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Numération des réticulocytes

Par : S/Abdessemed

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But :La numération des réticulocytes

permet d’apprécier l’activité érythropoiétique de la moelle

Le réticulocyte est un globule rouge sans noyau caractérisé par la présence d’une substance granulo-filamenteuse dans le cytoplasme ( restes d’acide ribonucléique),

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Principe:Il s’agit de déterminer le nombre de

réticulocytes présents dans le sang circulant à l’aide de colorants vitaux qui précipitent les ribosomes et font apparaitre la substance granulo-filamenteuse alors visible au microscope

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Matériel et Réactifs :Sang veineux recueilli sur EDTA ou

prélevement cutané avec capillaires héparinés

Colorants: Bleu de méthylène nouveau:Bleu de

méthylène nouveau, oxalate de potassium et eau distillée,

Bleu de crésyle brillant: Bleu de crésyle brillant, chlorure de sodiumet eau distillée

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• Tubes à hémolyse • Bain-marie ou étuve à 37°C• Lames • Microscope

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Technique:• Prélever 3 à 5 gouttes de sang et les

placer dans un tube à hémolyse • Ajouter une quantité égale de

colorant, mélanger par rotation • Incuber au Bain-marie ou à l’étuve à

37°C pendant 15 minutes• Aprés l’incubation, mélanger pour

remettre les GR en suspension

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• Déposer une goutte du mélange sur chacune des lames et préparer quelques frottis par la technique habituelle en faisant des étalements minces

• Les frottis sont examinés sans avoir été fixés ou contre colorés,

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Numération: La numération se fait à l’objectif à

immersion (x100) Un oculaire avec un diaphragme

réglable aide à compter les globules Les réticulocytes sont colorés en bleu

et on voit dans leur cytoplasmes la substance granulo-filamenteuse colorée, soit en amas, en bandes ou en granules,

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Évolution cytologique durant 24 à 48 heures aveccharge progressive en hémoglobinedisparition des restes ribosomaux

Réticulocytes

Hématie

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compter les réticulocytes présents par rapport à 1000 ou 3000 GR et établir le pourcentage selon les nombres comptés

exemple, si 50 réticulocytes ont été observés pour 3000 globules rouges:

50 x 100 = 1,6% 3000

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Causes d’erreur:• Les erreurs peuvent provenir d’une

mauvaise préparation du colorant, d’un mélange inadéquat du sang et du colorant avant la confection des frottis, d’une incubation prolongée, de la présence sur le frottis de précipités de colorant ou de lames malpropres,

Attention aux artéfacts

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• NB : habituellement, on ajoute la meme quantité de sang que de colorant, cependant, pour obtenir une coloration optimale, on devrait ajouter un plus grand volume de sang lorsque le taux d’hématocrite du malade est bas (anémie) et, par contre, une plus petite quantité de sang lorsque l’hématocrite est élevé (polyglobulie)

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Valeurs normales

Adulte: 0,2 à 2,0% Nouveau né: 2 à 6%

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Valeurs pathologiques: On observe une

augmentation des réticulocytes en particulier dans les anémies hémolytiques aigues ou chroniques, congénitales ou acquises et après traitement d’une anémie ferriprive par le fer on d’une anémie de Biermer par la vitamine B12

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Une diminution des réticulocytes se voit dans l’aplasie ou l’hypoplasie médullaire, lorsqu’il y a épuisement des réserves médullaires (fer et vitamines B12) et au cours du traitement pour diverses néoplasie (chimiothérapie et radiations)

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MERCI POUR VOTRE ATTENTIONS / abdessemed