Manuel de prélèvement - uclmontgodinne.be · MANUEL DE PRELEVEMENT Secteurs d'ORL, Gynécologie...

CHU UCL NAMUR

Manuel de prélèvement Laboratoire d’Anatomie Pathologique

Version 4

Ce document est la propriété du laboratoire et ne peut être reproduit en entier ou partiellement sans l’autorisation écrite du directeur du laboratoire.

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Mise en application V1 : 08/05/2013 Code fichier ANN-QUAL-017

Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 1 sur 38

Vérifié par : Caroline Fervaille

Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018

MANUEL DE PRELEVEMENT

Contenu OBJET .................................................................................................................................................................... 3 1.

DOMAINE D’APPLICATION .................................................................................................................................... 3 2.

DEFINITIONS – ABREVIATIONS ............................................................................................................................. 3 3.

LOGIGRAMME – CONTENU .................................................................................................................................. 3 4.

4.1. Renseignements administratifs: ................................................................................................................... 3

4.2. Formulaires de demandes d’analyse histologique et/ou cytologique: ........................................................ 7

4.3. Examen extemporané ................................................................................................................................... 8

4.4. Examen histologique .................................................................................................................................... 8

4.5. Examen cytologique ................................................................................................................................... 11

4.6. Analyses immunohistochimiques ............................................................................................................... 13

4.6.1. Facteurs pronostiques et prédictifs du cancer du sein ....................................................................... 13

4.6.2. Recherche immunohistochimique de la surexpression du récepteur HER2 dans le cancer

de l’estomac (et du bas-œsophage) ................................................................................................................... 15

4.6.3. Recherche immunohistochimique de la présence de l’EGFR dans les néoplasies pulmonaires ..... 16

4.6.4. Recherche immunohistochimique de ALK dans les néoplasies pulmonaires .................................. 17

4.6.5. Recherche immunohistochimique de ROS1 dans les néoplasies pulmonaires ................................. 18

4.6.6. Recherche immuno-histochimique du PD-L1 dans les néoplasies pulmonaires ................................ 19

4.6.7. Recherche immunohistochimique de la présence du récepteur c-Kit (CD117) ................................ 21

4.7. Analyses combinées biologie moléculaire et immunohistochimie ............................................................ 22

4.8. Analyses en biologie moléculaire ............................................................................................................... 23

4.8.1 Sous-traitance au Laboratoire d’Anatomie Pathologique des Cliniques Universitaires Saint-Luc à

Woluwé. 24

4.8.2 Sous-traitance au laboratoire de Microbiologie des Cliniques Universitaires Saint Luc à Woluwé ... 26

4.8.3 Sous-traitance au laboratoire de Microbiologie Clinique du Centre Hospitalier Universitaire de

Liège (Unilab Lg). ................................................................................................................................................ 27

4.8.4 Sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital Erasme. .................................. 28

4.8.5 Sous-traitance au laboratoire de l’IPG à Gosselies. ........................................................................... 35

4.9. Autopsies .................................................................................................................................................... 37

INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES ................................................................................................................ 38 5.

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ANNEXES ............................................................................................................................................................. 38 6.

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OBJET 1.

Le manuel de prélèvement contient toutes les informations relatives aux traitements des échantillons

primaires (prélèvements) ainsi qu’aux conditions de fixation et d’acheminement préconisées pour

garantir un déroulement optimal des analyses.

DOMAINE D’APPLICATION 2.

Ce manuel est un document externe mis à la disposition des clients du SAP dans le but de fournir les

informations précises concernant les processus pré-analytiques et ainsi d’obtenir les prélèvements dans

des conditions optimales.

DEFINITIONS – ABREVIATIONS 3.

SAP :

Service (laboratoire) d’Anatomie Pathologique.

Prélèvement :

Matériel humain confié au SAP pour réaliser une analyse anatomo-pathologique (macroscopie,

cytologie, histologie, immunohistochimie, immunofluorescence, biologie moléculaire).

EUS :

Echo-endoscopie trans-digestive

EBUS :

Echo-endoscopie trans-bronchique

LOGIGRAMME – CONTENU 4.

4.1. Renseignements administratifs:

Laboratoire d’Anatomie Pathologique et de Cytologie du CHU UCL NAMUR

Avenue du Docteur Thérasse, 1 5530 Yvoir Belgique Tél : +32 - 81.42.30.12. Fax : +32 - 81.42.30.16.

Heures d’ouverture : Le laboratoire est accessible en semaine de 8H00 à 18H.

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Un pathologiste est toujours accessible durant les heures ouvrables pour conseiller les prescripteurs quant aux modalités de prélèvements ou au choix d’analyse à effectuer mais également pour aider à interpréter le résultat des analyses. Le laboratoire est fermé le week-end et les jours fériés.

La réception des prélèvements se fait entre 8h et 16h30.

Localisation : Le service d’Anatomie Pathologique (flèche rouge) se trouve dans un bâtiment non contigu à la clinique.

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Numéros de téléphone utiles : Secrétariat : 081/42-30-12 Fax : 081/42-30-16 Pathologistes : Professeur Marie-Cécile Nollevaux (Chef de Service):

Service

d’Anatomie

Pathologique

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Secteurs d'ORL, Gynécologie et Urologie 081/42-30-11 [email protected] Docteur Saro Aghazarian Secteur de Dinant 081/42-30-84 [email protected] Professeur Monique Delos

Secteur de Gastro-Entérologie 081/42-30-10 [email protected] Docteur Caroline Fervaille : Secteurs de Dermatologie-chirurgie plastique, Cardio-vasculaire, Hématologie et Autopsies 081/42-30-14 [email protected] Docteur Claudia Stanciu-Pop : Secteurs de Cytologie, Sénologie et Pneumologie 081/42-30-34 [email protected]

Types de prélèvements pris en charge par le SAP : - cytologiques - histologiques :

biopsies

pièces opératoires - examens extemporanés - autopsies

mailto:081/42-30-14%20%20%[email protected]

mailto:[email protected]

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4.2. Formulaires de demandes d’analyse histologique et/ou cytologique:

Pour être accepté à l’encodage, le prélèvement doit être accompagné d’une demande d’analyse

(ANN-QUAL-015) qui doit comporter les informations suivantes :

1. Identification univoque du patient, à savoir :

a. Nom, prénom

b. Adresse

c. Date de naissance

d. NISS

2. Nom, Prénom, adresse et numéro INAMI du prescripteur

3. Type et origine du prélèvement

4. Tous les échantillons sont identifiés de manière univoque

5. Date de la prescription et signature du prescripteur

6. Renseignements cliniques et exposé du problème

7. Données utiles à l’exécution des prestations et à l’interprétation des résultats,

notamment :

a. La date et l’heure de prélèvement et l’heure de fixation. (Ces informations

permettent d’évaluer le temps de fixation, qui, pour certaines analyses, peut influencer la

nature des résultats.)

b. Le cas échéant, d’éventuelles difficultés lors de la réalisation du prélèvement / de

sa fixation, qui pourraient influencer le résultat de l’analyse

Le formulaire de demande d’analyse est disponible dans l’intranet et sur le site internet du CHU ;

il ne peut en aucun cas y être apporté une modification.

Le prélèvement lui-même est correctement identifié.

L’encodeur du SAP a la responsabilité de vérifier la concordance des informations présentes sur la

demande et le prélèvement (PR-QUAL-005). Toute discordance ou absence d’information conduit

à une procédure de gestion de prélèvement non-conforme (PR-QUAL-006).

Vous comprendrez aisément que certains prélèvements non-conformes aux indications reprises ci-dessus sont bloquants pour l’analyse alors que d’autres permettent l’analyse sous-réserve (ANN-QUAL-012 ; cette annexe est disponible dans l’intranet ainsi que sur le site internet du CHU). En cas de non-conformité bloquante, seule la correction des éléments manquants permettra la réalisation de l’analyse.

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Le compte-rendu anatomo-pathologique comportera un descriptif textuel exhaustif de toute non-conformité, afin d’en assurer la traçabilité.

4.3. Examen extemporané

L’objectif d’un examen extemporané est d’orienter le chirurgien au cours de son intervention afin qu’il puisse, en fonction du résultat de l’examen extemporané, adapter et éventuellement modifier le geste chirurgical prévu. La technique histologique de cet examen est basée sur une coupe en congélation réalisée à l’aide d’un cryostat. La coupe qui en résulte est de moins bonne qualité qu’une coupe histologique classique. Le diagnostic devra donc toujours être validé par la lecture du prélèvement après fixation et enrobage en paraffine. Une fois le prélèvement reçu (frais !), il faut compter entre 15 et 45 minutes pour que puisse être transmis un résultat (le délai dépend du nombre de prélèvements extemporanés à prendre en charge au même moment).

En pratique : - L’analyse est réalisée uniquement à partir de matériel frais ! Ne pas mettre de sérum

physiologique ni de liquide fixateur

- Acheminer le prélèvement le plus rapidement possible au laboratoire et mentionner sur le

bon de demande « EXTEMPO » et le numéro de téléphone de la salle opératoire.

- Le résultat est transmis par le pathologiste par téléphone dans les 45 minutes maximum

sauf si un nombre important de prélèvements à réaliser en extemporané parviennent

simultanément au laboratoire.

- Après fixation au formol et analyse histologique classique, le résultat de l’examen

extemporané sera intégré au compte rendu final et accessible après validation définitive.

4.4. Examen histologique

Les prélèvements biopsiques et les pièces opératoires relèvent d’une analyse histologique,

associées de façon plus ou moins extensive à une analyse macroscopique. Ces analyses

nécessitent une étape initiale de fixation, permettant de prévenir l’autolyse tissulaire. Seule une

fixation au formol permet la réalisation d’analyses en biologie moléculaire et de techniques

immuno-histochimiques validées.

Les prélèvements doivent être fixés au formol (10% tamponné – équivalent à formaldéhyde 4%).

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La durée de fixation, pour les biopsies, est de minimum 2 à 6h et de maximum 48h, dans un

volume de fixateur égal à au moins deux fois le volume du prélèvement ; le fixateur doit couvrir

complètement le prélèvement.

Le délai avant fixation (= temps d’ischémie) doit être le plus court possible et ne pas dépasser 1h.

La durée de fixation, pour les pièces opératoires dépend de la taille du prélèvement. En général,

elle est comprise entre 24 et 48h.

Le délai avant fixation (= temps d’ischémie) doit être le plus court possible et ne pas dépasser 1h.

CAS PARTICULIER : Les biopsies mammaires et pulmonaires.

Ces prélèvements font fréquemment l’objet d’analyses complémentaires en biologie moléculaire.

Afin de garantir la validité de ces analyses, les biopsies mammaires et pulmonaires doivent être

fixées MINIMUM 6h et MAXIMUM 48h.

En pratique :

- Du lundi au jeudi, les biopsies mammaires et pulmonaires, fixées avant 12h, entament le

jour même de leur réception par le laboratoire le cycle d’inclusion en paraffine. Si le prélèvement

a été fixé après 12h, il entamera le cycle d’inclusion en paraffine le lendemain soir ; le résultat

sera donc différé d’un jour.

- Le vendredi, le prélèvement doit impérativement être réceptionné par le SAP à 16h30 au

plus tard afin de pouvoir débuter le jour même le cycle d’inclusion en paraffine. Tout prélèvement

du vendredi, réceptionné seulement le lundi, fera l’objet d’une non-conformité quant à la durée

de fixation (sur-fixation) et les analyses en biologie moléculaire éventuellement réalisées dans un

second temps seront, soit, non-contributives, soit non validées en termes d’accréditation.

Les prélèvements urgents sont acheminés directement au SAP ; la notion d’urgence est

mentionnée sur la demande d’analyse et le médecin prescripteur contacte le pathologiste

référent du domaine.

Hors w-e et jours fériés, un résultat basé sur l’analyse histologique classique du prélèvement est

transmis par téléphone le lendemain de la réception du prélèvement (pour autant que celui-ci soit

réceptionné par le SAP à 16h30 au plus tard).

L’examen macroscopique et l’analyse microscopique font l’objet d’un compte-rendu édité dans le logiciel Diamic, logiciel propre au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le dossier médical du patient (Omnipro). Les médecins prescripteurs extérieurs au CHU peuvent recevoir les comptes-rendus anatomo-pathologiques de manière électronique. Pour ce faire, il est nécessaire de contacter le service informatique du CHU, afin d’obtenir un accès à ce service. La personne de contact est Monsieur Luc Toussaint.

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4.5. Examen cytologique

L’examen cytologique concerne les prélèvements qui se présentent sous forme liquide ou d’un

étalement. L’examen cytologique fera appel à diverses procédures techniques, spécifiques au

type d’échantillon reçu.

Il est particulièrement important de veiller à l’utilisation des fixateurs et contenants adéquats afin

de permettre une prise en charge optimale de l’échantillon.

Si celui-ci est volumineux (ex : liquide d’ascite), seule une partie du produit est analysée. Si

l’échantillon est peu abondant, tout le matériel est analysé.

a. « Frottis » cervico-vaginaux

Ces prélèvements sont en réalité des brossages mis en suspension (par agitation de la brossette)

par le gynécologue dans un milieu liquide de préservation : Preservcyt®. Les échantillons sont

ensuite traités selon la méthode ThinPrep®. Si une analyse en biologie moléculaire est nécessaire

(typage HPV), le SAP utilise l’échantillon contenu dans ce même flacon, dont une partie seulement

a été utilisée pour l’analyse cytologique initiale.

Les disposables (brossette, flacon de Preservcyt®) sont fournis par le SAP sur simple demande (Tél

Secrétariat : 081/423012).

La durée maximale de préservation dans ce milieu est de trois mois.

b. EBUS et EUS

Ces produits de ponction (et éventuellement l’aiguille qui a servi à réaliser le prélèvement) sont

placés dans les tubes fournis à cet effet (tubes coniques à capuchon bleu, renfermant du

Cytolyt®). Ces tubes sont fournis par le SAP sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).

c. Liquide pleural, péritonéal

Doit être confié frais au laboratoire, dès que le prélèvement est réalisé. Si le prélèvement est

réalisé hors jours ouvrables, il est préférable de fixer le liquide avec de l’éthanol à 50% (non fourni

par le SAP ; 1 volume d’échantillon pour 1 volume de fixateur, minimum 2 tubes). A défaut, au

minimum placer l’échantillon au frigo.

d. Ponctions de sein, ganglions, cavités intra-articulaires ou organes profonds

Ces prélèvements peuvent nous parvenir soit sous forme d’étalements sur lames, fixées à la

laque, soit sous forme liquide : l’échantillon est alors placé dans un tube à fond conique et

bouchon bleu, renfermant le milieu Preservcyt® ou Cytolyt®. Ce tube est fourni par le SAP et est

donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).

e. Brossages bronchiques, pancréato-biliaires, œsophagiens

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Après avoir détaché la brossette qui a été utilisée pour réaliser le prélèvement, celle-ci est agitée

dans le tube à fond conique et bouchon bleu contenant du Cytolyt®. Ce tube est fourni par le SAP

et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).

f. Urines

Le produit des lavages vésicaux est placé dans des flacons contenant de l’éthanol à 50% (un

volume d’alcool pour un volume d’urines). L’éthanol n’est pas fourni par le SAP. Le prélèvement

peut également (en jours ouvrables) être apporté, dès obtention, au laboratoire.

g. Liquide céphalo-rachidien (LCR)

Ces prélèvements doivent parvenir frais, le plus rapidement possible, au laboratoire. A défaut, au

minimum placer l’échantillon au frigo.

h. Lavage bronchique

Les lavages sont placés dans un flacon type biopsie (capuchon rouge) qui renferme du formol 4%

pH neutre.

i. Ponctions de thyroïde

Ces prélèvements peuvent nous parvenir soit sous forme d’étalements sur lames, fixés à la laque,

soit sous forme liquide : l’échantillon est alors placé dans un tube à fond conique et bouchon

bleu, renfermant le milieu Cytolyt®.

Ce milieu est fourni par le SAP et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat :

081/423012).

En pratique, 2 types de situation se présentent :

- soit nous recevons 2 lames étalées fixées à la laque et 1 tube de rinçage Cytolyt® (qui

contient éventuellement l’aiguille qui a servi à réaliser le prélèvement).

- soit nous recevons le produit de ponction injecté et directement rincé dans du Cytolyt®.

Les prélèvements urgents sont acheminés directement au SAP ; la notion d’urgence est

mentionnée sur la demande d’analyse et le médecin prescripteur contacte le pathologiste

référent du domaine.

Hors w-e et jours fériés, un résultat basé sur l’analyse cytologique classique du prélèvement est

transmis par téléphone le jour même ou le lendemain de la réception du prélèvement (pour

autant que celui-ci soit réceptionné par le SAP à 16h au plus tard), selon la procédure technique à

mettre en œuvre pour le type d’échantillon reçu.

L’examen cytologique fait l’objet d’un compte-rendu édité dans le logiciel Diamic, logiciel propre

au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le dossier médical du patient

(Omnipro).

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Les médecins prescripteurs extérieurs au CHU peuvent recevoir le compte-rendu cytologique de

manière électronique. Pour ce faire, il est nécessaire de contacter le service informatique du CHU,

afin d’obtenir un accès à ce service. La personne de contact est Madame Sylvie Demoulin.

4.6. Analyses immunohistochimiques

La plupart des analyses immunohistochimiques sont du ressort exclusif du pathologiste qui les prescrit en fonction des nécessités diagnostiques. Certaines analyses néanmoins doivent absolument être demandées par le médecin prescripteur de l’analyse: la recherche d’expression des récepteurs aux œstrogènes et à la progestérone dans le cadre du cancer du sein, la recherche de sur-expression du récepteur HER2, dans le cadre du cancer du sein et du cancer du bas œsophage ou de l’estomac, la recherche d’expression du récepteur EGFR, dans le cadre du cancer pulmonaire non à petites cellules, la recherche d’expression de ALK dans le cancer pulmonaire non à petites cellules non squameux, la recherche d’expression de ROS-1 dans le cancer pulmonaire non à petites cellules non squameux, la recherche du récepteur c-Kit, dans le cadre des tumeurs stromales du tractus gastro-intestinal (GIST).

4.6.1. Facteurs pronostiques et prédictifs du cancer du sein

L’expression des récepteurs hormonaux (récepteurs des œstrogènes et récepteur de la progestérone) sont des facteurs prédictifs quant à la réponse au traitement anti-hormonal (par ex, le tamoxifène). Ils sont recherchés systématiquement pour tout nouveau diagnostic de cancer mammaire ou après traitement adjuvant, afin de vérifier une éventuelle modification de leur statut par le traitement. La sur-expression du récepteur HER2 est non seulement un facteur pronostique mais il comporte également un caractère prédictif puisqu’il est directement corrélé à la réponse au traitement par thérapie ciblée anti-HER2 (Trastuzumab). Une sur-expression détectée en immunohistochimie doit être validée par la recherche d’une amplification du gène par ISH. Outre les éléments mentionnés au point 4.2, le prescripteur mentionne explicitement sur la demande d’analyse qu’il souhaite, si l’échantillon aboutit au diagnostic de néoplasie mammaire, que soient recherchés les facteurs pronostiques/prédictifs : - Récepteurs hormonaux ER et PR - Sur-expression du récepteur HER

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En pratique :

L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures et le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande.

Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat.

Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement.

Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.

Pathologistes référents : Professeur M-C. Nollevaux, 081/42 30 11 Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34

4.6.2. Recherche immunohistochimique de la surexpression du récepteur HER2 dans

le cancer de l’estomac (et du bas-œsophage)

La sur-expression du récepteur HER2 est non seulement un facteur pronostique mais il comporte également un caractère prédictif puisqu’il est directement corrélé à la réponse au traitement par thérapie ciblée anti-HER2 (Trastuzumab). Une sur-expression détectée en immunohistochimie doit être validée par la recherche d’une amplification du gène par ISH. Outre les éléments mentionnés au point 4.2, le prescripteur mentionne explicitement sur la demande d’analyse qu’il souhaite, que soit recherché le statut HER2. En pratique :

L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures et le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande.



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Pathologistes référents : Professeur M. Delos, 081/42 30 10

Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14

4.6.3. Recherche immunohistochimique de la présence de l’EGFR dans les néoplasies

pulmonaires

Dans le cadre du carcinome pulmonaire non à petites cellules est recherchée l’expression de l’EGFR, un récepteur transmembranaire à activité tyrosine kinase, dont l’activation par le ligand, un facteur de croissance (de type EGF (Epidermal Growth Factor)) promeut la croissance tumorale. Quoiqu’il n’y ait pas d’évidence que l’expression immunohistochimique de l’EGFR comporte un caractère prédictif, en Belgique, l’accès au remboursement de la thérapie ciblée par Erlotinib (Tarceva®), en deuxième ligne, demande une positivité d’au moins 10% des cellules tumorales en immunohistochimie.

Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de mutation –

cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire proposés.

En pratique :

L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4%, pH neutre.

La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h.




Pathologistes référents : Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34

Professeur M. Delos, 081/42 30 10

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4.6.4. Recherche immunohistochimique de ALK dans les néoplasies pulmonaires

Des réarrangements du gène ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase) ont été décrits chez 3 à 5% des patients porteurs d’un carcinome pulmonaire non à petites cellules (surtout adénocarcinomes). Ils sont mutuellement exclusifs avec les mutations EGFR et KRAS et sont mis en évidence par FISH. L’analyse FISH conditionne le remboursement d’une thérapie ciblée inhibant la Kinase ALK (ex. crizotinib). L’immunohistochime ALK est considérée comme une méthode de screening pour sélectionner les patients au testing FISH. Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de réarrangement – cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire proposés. En pratique :

L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4%, pH neutre.





Pathologistes référents : Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10

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4.6.5. Recherche immunohistochimique de ROS1 dans les néoplasies pulmonaires

Des réarrangements du gène ROS1 ont été décrits chez 1 à 3% des patients porteurs d’un cancer

pulmonaire non à petites cellules (surtout adénocarcinomes).

Ils sont mutuellement exclusifs avec les mutations d’EGFR et les réarrangements de ALK.

Un réarrangement de ROS1 serait associé à une réponse thérapeutique au crizotinib.

L’immunohistochimie est à ce jour considérée comme un outil diagnostique potentiel permettant

d’évaluer la présence de la protéine de fusion ROS1.

Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de

réarrangement – cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement

mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit

en cochant la case adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire

proposés.

Cette analyse est confiée en sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital

Erasme.

Ci-dessous, les prescriptions de ce laboratoire concernant l’analyse sus-mentionnée, issues du

manuel de prélèvements de l’hôpital Erasme (version 17 du 16 mai 2017)

- la demande d’analyse de « biologie moléculaire et immunohistochimie » doit être complétée ;

o ROS1 expression (IHC), suivi par FISH si positif ;

- l’identification et le nombre de blocs doivent être mentionnés sur la demande ;

-envoi par courrier postal possible ; Aspects pratiques : Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Si les blocs sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole anatomo-clinique complet doit être associé. Le médecin prescripteur vérifiant la fixation adéquate du prélèvement. Les tests sont réalisés au minimum 1 fois par semaine et le délai de réponse est de 10 jours. Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un compte-rendu additionnel.

Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Personnes de contact : Dr N. D’haene (02 555 53 91) [email protected] Melle A. Verrellen (02 555 33 35) [email protected]

Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR :



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Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10

4.6.6. Recherche immuno-histochimique du PD-L1 dans les néoplasies pulmonaires

PD-L1 est une protéine transmembranaire exprimée à la surface de certains macrophages ; elle est

induite par des cytokines inflammatoires dans divers tissus. Elle se lie au récepteur PD-1, exprimé à la

surface de cellules immunitaires (lymphocytes T...).

En situation normale, les cellules utilisent l’interaction PD-1/PD-L1 comme mécanisme de protection

contre des réactions auto-immunes en inhibant l’action des lymphocytesT.

Différents types de cancers surexpriment PD-L1 (mélanome, carcinome rénal, carcinome pulmonaire

non à petites cellules...) ; ils échappent ainsi à la réponse immunitaire, inhibant l’activation des

lymphocytes.

Dans ce cadre, l’immunothérapie devient une arme contre le cancer pulmonaire non à petites

cellules. Des anticorps monoclonaux (par ex. pembrolizumab, nivolumab...) bloquent l’interaction

PD-1/PD-L1, et permettent aux lymphocytes T d’être actifs, entrainant une réponse immunitaire

contre les cellules tumorales.

L’immunothérapie anti-PD-1 pembrolizumab a prouvé son efficacité dans le traitement du cancer

pulmonaire non à petites cellules (cancer ESMO 2016), dès la 1ère ligne de traitement. L’expression

de PD-L1 dans plus de 50% des cellules tumorales est associée à une meilleure réponse au

pembrolizumab.

Dès lors, la détection de PD-L1 au niveau des cellules tumorales est un biomarqueur pour la réponse

à l’immunothérapie anti PD-1.

Cette demande d’analyse immunohistochimique doit être explicitement mentionnée par le

prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre ou en cochant la case

adéquate.

En pratique :

L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4% pH neutre.





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Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10

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4.6.7. Recherche immunohistochimique de la présence du récepteur c-Kit (CD117)

La recherche de l’expression du récepteur tyrosinas-kinase c-Kit, en immunohistochimie, est un élément diagnostique positif des tumeurs stromales du tractus gastro-intestinal (GIST), tumeurs mésenchymateuses caractérisées par des mutations activatrices du proto-oncogène c-Kit.

Son expression dans le cadre d’un GIST comporte également un caractère prédictif puisque corrélé à une probabilité de réponse au traitement par thérapie ciblée anti-c-Kit (Imatinib - Glivec ). Il est à noter que certains GIST présentent d’autres types de mutations activatrices, notamment en rapport avec le gène codant pour le récepteur alpha du facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGFRA). En cas de suspicion clinique de tumeur stromale de type GIST, il est demandé au prescripteur de mentionner explicitement sur la demande qu’il souhaite une recherche de l’expression du récepteur c-Kit. En pratique :

L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4% pH neutre.





Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR: Professeur M. Delos, 081/42 30 10


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4.7. Analyses combinées biologie moléculaire et immunohistochimie

La recherche du phénotype MSI dans le cancer colo-rectal

La genèse de certains cancers colo-rectaux est liée à une instabilité génétique induite par la défaillance du système de réparation des mésappariements de l’ADN (système MMR ou mysmatch repair) ; les cancers présentant un tel phénotype sont dits MSI (microsatellite instability). 15 à 20 % des cancers colorectaux sporadiques et la quasi-totalité des cancers colorectaux survenant dans le contexte du syndrome de Lynch sont concernés. La connaissance d’un phénotype MSI est prédictive : à stade égal, le pronostic est meilleur que dans le phénotype MSS (microsatellite stability). Elle est aussi thérapeutique, orientant le choix des traitements adjuvants. Les guidelines ESMO recommandent de tester tous les cancers colo-rectaux. La détermination du statut MSI repose sur l’analyse de l’ADN tumoral et sur des colorations immunohistochimiques. Ces recherches doivent être explicitement mentionnées par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests de biologie moléculaire proposés. Ces recherches sont confiées en sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital

Erasme.

Ci-dessous, les prescriptions de ce laboratoire, issues du manuel de prélèvements de l’hôpital Erasme

(version 17 du 16 mai 2017)

- la demande d’analyse de « biologie moléculaire et immunohistochimie » doit être complétée : o Instabilité microsatellitaire (MSI) ∞ IHC (expression MLH1, PMS2, MSH2, MSH6) ∞ PCR MSI (analyse accréditée BELAC n°387-MED) ∞ MLH1 méthylation (si MSI positif) (analyse accréditée BELAC n°387-MED) - l’identification et le nombre de blocs doivent être mentionnés sur la demande - toutes les informations demandées sur l’échantillon sont primordiales afin de garantir la qualité optimale des résultats -envoi par courrier postal possible ; -aspects pratiques : Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Si le fixateur ou le temps de fixation n’est pas précisé, l’analyse sera effectuée mais le prélèvement sera considéré comme non conforme.

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Si les blocs et la lame HE de référence sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole anatomo-clinique complet doit être associé. Le matériel confié est renvoyé après analyse. Le résultat fera l’objet d’un compte-rendu additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Le test PCR MSI est réalisé tous les 21 jours, délai de réponse max 1 mois Le test MLH1 méthylation est réalisé tous les 12 jours, délai de réponse max 21 jours

Personnes de contact : Pr P. Demetter (02 555 33 35) [email protected] Pr I. Salmon (02 555 31 15) [email protected] Dr N. D’haene (02 555 53 91) [email protected]

Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14 Professeur M. Delos, 081/42 30 10

4.8. Analyses en biologie moléculaire

Les analyses de biologie moléculaire sont des analyses spécifiques, confiées en sous-traitance aux

Centres qui en ont l’accréditation, la maîtrise, et avec le temps, l’expertise.

Elles sont généralement explicitement demandées par le prescripteur sur le formulaire de demande

d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests de biologie

moléculaire proposés.

Le diagnostic de certaines néoplasies (pulmonaires, coliques, mélanomateuses, hématologiques, de tissus mous…) implique le recours à la pathologie moléculaire afin d’évaluer l’éventuelle présence de mutations spécifiques qui ont un impact pronostique et/ou prédictif pour le patient qui en est porteur. La mise au point anatomo-pathologique de certaines lésions du col utérin demande le recours à la biologie moléculaire afin de préciser l’éventuelle présence d’un virus HPV à haut risque. En effet, une infection persistante par un HPV à haut risque entraîne, chez 5% des personnes qui en sont porteuses, le développement d’un carcinome épidermoïde.




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4.8.1 Sous-traitance au Laboratoire d’Anatomie Pathologique des Cliniques Universitaires Saint-Luc à

Woluwé.

LA RECHERCHE D’HPV (accréditation BELAC ISO 15189 –2012 certificat n°369-MED)

HPV à partir de prélèvements de cytologie cervico-vaginale en milieu liquide o (Preservcyt®). Le flacon de Preservcyt® contenant le matériel résiduel après

réalisation de l’analyse cytologique initiale est confié au laboratoire sous-traitant,

accompagné d’une demande spécifique.

o La durée maximale de préservation dans ce milieu est de trois mois.

o La technique utilisée est une PCR de type Real Time High Risk HPV de Abbott o Le délai de réponse (TAT – jours ouvrables) est de 15 jours.

NB : La réponse mentionne la présence ou l’absence d’un HPV à haut potentiel oncogène,

et dans ce cas de figure, précise s’il s’agit d’un sous-type 16 ou 18.

L’éventuelle présence d’un HPV à faible risque oncogène n’est pas recherchée.

Le résultat fait l’objet d’un compte-rendu additionnel au CHU, avec mention d’une

recommandation.

Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : Professeur M-C. Nollevaux, 081/42 30 11 Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34

HPV à partir de prélèvements d’histologie

o Le bloc en paraffine à analyser est accompagné d’une lame colorée à l’hémalun-

éosine.

o La technique utilisée consiste en une extraction, PCR et analyse par Genescan,

selon une méthode Home made.

o Le délai de réponse (TAT – jours ouvrables) est de 25 jours.

NB : La réponse mentionne la présence et le type d’HPV, parmi une sélection de sous-types

d’HPV à haut et faible potentiel oncogène, notamment les sous-types 6 et 11.

Le résultat fait l’objet d’un compte-rendu additionnel au CHU.

Pathologiste référent au CHU UCL NAMUR : Professeur M-C. Nollevaux, 081/42 30 11

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LA RECHERCHE D’AMPLIFICATION DU GENE HER2 (accréditation BELAC ISO 15189 – 2012 certificat n°369-MED) L’amplification du gène HER2/Neu est associée à un moins bon pronostic pour les patients atteints d’un carcinome mammaire ou gastrique (+ bas œsophage). La présence de cette amplification est associée à une réponse thérapeutique à un anti HER2/Neu (Trastuzumab).

S’effectue à partir de blocs en paraffine

Les lames d’immunohistochimie déterminant le score de la protéine Her-2/Neu doivent être envoyées en même temps que le bloc.

La technique correspond à la méthode Silver in situ hybridation Automate Benchmark. Le délai de réponse (TAT- jours ouvrables) est de 10 jours. Le résultat fait l’objet d’un compte-rendu additionnel au CHU. Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : Pour le sein : Professeur M-C. Nollevaux, 081/42 30 11 Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Pour l’œsophage et l’estomac : Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14 Professeur M. Delos, 081/42 30 10

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4.8.2 Sous-traitance au laboratoire de Microbiologie des Cliniques Universitaires Saint Luc à Woluwé

RECHERCHE par PCR des Mycobactéries atypiques et tuberculosis et des Bartonella

Dans le cadre de la mise en évidence en histologie de pathologies granulomateuses nécrosantes, et

en fonction du tableau clinique, il est demandé de rechercher la présence de mycobactéries ou de

bartonella (griffes du chat).

L’analyse se fait à partir du bloc de paraffine.

L’envoi est adressé au Docteur Emmanuel ANDRE au Laboratoire de Microbiologie des Cliniques

Universitaires Saint Luc, Tour Rosalind Franklin-2sud, avenue Hippocrate 10 à 1200 Bruxelles.

Il comporte :

- une lettre type de demande

- un tableau à remplir reprenant les nom et prénom du patient, le nombre de blocs confiés, le type

d’analyse souhaitée, le nom du pathologiste référent au CHU, le nom du médecin prescripteur et la

date de l’envoi

- dans le bas du tableau il est demandé de confirmer la réception du matériel au secrétariat

d’anatomie pathologique du CHU

- une photocopie de la demande d’analyse qui reprend les données administratives du patient,

dont le NISS

Le délai de réponse est de 2 semaines.

Le matériel confié est renvoyé après analyse.

Le résultat fait l’objet d’un compte rendu additionnel.

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4.8.3 Sous-traitance au laboratoire de Microbiologie Clinique du Centre Hospitalier Universitaire de

Liège (Unilab Lg).

RECHERCHE par PCR d’ADN d’Echinococcus

Dans le cadre d’une suspicion d’échinococcose (hépatique), le bloc de paraffine est transmis au

Laboratoire de Microbiologie Clinique du CHU de Liège, Domaine Universitaire du Sart Tilman – B35 –

4000 Liège.

L’envoi comporte :

- une lettre type de demande

- une demande de confirmation de la réception du matériel au secrétariat d’anatomie pathologique

du CHU

- une photocopie de la demande d’analyse qui reprend les données administratives du patient,

dont le NISS

Le délai de réponse est de 10 jours à 2 semaines


Le résultat fait l’objet d’un compte-rendu additionnel.

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4.8.4 Sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital Erasme.

Aspects pratiques généraux

Une demande d’analyse de biologie moléculaire doit être remplie par le prescripteur. Cette demande

peut être envoyée par courrier interne, postal ou par email à l’adresse

[email protected]

Remarque : Toutes les informations demandées sur l’échantillon sont primordiales afin de garantir la qualité

optimale des résultats.

Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ou

« cell block » ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre.

La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures.

La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande.

Si le fixateur ou le temps de fixation n’est pas précisé, l’analyse sera effectuée mais le

prélèvement sera considéré comme non-conforme.

Pour les analyses FISH/CISH les prélèvements fixés avec fixateur autre que le formol ou décalcifiés

ne seront pas acceptés.

Pas de conditionnement particulier pour l’envoi des blocs (et de la lame HE).

Joindre le protocole anatomo-clinique complet.


Le résultat fera l’objet d’un compte-rendu additionnel.

Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.

Récapitulatif des critères de non-conformité selon manuel des échantillons primaires Erasme

(version 17 du 16 mai 2017)


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Dans le cadre des cancers pulmonaires

LUNG NGS Panel (22 gènes dont l’EGFR) (accréditation BELAC n°387-MED)

(AKT1, ALK, BRAF, CTNNB1, DDR2,EGFR, ERBB4, FBXW7, FGFR1, FGFR2, FGFR3, KRAS, MAP2K1, MET,

NOTCH1, NRAS, PIK3CA, PTEN, SMAD4, STK11, TP53)

La technique de NGS (next generation sequencing) permet d’optimaliser la détection des altérations

génétiques au sein des tumeurs ; à partir de blocs de paraffine et d’échantillons tumoraux de petite

taille (matériel biopsique ou cytologique), des mutations dans des gènes impliqués dans la

carcinogenèse ou des réarrangements peuvent être étudiés.

Par exemple, des mutations activatrices du domaine tyrosine Kinase de l’EGFR situées dans les exons

18 à 21 ont été mises en évidence chez environs 10% des patients atteints de cancer du poumon non

à petite cellules. Les patients porteurs de ces mutations présentent une meilleure réponse aux

inhibiteurs de tyrosine kinase de l’EGFR (EGFR-TKI), ex. gefitinib. D’autres mutations,

particulièrement celles situées dans l’exon 20 sont quant à elles associées à une résistance aux EGFR-

TKI.

Analyse réalisée une fois par semaine ; délai de réponse maximum 15 jours.

Personnes de contact à Erasme :

Dr N. D’Haene (02 555 53 91) [email protected]



Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34



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REARRANGEMENT de ALK par FISH

Les réarrangements du gène ALK (anaplastic lymphoma kinase) sont des altérations génétiques

observées dans différents types de cancer dont les NSCLC. La présence d’un tel réarrangement est

associée à une réponse thérapeutique par ex. au crizotinib, un inhibiteur de ALK.

Test par Fish (fluorescence in situ hybridation) réalisé une fois par semaine ; délai de réponse maximum 15 jours. Personnes de contact à Erasme : Pr I. Salmon (02 555 31 15) [email protected] Dr N. D’haene (02 555 53 91) [email protected]

Dr M. Remmelinck (02 555 31 16) [email protected]


Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10

REARRANGEMENT de ROS-1 par FISH Les réarrangements du gène ROS1 sont des altérations génétiques observées dans différents types de cancer dont les NSCLC. La présence d’un tel réarrangement serait associée à une réponse thérapeutique au crizotinib. Test par Fish (fluorescence in situ hybridation) réalisé une fois par semaine ; délai de réponse maximum 15 jours. Personnes de contact à Erasme : Pr I. Salmon (02 555 31 15) [email protected] Dr N. D’haene (02 555 53 91) [email protected]

Dr M. Remmelinck (02 555 31 16) [email protected]



Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34








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Dans le cadre des cancers colo-rectaux

COLON NGS Panel (22 gènes dont –RAS et BRAF) (accréditation BELAC n°387-MED)

(AKT1, ALK, BRAF, CTNNB1, DDR2,EGFR, ERBB4, FBXW7, FGFR1, FGFR2, FGFR3, KRAS, MAP2K1,

MET, NOTCH1, NRAS, PIK3CA, PTEN, SMAD4, STK11, TP53)

La technique de NGS (next generation sequencing) permet d’optimaliser la détection des altérations

génétiques au sein des tumeurs ; à partir de blocs de paraffine et d’échantillons tumoraux de petite

taille, des mutations dans des gènes impliqués dans la carcinogenèse ou des réarrangements

peuvent être étudiés.

Par exemple, la présence de mutations du gène –RAS est liée à la résistance au traitement à base

d’inhibiteurs anti-EGFR (panitunumab).

La présence de la mutation BRAFV600E est exclusive de la mutation –RAS ; elle confère à la tumeur un

mauvais pronostic. Dans ce cadre, les guidelines et directives ESMO... recommandent de tester tous

les cancers colo-rectaux.

Analyse réalisée une fois par semaine ; délai de réponse maximum 15 jours.




Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14 Professeur M. Delos, 081/42 30 10


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Dans le cadre des GIST

Le Cancer panel (50 gènes dont KIT, PDGFRA et BRAF) (accréditation BELAC n°387-MED)

(ABL1, AKT1, ALK, APC, ATM, BRAF, CDH1, CDKN2A, CSF1R, CTNNB1, EGFR, ERBB2, ERBB4, EZH2,

FBXW7, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FLT3, GNA11, GNAQ, GNAS, HNF1A, HRAS, IDH1, IDH2, JAK2, JAK3,

KDR, KIT, KRAS, MET, MLH1, MPL, NOTCH1, NPM1, NRAS, PDGFRA, PIK3CA, PTEN, PTPN11, RB1, RET,

SMAD4, SMARCB1, SMO, SRC, STK11, TP53, VHL)

La recherche du statut mutationnel est indispensable à la prise de décision concernant la prescription

d’un traitement adjuvant. La présence d’une mutation D842V du PDGFRA rend ce génotype

insensible à la prise d’imatinib. Les patients ayant une mutation de l’exon 11 de KIT sont les plus à

même de tirer profit de ce traitement. En cas de mutation de l’exon 9, la dose est adaptée.

Analyse réalisée tous les 15 jours ; délai de réponse maximum 18 jours.








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Dans le cadre du mélanome

Le Cancer panel (50 gènes dont BRAF, NRAS et KIT) (accréditation BELAC n°387-MED)

(ABL1, AKT1, ALK, APC, ATM, BRAF, CDH1, CDKN2A, CSF1R, CTNNB1, EGFR, ERBB2, ERBB4, EZH2,

FBXW7, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FLT3, GNA11, GNAQ, GNAS, HNF1A, HRAS, IDH1, IDH2, JAK2, JAK3,

KDR, KIT, KRAS, MET, MLH1, MPL, NOTCH1, NPM1, NRAS, PDGFRA, PIK3CA, PTEN, PTPN11, RB1, RET,

SMAD4, SMARCB1, SMO, SRC, STK11, TP53, VHL)

40 à 50% des mélanomes présentent une mutation du gène BRAF, dont 90% correspondent à une

mutation du codon 600. Les patients porteurs d’un mélanome non résécable ou métastatique et qui

présentent une mutation de BRAF sont susceptibles de bénéficier d’une thérapie ciblée (ex.

vemurafenib).

Analyse réalisée tous les 15 jours ; délai de réponse maximum 18 jours




Pathologiste référent au CHU UCL NAMUR :



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4.8.5 Sous-traitance au laboratoire de l’IPG à Gosselies.

Aspects pratiques généraux. Les analyses s’effectuent à partir de blocs en paraffine. Le CHU confie une lame HE et le bloc de paraffine (renvoyés après analyse), accompagnés d’une demande d’analyse bien complétée et d’une copie du compte-rendu initial. Remarques globales : Les prélèvements doivent être fixés dans du formol tamponné, pour une durée comprise idéalement entre 6 et 48h. Les prélèvements ne peuvent être teintés à l’éosine avant leur mise en cassette sous peine d’un risque majeur de non-contributivité de l’analyse à cause de l’autofluorescence du prélèvement. Les prélèvements ne peuvent avoir subi un passage dans du décalcifiant. Le résultat fait l’objet d’un compte-rendu additionnel au CHU. Informations disponibles dans les secrétariats respectifs : -secrétariat de biologie moléculaire et cellulaire : tél : 071 447 196 -secrétariat de génétique clinique : tél : 071 447 181 -secrétariat d’anatomie pathologique : tél : 071 447 113

Les recherches dans les néoplasies hématologiques.

Dans le cadre du diagnostic d’une hémopathie, il est parfois nécessaire de recourir à la recherche de mise en évidence d’un réarrangement monoclonal du gène du récepteur T (« lymphomes T ») ou d’un réarrangement monoclonal des gènes des Immunoglobulines (« lymphomes B »). D’autres recherches sont indispensables dans le cadre de lymphomes précis (lymphome à cellules du manteau, folliculaire, B diffus à grandes cellules…). Un catalogue des analyses IPG est disponible, renseignant pour chacune d’entre-elles : - la technique (FISH ou biologie moléculaire) - le délai de réponse (TAT- jours ouvrables) Exemples : clonalité T, clonalité B, t(8q24)(MYC), t(11 ;14)(CCND1-IGH), t(18q21)(BCL2), t(3q27)(BCL6), t (11;18)(MALT), … Le résultat fait l’objet d’un compte-rendu additionnel au CHU. Pathologiste référent au CHU UCL NAMUR: Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14

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La recherche d’une amplification de MDM2

Elle est présente dans les tumeurs lipomateuses atypiques et les liposarcomes bien différenciés et absente dans les lipomes. Analyse par FISH. Le délai de réponse (TAT- jours ouvrables) est de 10 jours Le résultat fait l’objet d’un compte-rendu additionnel au CHU. Pathologiste référent au CHU UCL NAMUR: Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14

La recherche d’EBV (EBER)

L’expression du virus EBV est potentiellement recherchée dans des lymphomes, ou des pathologies non hématologiques (ex. cancers sphère ORL...) Analyse par FISH Le délai technique est de 2 à 5 jours. Le résultat fait l’objet d’un compte-rendu additionnel au CHU. Pathologiste référent au CHU UCL NAMUR: Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14

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4.9. Autopsies

Si une autopsie est souhaitée, il faut :

1. Remplir une demande d’autopsie à transmettre directement au préposé à la morgue

(081/423015) lorsqu’il vient chercher le patient décédé. La demande spécifique est disponible sur

l’intranet et le site internet de l’hôpital, dans la rubrique Anatomie Pathologique.

2. Si le décès a lieu la nuit ou le we, le souhait de demande d’autopsie est transmis à l’accueil de

l’hôpital (081/422111) qui le transmettra au préposé à la morgue de garde à ce moment.

3. Si le décès a lieu en jours ouvrables, contacter le préposé de la morgue (Monsieur Vincent Battel

ou Monsieur Philippe Mattot au 081/423015) et le pathologiste référent (Docteur Caroline Fervaille,

081/423014).

Les autopsies sont effectuées le matin à partir de 8h30 du lundi au vendredi. Il faut prévoir un délai

de 4 heures par autopsie avant que la famille puisse revoir le défunt. Si le médecin prescripteur le

souhaite, il peut assister à la réalisation de l’autopsie et l’analyse macroscopique qui y est liée.

L’analyse microscopique des prélèvements a lieu après fixation.

L’examen macroscopique et l’analyse microscopique font l’objet d’un compte-rendu édité dans le

logiciel Diamic, logiciel propre au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le

dossier médical du patient (Omnipro).

Le prélèvement du cerveau n’est réalisé que sur demande explicite, à mentionner sur le formulaire

de demande d’autopsie.

Le médecin prescripteur doit s’assurer du fait qu’il n’y a pas d’opposition à la réalisation de l’autopsie par le

patient ou de la part de sa famille.

En cas d’opposition en effet, le SAP ne pourra pas procéder à la réalisation de l’autopsie, en vertu du code de

déontologie de l’Ordre des Médecins (Art. 133 – 1er janvier 1975) qui stipule explicitement que « sauf

réquisition ou disposition légales particulières, une autopsie ne peut être pratiquée que s’il n’y a pas eu

opposition explicite ou implicite du patient ou opposition de la part des proches.».

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D’autre part, seules les autopsies médicales peuvent être réalisées par les pathologistes ; il doit être

certifié, par l’intermédiaire de la demande d’autopsie, qu’il n’y a aucune implication médico-légale

dans le décès du patient.

En cas de mort violente ou de suspicion d’implication médico-légale, il y a lieu d’alerter la Direction

du CHU et la police d’Yvoir.

En cas de suspicion d’agent infectieux particulier (ex : prion), l’autopsie ne peut être réalisée au CHU.

Une infrastructure particulière est en effet nécessaire (centre de référence à Anvers).

Pour toute information complémentaire, le Docteur Caroline Fervaille, pathologiste référent, est

joignable au 081/423014.

INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES 5.Sans objet

ANNEXES 6.A.R. du 5 décembre 2011 relatif à l’agrément des laboratoires d’anatomie pathologique :

ANN-QUAL-014

Demande d’analyse histologique ou cytologique : ANN-QUAL-015

Demande d’autopsie : ANN-QUAL-016

Procédure de contrôle à l’enregistrement des prélèvements : PRO-QUAL-005

Liste des non-conformités : ANN-QUAL-012

Date Version Historique des modifications du document

16/02/2016 1 Modification du staff des pathologistes

04/01/2017 2 Mise à jours point 4.6, 4.7 et ajout point 4.8 en fonction des nouvelles analyses sous traitées

03/01/2018 3 Ajout analyses points 4.6.6/ 4.6.7/4.8.3/4.8.4 + modification milieu de transport pour examen cytologique

Manuel de prélèvement - uclmontgodinne.be · MANUEL DE PRELEVEMENT Secteurs d'ORL, Gynécologie...

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