILITÉ À BORD Jusqu’à 2 semaines

LIAISON® SARS-CoV-2 S1/S2 IgG 311450

LIAISON® SARS-CoV-2 IgM 311470

CONDITIONNEMENT 110 tests / intégral

1ER RESULTAT DISPONIBLE 35 minutes

CADENCE Jusqu’à 170 tests/heure Jusqu’à 84 tests/heure

STABILITÉ À BORD / STABILITÉ CALIBRATION Jusqu’à 2 semaines Jusqu’à 1 semaine

Absence d’interférence à la biotine Jusqu’à 3500 ng/ml

Références produits et descriptions – contrôles

FR-M

0870

0043

69 0

8/20

Références :1. Liu W, Liu L, Kou G, et al. Evaluation of Nucleocapsid and Spike Protein-Based Enzyme-Linked Immunosorbent Assays for

Detecting Antibodies against SARS-CoV-2. J Clin Microbiol. 2020;58(6):e00461-20. Published 2020 May 26. doi:10.1128/JCM.00461-20.

2. To KK, Tsang OT, Leung WS, et al. Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study. Lancet Infect Dis. 2020;20(5):565-574. doi:10.1016/S1473-3099(20)30196-1.

3. 3Long Q, Deng H, Chen J, et al. Antibody responses to SARS-CoV-2 In COVID-19 patients: the perspective application of serological tests in clinical practice. medRxiv. 2020. doi:https://doi.org/10.1101/2020.03.18.20038018.

4. Zhao J, Yuan Q, Wang H, et al. Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients of novel coronavirus disease 2019 [published online ahead of print, 2020 Mar 28]. Clin Infect Dis. 2020;ciaa344. doi:10.1093/cid/ciaa3444.

5. Nandini S., Sundararaj S. J.; Akihide R. Interpreting Diagnostic Tests for SARS-CoV-2 AuJAMA. Published online May 6, 2020.doi:10.1001/jama.2020.8259.

6. Derdeyn C., Moore P. et al. Development of Broadly Neutralizing Antibodies from Autologous Neutralizing Antibody Responses Curr Opin HIV AIDS. 2014 May; 9(3): 210-216. doi:10.1097/COH.0000000000000057.

7. Shang, W., Yang, Y.,Rao, Y. et al. The outbreak of SARS-CoV-2 pneumonia calls for viral vaccines. npj Vaccines 5, 18 (2020).https://doi.org710.1038/s41541-020-0170-0.

8. Wang C., Li W. et al. A human monoclonal antibody blocking SARS-CoV-2 infection. Nature communications (2020) 11:2251 | https://doi.org/10.1038/s41467-020-16256-y | www.nature.com/naturecommunications.

9. Ni, L., Ye, F., Cheng, M.-L. Detection of SARS-CoV-2-specific humoral and cellular immunity in COVID-19 convalescent individuals, et al. Immunity (2020) doi: https://doi.org/10.1016/j.immuni.202004.023.

Vous pouvez visiter notre site web à la rubrique COVID-19 : www.diasorin.com/covid19CE

LIAISON® est une marque déposée appartenant à DiaSorin

Test disponible uniquement sur le LIAISON® XLLa disponibilité du produit est assujettie à des réglementations localesLes tests LIAISON® SARS-CoV-2 S1/S2 IgG et LIAISON® SARS-CoV-2 IgM sont des dosages immunologiques par chimi-luminescence (CLIA) pour la détermination des anticorps IgG et IgM spécifiques dirigés contre le SARS-CoV-2 dans des échantillons de sérum ou plasma humains.Lire attentivement les instructions figurant sur l’étiquetage et/ou dans la notice d’utilisation.

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